自噬相关基因在小鼠月经样模型子宫内膜崩解过程中的动态表达

目的探究小鼠子宫内膜崩解过程中自噬相关基因表达的动态变化。方法建立小鼠月经样模型,孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h分别处死小鼠取其双侧子宫组织,通过苏木素伊红(HE)染色观察小鼠子宫组织的形态特征变化,采用蛋白质印迹(WB)检测小鼠子宫内膜崩解过程中LC3B和p62蛋白的表达动态变化,实时定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠子宫内膜崩解过程中Lc3b、p62、Beclin1、Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平变化。结果孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h子宫大体颜色逐渐由浅粉色变为深红色,子宫内膜崩解坏死区域逐渐扩大,24 h时蜕膜化的子宫内膜完全崩解坏死。WB结果显示:孕酮撤退后16 h时,p62的蛋白表达水平较0 h和8 h时显著升高(P<0.05),24 h时p62的蛋白表达水平较其他时间点显著升高(P<0.01);LC3B-Ⅰ蛋白在孕酮撤退后0 h到8 h无显著变化(P>0.05),8 h到24 h其表达量显著降低(P<0.05);孕酮撤退后子宫内膜崩解过程中LC3B-Ⅱ的蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。RT-qPCR结果显示:p62 mRNA水平在孕酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时p62 mRNA水平较8 h和16 h显著降低(P<0.05);Lc3b mRNA水平在孕酮撤退后16 h时较0 h和8 h显著上调(P<0.01),而24 h时Lc3b mRNA水平显著低于撤退后16 h(P<0.01);Beclin1 mRNA水平在孕酮撤退后8 h、16 h和24 h的表达较0 h均显著下降(P<0.05),且撤退24 h后Beclin1 mRNA水平相较8 h和16 h显著降低(P<0.01);Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平孕在酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时的mRNA水平显著低于其他时间点(P<0.05)。结论孕酮撤退后,子宫内膜崩解过程中自噬水平下降,提示自噬参与负调控子宫内膜崩解过程。

L929细胞无血清悬浮驯化及其在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株。将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法制备流产衣原体灭活疫苗。以25μL、50μL、100μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示,当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×10^(5)/mL时,培养72 h后细胞浓度可达到约7×10^(6)/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×10^(6)/mL,接菌量为5.5×10^(4) IFU/mL,加入脂质体2000的量为1.7μL/mL、放线菌酮浓度为0.4μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮培养细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50μL、100μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明,本试验成功驯化出1株L929悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50μL、100μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了技术支持。

“互联网+”背景下高职思政课混合式教学模式构建

“互联网+”教育创新发展能提升我国职业人才教育培养的总体质量,拓展高职育人培养的新路径。文章以思政课教学实践为载体,分析“互联网+”在高职思政课教学方面的应用优势,基于混合式教学模式探究高职院校思政课教学问题及教育不足,并以“互联网+”教育发展为核心提出部分科学的教育问题解决方案,充分发挥混合式教学模式的教育引导优势,有效保证新时期高职思政课教学质量。

脓毒症合并心肌损伤患者TLR4/NF-κB信号通路及其与心肌损伤标志物的相关性

目的探讨脓毒症合并心肌损伤患者Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路与心肌损伤标志物的相关性。方法回顾性选取2020年6月至2022年6月应急管理部应急总医院收治的脓毒症患者84例作为研究对象,根据患者有无心肌损伤分为无心肌损伤组(n=59)和心肌损伤组(n=25)。以酶联免疫吸附试验法检测血清脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽(NT-proBNP)、人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB);以实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量。比较两组血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平,以及PBMC中TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量。以Pearson相关系数分析血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平与TLR4、NF-κB、MyD88相对表达量的相关性。结果心肌损伤组血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平分别为(442.17±85.06)ng/L、(2306.94±417.39)pg/mL、(16.09±3.17)μg/L、(0.43±0.11)μg/L、(11.47±3.75)μg/mL,均高于无心肌损伤组[(374.39±51.82)ng/L、(418.52±112.64)pg/mL、(13.27±3.84)μg/L、(0.24±0.07)μg/L、(2.16±0.41)μg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌损伤组TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量分别为2.73±0.42、2.33±0.38、1.94±0.47,均高于无心肌损伤组(1.68±0.35、1.49±0.24、1.22±0.29),差异均有统计学意义(P<0.05)。经相关性分析,血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB水平与TLR4、NF-κB、MyD88 mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。结论脓毒症合并心肌损伤患者血清BNP、NT-proBNP、h-FABP、cTnⅠ、CK-MB等标志物水平出现明显升高,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关。

增能理论视域下老年教育课程建设的理念优化与实践路径

当前老年教育课程建设的具体实践存在课程目标狭窄化、课程内容休闲化、课程实施松散化等问题。增能理论视域下的老年教育课程建设侧重从老年学习者潜能发挥、能力提升和环境改善等方面对课程建设理念进行优化,在老年教育课程建设的实践中进一步彰显老年教育课程理念的“积极性”、课程内容的“参与性”、老年教育课程师资的“主体性”、老年教育课程资源的“多元性”,以使老年教育课程实施更具实效性,凸显老年教育的时代作用,彰显老年群体的活力。

ATF6在转基因敲除鼠人工诱导蜕膜化模型中的研究

目的利用小鼠人工诱导蜕膜化模型,探讨转录活化因子6(ATF6)在小鼠子宫内膜中的作用机制。方法构建繁育野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠,并构建小鼠人工诱导蜕膜化模型。雌鼠交配后见阴栓第1天记为Day 1。Day 4进行诱导蜕膜化,蜕膜化后48 h和72 h(即Day 6和Day 7)收集小鼠子宫进行相应指标检测,实时荧光定量PCR方法和蛋白质免疫印迹法检测Atf6 mRNA与蛋白质在蜕膜化子宫中的表达情况;免疫组织化学方法检测野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠人工诱导蜕膜化模型中ATF6和催乳素(PRL)在子宫中的阳性信号表达情况。收集人子宫内膜生理周期中不同时相子宫内膜组织,进行石蜡包埋切片,免疫组织化学方法检测ATF6在子宫内膜中的阳性信号表达情况。结果与小鼠未蜕膜子宫相比,Day 6和Day 7蜕膜化子宫中的Atf6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),细胞核内的蛋白水平也显著增高(P<0.05);Day 7时子宫大体形态学显示子宫较粗且均匀。野生型和敲除鼠诱导蜕膜化子宫HE染色显示,绝大部分子宫基质细胞变大变圆,表明诱导蜕膜化的子宫内膜蜕膜化充分;PRL免疫组化染色结果表明,在野生型(Atf6^(+/+))和敲除型(Atf6^(-/-))小鼠蜕膜化子宫内膜中,PRL染色阳性信号分布范围无显著性差异(P>0.05)。不同月经周期时相人子宫内膜组织的免疫组化结果提示,ATF6在月经期和增殖早期的表达水平较高,显著高于其余周期时相(P<0.05)。结论ATF6能够参与子宫内膜蜕膜化,但不是蜕膜化发生的必要条件;ATF6可能通过参与子宫内膜的生理修复过程参与子宫内膜生理周期。

时钟基因Cry1与Bmal1在小鼠子宫内膜生理性修复过程中的表达研究

目的 以小鼠月经模型为基础,探究时钟基因Cry1与Bmal1对小鼠月经期子宫内膜生理性修复过程的影响。方法 通过建立小鼠月经样生理性修复模型,利用苏木素伊红(HE)染色法进行组织形态学观察;利用免疫组织化学(IHC)染色法观察CRY1与BMAL1蛋白在小鼠月经样修复模型中的表达定位;进一步利用蛋白免疫印迹杂交(Western blot)检测CRY1与BMAL1蛋白的表达水平。结果 孕酮撤退后24~48 h子宫大体颜色逐渐变淡,子宫直径由粗逐渐变细。HE染色结果显示,孕酮撤退后24 h蜕膜化区域大部分细胞坏死崩解,且随着时间推移,子宫内膜厚度增加,子宫腔面出现再上皮化,腺体数量明显增多;48 h时,子宫内膜修复完整,基本恢复到正常子宫形态。IHC染色结果显示,CRY1和BMAL1蛋白的阳性染色定位于细胞质和细胞核中,主要集中在细胞核,且阳性信号随着孕酮撤退时间呈现一定差异。Western blot检测结果显示,孕酮撤退24 h后,子宫内膜CRY1蛋白表达显著降低(P<0.05),40 h时表达量相对更低,出现低谷。孕酮撤退后32 h子宫内膜BMAL1蛋白的表达量相对更低,显著低于24 h和48 h(P<0.05),与CRY1蛋白相比,低谷提前8 h出现。结论 时钟基因在子宫内膜呈现规律性的周期性表达,提示时钟基因及其信号通路可能参与子宫内膜生理性修复过程。

IVF-ET术后宫颈妊娠同时合并卵巢妊娠一例

宫颈妊娠同时合并卵巢妊娠是一种特殊类型的异位妊娠,其发生率远低于输卵管妊娠,但风险极大,诊治不及时可能造成严重不良后果,需尽早识别,力争做到早诊断、早治疗。近年随着辅助生殖技术的快速发展,宫颈妊娠同时合并卵巢妊娠的发生率均较前升高,但彩色超声技术的进步有助于此种类型异位妊娠的早期诊断。现回顾中国人民武装警察部队特色医学中心妇科2022年收治的1例体外受精-胚胎移植术后宫颈妊娠同时合并卵巢妊娠的病例,该患者同时发生两种类型的异位妊娠,极为罕见和特殊,由于该病例早期诊断及时,通过个体化的药物治疗+宫颈管搔刮,避免了有创手术、动脉栓塞等操作,做到了患者副损伤、费用及痛苦的最小化,结局满意。

面向喷头空行程长度最小化的多零件优化布局方法

多零件在打印腔室中的布局往往直接影响熔融沉积批量制造的效率和能力。同时,喷头空行程长度对上述效率和能力具有显著的影响。为此,提出了一种面向空行程最小化的多零件优化布局方法,通过优化地减少零件之间喷头的空行程长度来提升熔融沉积批量制造的效率以及打印腔室可容空间。首先,为兼顾空行程长度计算的效率(如加速几何干涉检测)和计算的准确度,以层厚为基准,构建每个零件相应的、逐层堆叠的体素代理模型。然后,基于贪心策略和粒子群优化算法,以逐对累积的方式确定每个体素代理模型的放置顺序和放置位置。最后,将体素代理模型置换为对应的零件,获得输入零件集紧凑的布局。在一组形状复杂的零件集上开展实验。结果表明:在相同的衡量标准下,该方法相比于Magics空行程总量约减少了31.17%。与现有的商业化软件中的布局功能相比,该方法在实施批量制造形状复杂零件集时具有可显著减少喷头空行程长度总量的巨大潜力。

甘肃高寒牧区藏羊电刺激采精实验

为研究电刺激采精技术能否在甘肃高寒牧区藏系羊繁殖中推广应用,该技术是否对公羊精液品质和采精量有影响,项目课题组在甘肃省天祝县旦马乡进行了牧区藏羊种公羊电刺激采精实验。选择本土选育的欧拉型藏羊种公羊,配种期每日每只采精2次,即:首日(标注为d1)早上采用传统的假阴道采精法采精,下午采用电刺激法采精,次日(标注为d2)早上采用电刺激法采精,下午采用传统的假阴道采精法采精,依次不同采精方法交叉采精,减少误差,连续采精6d,及时检查采精量及精液密度、精子活力等品质。实验结果表明,甘肃天祝牧区藏羊种公羊电刺激采精所得精液量均在0.80 mL~0.96 mL之间,符合藏系羊正常精液量,平均精子活力均在0.80以上,平均精液密度均“中”以上,精液品质符合人工授精精液品质要求,可应用于藏羊繁殖生产实践。

藏羊电刺激采精和人工授精技术

由于藏羊特殊的品种特性,高海拔严寒地区养殖适应性好,养殖成本相对其他类型羊较低,但自然交配情况下,空怀率高,繁殖率低。为克服藏种羊胆小易惊,调教不易,采精困难等不利因素,我们采用电刺激法促使种公羊被动排精,很大程度上降低了采精难度,提高了采精数量,在母羊集中发情季节,优秀种公羊个体可授配母羊500只以上,同时引进药物诱导母羊同期发情等技术进行人工授精,大大提升了藏羊繁殖性能,加速了我县藏羊引种改良进程,提高藏羊养殖经济效益。

牦牛病毒性腹泻病研究进展

牦牛感染牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)后常发生胃肠炎等消化系统疾患和呼吸系统疾患、繁殖障碍,造成机体损伤,给牦牛产业发展造成一定影响。基于5'-UTR的差异将BVDV分为BVDV-I和BVDV-II两种基因型,牦牛源BVDV的主要基因型为BVDV-1型;根据BVDV对宿主细胞的致病性,分为致细胞病变型(Cy-topathogenic,CP)和非致细胞病变型(Non-cytopathogenic,NCP)两个生物型,牦牛源BVDV既有CP型又有NCP型,且这两种生物型能相互转化。牦牛生活的高原地区风、鸟类的迁徙等因素可能都会导致牦牛BVD传播范围广泛,牛群中大量的BVDV携带者和牦牛特殊而又复杂的生态系统导致了BVDV种间传播的巨大潜力,影响着牦牛产业的健康发展和养殖经济收益。针对本病在牦牛群中的感染流行等情况未发现相关详细的研究报道,笔者就牦牛BVD病原学、流行病学调查、实验室诊断、综合防治等方面研究进展情况进行整理,供同仁在研究和防控中参考借鉴。

牛羊梨形虫病及媒介蜱综合防治药物筛选

[目的]天祝县莫客片一带牛梨形虫病发病率达24.6%,病死率28.6%;羊发病率34.2%,病死率27.5%,为了有效防控牛羊梨形虫病,项目组做了药物对比实验,筛选筛选药效长、低毒、安全、广谱药物。[方法]实验组从蜱控制、梨形虫病预防加治疗相结合综合防控入手,分别作3组药物试验对比。[结果]显示施可诺注射液药效长达34 d~38 d,敌杀死19 d~22 d之间,蒿甲醚注射液预防效果比其他组较佳,治愈率≥90%以上,比对照组高出18.6~22.2个百分点。[结论]用敌杀死环境灭蜱,同时注施可诺注射液控制蜱感染,用蒿甲醚注射液或盐酸咪唑苯脲,预防和治疗梨形虫病,能有效降低当地牛羊梨形虫病的发病率和病死率。

内镜下黏膜切除术治疗结肠粗蒂性息肉的临床效果及复发影响因素

目的分析内镜下黏膜切除术治疗结肠粗蒂性息肉的临床效果及复发影响因素。方法回顾性分析2018年5月—2021年3月收治的80例结肠粗蒂性息肉的临床资料,根据手术治疗方法不同,分为对照组38例和研究组42例。对照组行内镜下高频电切术,研究组行内镜下黏膜切除术。对比两组临床疗效、手术指标及并发症情况;影响患者复发的危险因素采用多因素Logistic回归分析。结果研究组临床总有效率高于对照组(P<0.05)。研究组手术时间、胃肠功能恢复时间、住院时间均短于对照组,术中出血量少于对照组(P<0.01)。研究组并发症发生率低于对照组(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,年龄、息肉大小、手术方式、组织学类型是影响结肠粗蒂性息肉患者复发的独立危险因素(P<0.01)。结论内镜下黏膜切除术治疗结肠粗蒂性息肉的临床效果显著,并发症少,安全性高。对于有结肠粗蒂性息肉复发危险因素的患者,需注意术后定期复查。

穿刺活检前列腺癌119例病理形态、Gleason分级及预后分组

目的依据2014年国际泌尿病理协会(ISUP)修订的前列腺癌Gleason分级系统和以预后区别为基础的新的前列腺癌分级分组系统观察前列腺癌Gleason各分级的组织形态特征及了解预后分组情况。方法收集119例前列腺穿刺活检确诊为前列腺癌的标本,回顾性复习HE组织切片,观察病理学特点并依据2014年ISUP修订的前列腺癌Gleason分级系统和以预后区别为基础的新的前列腺癌分级分组系统进行分级和分组。结果 119例前列腺癌中以Gleason 3级为主要或次要结构的73例(61.3%),以Gleason 4级为主要或次要结构的104例(87.4%),以Gleason 5级为主要或次要(最高)结构的21例(17.6%)。前列腺癌预后分组结果是1级组12例(10.1%),2级组23例(19.3%),3级组37例(31.1%),4级组27例(22.7%),5级组20例(16.8%)。结论前列腺癌以Gleason 4级结构最多见且常与3级结构混合存在;Gleason 4级和5级的正确病理诊断对预后分组及选择治疗方式意义重大。更简化的基于Gleason评分的新的分级分组系统可作为Gleason分级系统的补充与其联合应用,将有助于对前列腺癌进行更精确规范的分级,准确反映肿瘤预后的差异。

三种根尖诱导剂的临床疗效比较

目的比较三种药物用于根尖诱导成形术的临床效果。方法选取8～14岁患有牙髓感染、牙髓坏死或根尖周炎的患者48例共年轻恒牙60颗，根据就诊顺序随机分为三组。分别用三氧化物多聚体（miner?altrioxideaggregate，MTA）（MTA组）、Vitapex（Vitapex组）、氢氧化钙糊剂（对照组）进行根尖诱导。术后3个月、6个月、12个月复查，比较其临床效果。结果术后3个月和6个月，MTA组有效率明显高于Vitapex组和对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；术后12个月，MTA组有效率明显优于对照组（c2=3.96），差异具有统计学意义（P＜0.05），然而MTA组和Vitapex组、Vitapex组和对照组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论与氢氧化钙和Viatapex比较，MTA用于根尖诱导成形术的效果更好。

互联网时代下应用BOPPPS教学法提高高校教学质量

互联网与智能手机的广泛使用,已经对高校教育教学产生深远的影响,如何在新形势下激发学生的学习热情,为学生建立终生学习的习惯奠定基础,教学方法的改革必须加以重视。本文从探究式教学是互联网新形势下培养创新人才的客观需要和采用"BOPPPS"教学法,即导言、学习目标、前测、参与式学习、后测和总结六步教学法,提高高等教育教学质量两个方面介绍了笔者对教学方法改革的思考和建议。

从化工热力学教学谈“节能减排”意识的培养

本文提出了化工热力学教学中如何强化"节能减排"意识的措施:在绪论课教学中引导学生树立"节能减排"的意识;教学内容始终贯穿"节能减排"理念;注意与后续课程的衔接,在实习及毕业环节教学中继续强化"节能减排"的意识,促进理论联系实际,注重对学生综合能力的培养。通过教与学双方共同努力,取得了良好的教学效果。

复方银花解毒颗粒治疗流行性感冒风热证的随机对照临床研究

目的观察复方银花解毒颗粒治疗流行性感冒(简称“流感”)风热证的临床疗效和安全性。方法采用多中心、随机、双盲、阳性药对照临床试验设计,将158例诊断为流感风热证的受试者随机分为试验组(n=78,口服复方银花解毒颗粒)和对照组(n=80,口服磷酸奥司他韦胶囊)。观察用药前后受试者临床疗效、退热起效时间、中医证候疗效及安全性。结果治疗结束后,试验组流感临床痊愈率为23.19%,高于对照组8.97%,差异有统计学意义(P <0.05),高于对照组;试验组流感临床总有效率(98.55%)高于对照组(93.59%),但差异无统计学意义(P> 0.05)。试验组退热起效时间(4.08 h)短于对照组(6.00 h),但差异无统计学意义(P <0.05)。试验组中医证候疗效痊愈率(24.64%)高于对照组(10.26%),差异有统计学意义(P <0.05)。应急药物使用比例试验组(22.22%)与对照组(23.08%)差异无统计学意义(P> 0.05)。结论复方银花解毒颗粒治疗流感风热证安全有效。

刺激计划与企业融资——基于“四万亿”政策的理论分析与实证检验

中国式分权情境下,地方政府对于中国宏观经济具有重大影响。本文利用 2008 年四万亿政策这一准自然实验,采用双重差分法探究了政策刺激下,地方政府如何利用刺激政策来影响当地企业的债务融资。不同于以往基于整体经济情况研究四万亿政策效应的文献,本文结合地方政府干预程度与企业异质性对四万亿政策影响的传导机制进行了更深入的探究。实证结果发现:(1)四万亿政策下,国企获得了更多的债务融资;(2)基于金融危机而出台的四万亿政策,其政策效应弱于金融危机带来的冲击效应,因而导致金融危机期间,受经济冲击越大的城市,当地企业的债务融资情况越差;(3)金融危机冲击之下,四万亿刺激政策期间,保增长压力较大的城市,会更加激进地借助中央政策,显著地推高国企债务融资;(4)四万亿政策期间,保增长压力越大的地区,其政府干预程度越大,越有能力改善当地企业债务融资情况。本文的研究发现增进了人们对中央政策通过地方政府影响经济的传导机制的理解。