基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测方法的建立

[目的]本研究将CRISPR/Cas12a系统与反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)结合,拟建立一种基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)快速检测方法。[方法]分析不同基因型PRRSV全基因组序列,在3′-UTR端保守区设计重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)引物、crRNA及DNA报告底物分子,筛选RT-RAA最佳引物对。表达纯化AsCas12a蛋白,并以质粒为标准品,经RT-RAA扩增后,将产物加入CRISPR/Cas12a系统,建立PRRSV的CRISPR/Cas12a-RT-RAA检测方法,分别以PRRSV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸为模板验证建立方法的特异性,以不同浓度的pMD18T-PRRSV为模板验证建立方法的敏感性。以5.62×10^(6)、5.62×10^(3)、5.62拷贝数/μL的质粒为模板进行重复性试验,最后进行临床效果评价,将所建立的方法与实时荧光定量逆转录PCR方法进行比较。[结果]本研究成功表达并纯化获得具有良好剪切活性的AsCas12a蛋白,蛋白分子质量大小为196 ku;所建立的CRISPR/Cas12a-RT-RAA方法的检测下限可达5.62拷贝/μL;该方法具有良好的特异性,可特异性检测出PRRSV,不能检出其他猪病病毒PCV2、PEDV、CSFV和PRV,并具有良好的重复性。应用该方法对121份猪组织样品进行检测,与实时荧光定量逆转录PCR的阳性符合率为93.75%,阴性符合率为99.05%,总符合率为99.17%。[结论]本研究成功建立基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的PRRSV快速检测方法,该方法特异性强、灵敏性高、重复性好且不依赖复杂设备,可在现场和基层实验室使用。

新型竹鼠源阿卡斑病毒对山羊的致病性

旨在观察竹鼠源阿卡斑病毒(AKAV)对山羊的致病性,本研究以竹鼠源阿卡斑病毒GXLCH16-70株分别经颅内、皮下和静脉感染山羊,观察山羊临床症状、病毒血症、剖检病变、组织病理和病原组织器官分布等指征。结果显示,颅内接种组山羊攻毒第4~9天后,出现间歇性痉挛、抽搐等神经症状;皮下和静脉接种组的山羊于接毒第3~8天出现腹泻、眼角分泌物增多等症状;接种GXLCH16-70的所有山羊于感染第2~10天均出现病毒血症,感染第8天后均产生AKAV中和抗体,且一直持续到第21天。颅内组剖检可见大脑非化脓性脑脊髓炎,肺充血出血、脾边缘有出血点等病理变化。病理组织学检查显示,颅内组呈现为脑膜和皮质血管周围见有多层胶质细胞等炎性细胞浸润,形成“血管套”样结构。荧光定量RT-PCR对脑组织、脊髓等样品进行的病原检测结果显示,颅内组几乎在大脑的所有区域都检测到AKAV-S RNA片段;同时,静脉组和皮下组在部分脑组织和脊髓中也能检测到病原。结果表明,新型竹鼠源AKAV GXLCH16-70株经人工感染可导致山羊全身多器官和组织系统性病变,并且可引起山羊脑脊髓炎。

基于阴火理论探讨慢性胰腺炎“炎⁃癌转化”与防治策略

慢性胰腺炎是发生胰腺癌的独立危险因素,高度重视慢性胰腺炎“炎-癌转化”并进行干预具有重要意义。基于李东垣的阴火理论,认为阴火主要是指脾胃气虚所致的气郁郁火及湿热之邪,是慢性胰腺炎“炎-癌转化”的关键。从阴火理论出发探讨中医药干预慢性胰腺炎“炎-癌转化”,需把握其动态变化,紧扣阴火这一核心环节,健脾益气、因势利导、攻伐有道,才能取得临床效益的最大化。

基于互联网模式下社区护士实训PICC实践与效果评价

目的研究基于互联网模式下社区护士实训经外周静脉置入中心静脉导管(PICC)的效果。方法选择2022年1月至2023年1月社区护士30名进行观察,按随机数字表法进行分组,分别15例,研究组采取基于互联网模式下PICC实训,对照组接受常规教学,比较各组实训结果。结果研究组优秀率、良好率均高出对照组,但合格率及不合格率较对照组更少,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组满意度86.67%高出对照组53.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组在各项考试成绩上均较对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组并发症13.33%较对照组53.33%更低,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组主动服务、护理技能、行为规范、安全改进的评分均高出对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于互联网模式下PICC实训的效果更好,能够有效提高社区护士的考核成绩,并丰富其理论知识,提升操作能力,减少并发症,护士满意度高,值得推广。

发酵酸鱼中乳酸菌的鉴定及特性分析

该研究以分离自酸鱼发酵后期的乳酸菌菌株LP224为研究对象,采用形态学观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行菌种鉴定,采用K-B药敏纸片扩散法和聚合酶链式反应(PCR)法对其耐药性和抗性基因进行检测,并研究其生长特性及耐受性。结果表明,菌株LP224被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其对头孢曲松、链霉素、环丙沙星、磺胺异噁唑、万古霉素、林可霉素等6类15种抗生素耐药,基因组DNA检测出ermC和tetG2种抗性基因,而细菌质粒未检测到抗性基因,说明该菌株相对安全。菌株LP224经55℃水浴处理30 min后存活率为35.06%;p H2.5环境下存活率为52.60%;0.3%胆盐浓度下存活率为31.67%,说明该菌株具有较强的耐热、耐酸、耐胆盐能力。

苦荞可溶性膳食纤维素营养饮品研制

以苦荞可溶性膳食纤维(SDF)和黑苦荞米为原料,运用模糊数学、感官评价及正交试验方法得到苦荞可溶性膳食纤维营养饮品的生产工艺,结果表明:最佳配比为苦荞米焙炒温度110℃、时间3 min、炒制苦荞米与浸取热水的比例1∶6.67、苹果多酚0.10%、羧甲基纤维素钠0.08%。研制出的苦荞可溶性膳食纤维饮品营养丰富、风味浓郁。

石榴皮提取物对大豆油的抗氧化作用研究

以大豆油为研究对象,考察石榴皮提取物对大豆油的抗氧化作用。采用Schaal烘箱法加速大豆油的氧化,研究石榴皮提取物对大豆油酸价、过氧化值和硫代巴比妥酸值的影响及抗氧化动力学特性,并与GB 2760—2014中允许添加的4种天然抗氧剂迷迭香提取物、茶多酚、竹叶提取物、甘草提取物和2种人工合成抗氧化剂BHA、BHT进行比较。结果表明:迷迭香提取物和石榴皮提取物具有很好的抗氧化效果,抗氧化效果最差的是BHT;石榴皮提取物对大豆油的抗氧化效果随着添加量的增加而增强。石榴皮提取物具有作为大豆油抗氧化剂的潜力。

薄皮核桃油脂性质、营养及稳定性研究

依据相关标准对薄皮核桃油脂的酸价、磺价、平均分子量及油脂氧化值(POV)进行了测定,利用气相色谱法对其油脂的脂肪酸组成及含量进行了分析.实验结果显示:薄皮核桃油脂的皂化值为184. 3、酸价0. 23 g KOH/mg、碘价157 g/100 g,抗氧化剂BHA对其氧化稳定作用明显,不饱和脂肪酸中,人体必需脂肪酸亚油酸含量高达60. 2%.

阿卡斑病毒荧光RT-RAA快速检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速检测阿卡斑病毒(AKAV)的分子生物学检测方法,本研究通过比较分析AKAV基因组序列,在S基因保守序列区域设计重组酶介导等温扩增(RAA)引物及探针,筛选最佳引物对,然后对RAA反应温度、引物浓度以及探针浓度进行优化,建立了AKAV的荧光逆转录重组酶介导的核酸等温扩增(RT-RAA)快速检测方法。结果显示,所建立的荧光RT-RAA方法在42℃反应20 min即可快速检测出AKAV,检测下限可达6.26×10^(1)copies/μL,与牛病毒性腹泻病毒、蓝舌病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒等无交叉反应,并具有良好的重复性。对37份临床样品进行检测,阳性检出率为43.24%,与RT-qPCR检测结果符合率为94.59%。结果表明,建立的AKAV荧光RT-RAA快速检测方法具有快速、特异、灵敏、稳定等特点,可为AKAV的现场快速检测提供可靠方法。

经肠超声内镜检查对直肠癌分期的诊断价值

目的探讨经肠超声内镜检查在直肠癌分期中的诊断价值。 方法回顾性分析2015年1月至2017年1月行超声内镜检查和手术的204例直肠癌患者的病历资料，分成直接手术组155例和术前新辅助放射化学治疗（CRT）＋手术组49例，比较两组术前超声内镜检查分期与术后病理分期情况。统计学方法采用kappa检验。 结果与术后病理相比，直接手术组超声内镜检查判断直肠癌浸润深度的准确率为81.9%（127/155），诊断Tis、T1、T2、T3和T4的准确率分别为3/4、11/13、82.1%（32/39）、91.1%（41/45）和74.1%（40/54），一致性较好（kappa值为0.751，P〈0.01）；术前CRT＋手术组超声内镜检查判断直肠癌浸润深度的准确率为34.7%（17/49），诊断T2、T3和T4的准确率分别为1/13、2/7和14/16，一致性较差（kappa值为0.107，P＝0.850）。与术后病理相比，直接手术组超声内镜检查评估区域淋巴结转移的准确率为70.3%（109/155），诊断有和无区域淋巴结转移的准确率分别为40.7%（24/59）和88.5%（85/96），一致性较差（kappa值为0.317，P〈0.01）；术前CRT＋手术组超声内镜检查评估区域淋巴结转移的准确率为51.0%（25/49），诊断有和无区域淋巴结转移的准确率分别为5/11和52.6%（20/38），一致性较差（kappa值为0.014，P＝0.911）。 结论超声内镜检查在直肠癌术前分期中能精准反映组织浸润深度和淋巴结转移情况，对临床制订治疗方案具有指导意义。对于已行CRT的患者，超声内镜检查的诊断及分期价值有限。

4种降低牙科手机油性湿包率的方法比较

目的:比较经4种方法处理后的牙科手机油性湿包率,为临床选择最合适的处理方法提供依据。方法:手机注油后按处理方法不同分为4组:倒置。05h后包装、压力气枪吹气10s后包装、包装袋内垫双层吸水纸包装、干燥柜干燥5h后包装法。选择品牌为NSK高速涡轮四孔手机,经Steelco清洗机清洗消毒、压力气枪干燥、Nsk手机保养系统(以下简称注油机)注油后,采取4种方法处理包装各500支,高压蒸汽灭菌后,比较油性湿包情况。结果:4组处理方法对降低手机油性湿包之间的差异有统计学意义(P<0.001)。手机注油后在纸塑包装袋的纸面垫双层吸水纸和干燥柜干燥5h后包装法,在高压蒸汽灭菌后降低油性湿包率效果最好。其4组处理方法的油性湿包率分别为:倒置0.5h后包装19.80%,高压气枪吹气10s后包装10.60%、纸塑包装袋的纸面垫双层吸水纸包装1.20%、干燥柜干燥5h后包装0.80%。结论:手机注油后在纸塑包装袋的纸面垫双层吸水纸和干燥柜干燥5h后包装法在高压蒸汽灭菌后降低油性湿包率的效果明显优于另2组处理方法。

石榴皮多酚清除亚硝酸盐及阻断亚硝胺合成的影响

目的:选取石榴皮提取物和4类GB2760允许添加的抗氧化剂(茶多酚、甘草提取物、竹叶提取物和Vc),研究其对亚硝酸盐的清除作用及亚硝胺的阻断作用,并初步分析石榴皮提取物与亚硝酸盐反应的机制。方法:采用分光光度法测定在不同浓度、不同时间及不同温度下,石榴皮提取物和4种抗氧化剂对亚硝酸盐的清除作用和亚硝胺阻断作用;用HPLC测定石榴皮提取物与亚硝酸盐反应。结果:石榴皮提取物对亚硝酸盐有一定的清除效果,随着浓度和反应时间的增加,清除能力增强。与其余4种抗氧化剂相比,清除能力由强到弱为茶多酚>Vc>石榴皮提取物>竹叶提取物≈甘草提取物。石榴皮提取物阻断亚硝胺的能力随浓度和时间的增加,阻断能力增强。在0、25、37℃和100℃下,都体现出较强的亚硝酸盐清除能力和亚硝胺阻断能力,升温有利于石榴皮多酚对NDMA的阻断作用。结论:石榴皮提取物具有较强的亚硝酸盐清除能力和亚硝胺阻断能力,具有开发为新型食品添加剂的潜力。

Direct Evidence for the Effect of Intermolecular Hydrogen Bonding on Organogels

In order to get direct evidence for the effect of intermolecular hydrogen bonding on the organogels, one arnide group in N-（3, 4, 5-octyloxybenzoyl）-N＇-（4＇-aminobenzoyl）hydrazine（D8） was replaced by a Schiff base group, forming N-（3,4,5-octyloxybenzoyl）-N＇-（4＇-amidobenzoyl） acylhydrazone（T8SchA）. D8 and T8SchA organogels in cyclohexane show the same hexagonal columnar structure. And the hydrogen bonding was demonstrated to be still interacting in the organogels. However, although the molecular geometry of D8 was well retained in T8SchA, the molecular dipole moment of T8SchA is bigger than that of D8 due to the reduction of the number of hydrogen bonds. Thus, the decreased gelling stability of T8SchA compared to that of D8 can only be attributed to the reduction of the number of intermolecular hydrogen bonds, which provides direct evidence that intermolecular hydrogen bonding plays an important role in stabilising organogels.