猪只健康与非洲猪瘟病毒感染的关系

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起,2018年传入我国。ASFV流行毒株不断变异,加之缺少有效疫苗,给我国ASF防控带来极大挑战。免疫接种动物的基础健康程度或免疫力水平可显著影响疫苗的使用效果,基础健康程度或免疫力水平较差的猪只感染ASFV后,其感染进程更加剧烈,预后更差。而使用营养干预如饲喂喷雾干燥猪血浆,或增强免疫力措施如移植疣猪粪便微生物群,可在一定程度上提高猪群的ASFV抵抗水平,两者紧密联系。提升猪只健康水平,将是有效防控ASF的根本。本文针对猪只健康状况或免疫力水平影响ASF疫苗免疫和病毒感染的相关研究数据进行综述,以期为我国ASF疫苗研究及防控政策制定提供参考。

非洲猪瘟疫苗安全性评价部分关键指标研究现状与思考

非洲猪瘟疫苗研发是业界公认的世界级难题。近年来,随着现代生物技术的不断发展,非洲猪瘟疫苗尤其是弱毒活疫苗的实验室研究,再次掀起新一轮热潮并取得积极进展。但是针对候选疫苗的安全性评价指标,尤其是在接种试验、怀孕母畜安全性试验、疫苗水平传播试验和毒种毒力返强试验等方面,尚没有统一的参考标准,这在一定程度上给当前的非洲猪瘟疫苗客观评价工作带来不便。本文对国内外发表文献中涉及的非洲猪瘟疫苗安全性评价部分关键指标,如疫苗接种后临床表现、水平传播能力、毒力返强能力、对怀孕母猪安全性等的研究情况进行了梳理总结,客观概述了相关研究进展以及取得的成果与存在的问题,以期为国内相关研究人员提供参考。

实验室非洲猪瘟病毒感染途径与感染剂量研究现状

非洲猪瘟病毒(ASFV)可以通过直接、间接接触感染的猪只传播,感染途径多样,致病机制复杂。在ASFV研究特别是疫苗研究中,ASFV的感染途径和感染剂量尚无国际标准,这不利于研究工作的进一步开展,为此对国内外的ASFV感染途径和剂量研究进行了综述。研究中主要的感染途径包括口腔感染、鼻腔感染、口鼻同时感染、模拟同居感染、肌肉注射感染,其中口鼻接种是研究常用的感染途径。但由于口鼻接种存在的不确定性因素太多,目前大部分研究特别是疫苗的安全性和有效性评价研究以肌肉注射方式为主,其只需极少剂量就可以发生感染。在ASFV感染研究中,研究者设置了不同的攻毒剂量来评价疫苗的安全性和有效性,以选择出合适剂量更好地模拟临床感染,从而获得真实、合理的试验数据,得出可靠的试验结论。

非洲猪瘟基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒研究现状及思考

基因重组在非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组间广泛存在,它是造成ASFV遗传多样性的原因之一。ASFV基因Ⅱ型毒株2018年传入我国,2021年国内又报道发现基因Ⅰ型毒株和基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒。我国分离的ASFV基因Ⅰ型/Ⅱ型重组毒嵌合了两个基因型序列并部分整合了二者的生物学特性,毒力与基因Ⅱ型强毒株相当,某些致病指标甚至更高;基因Ⅱ型减毒活疫苗株不能对该重组毒株产生有效保护。该重组毒株在国内的流行演变可能会显著影响ASFV的进化方向,并对ASFV疫苗研究带来新的挑战。本文通过对国内ASFV基因Ⅰ型/Ⅱ型重组病毒进行综述,就相关研究进展进行总结归纳,以期为我国ASF防控提供参考。

尼帕病毒病疫苗研究进展

尼帕病毒病是一种人兽共患病,1998年在马来西亚首次出现。引起该病的病原为尼帕病毒,它是一种单负股RNA病毒,可感染猪、马、犬、猫等多种动物,对人的致死率可达75%以上。目前,尚无有效疫苗上市。该病毒的表面糖蛋白是目前疫苗研究的主要靶标。以此为靶标,已有多种候选疫苗在不同动物模型中表现出良好的免疫效果,其中亚单位疫苗、重组活载体疫苗和mRNA疫苗是当前研究热点,已有3种相关人用候选疫苗进入临床试验。目前尼帕病毒病兽用疫苗研究进展缓慢,而兽用疫苗的使用可以有效预防病毒的跨种传播,符合“同一健康”理念,因此应加大兽用疫苗的研发力度。本文对尼帕病毒病不同类型疫苗相关研究进展进行了综述,并探讨了疫苗研究中的问题,以期为尼帕病毒病疫苗研究提供参考。

基于人机协同的线上线下混合式教学实证研究

人与智能设备的协同工作模式将会成为未来教育发展的重点,改变现有的传统教学模式。本文从我国的人机协同混合式教学的现状入手,以《网络攻防》课程教学为例,从课前、课中、课后三个阶段,“学-验-训-思”四个方面构建了人机协同的线上线下教学模式,并在2020级信息安全专业的学生中开展了为期一学期的课堂教学实践,取得了优良的教学效果。

不同脑小血管病负荷评分与伴无症状腔隙的脑小血管病患者认知功能的关系

目的 探讨不同脑小血管病(CSVD)负荷评分与伴无症状腔隙的CSVD患者认知功能的关系。方法 纳入2021年7月—2023年10月就诊于潍坊市人民医院神经内科的128例伴无症状腔隙的CSVD患者,运用蒙特利尔量表(MoCA)、CSVD总负荷评分和改良负荷评分统计受试者的认知功能和CSVD负荷,分为认知障碍组(MoCA<26分)和无认知障碍组(MoCA≥26分),比较两组患者的人口社会学信息、血管病危险因素及CSVD负荷评分的差异。采用线性回归分析MoCA评分与两种CSVD负荷评分的关系,采用趋势检验分析伴无症状腔隙的CSVD患者认知障碍的发病趋势。结果 研究共纳入伴无症状性腔隙的CSVD患者128例,其中认知障碍组68例(53.1%),无认知障碍组60例(46.9%),两组患者人口社会学信息及血管病危险因素差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者的CSVD总负荷评分和改良负荷评分比较均存在统计学差异(P<0.05)。Spearman秩相关分析显示,CSVD总负荷评分和改良负荷评分均与MoCA评分呈负相关(P<0.001)。线性趋势χ2检验分析显示,伴无症状腔隙的CSVD患者认知障碍发病风险随CSVD改良负荷评分增加而增加(Ptrend<0.05),该发病风险与CSVD总负荷评分间趋势分析无统计学意义(Ptrend=0.069)。结论 CSVD总负荷评分和改良负荷评分均可用于筛检伴无症状腔隙的CSVD认知障碍患者。改良负荷评分可能在识别认知障碍高风险患者方面更具优势。

形成性评价在临床病理科住院医师标本取材中的应用探索

目的 探索形成性评价在临床病理科住院医师标本取材中的意义和效果。方法 自制《住院医师取材质量形成性评价表》,评分标准包括大体描述、材块切取和记录和大体照相三个指标,根据正确病例比率分为优(比率≥90%)、良(比率≥75%)、中(比率≥60%)和差(比率<60%)四个档次。同时指导医师及时对住院医师进行反馈,住院医师根据反馈意见整改。每月评估1次,连续评估6个月,收集数据并分析总结。结果 6个月共收集42份住院医师取材质量形成性评价表,评估807例标本。住院医师取材质量形成性评价表中完全正确率有逐渐升高的趋势,基本正确率有逐渐下降的趋势,错误仅为个别现象,错误率有逐渐下降趋势。取材质量优31份,良8份,中2份,差1份。每月补取率2%左右。结论 形成性评价可以对住院医师的标本取材质量进行量化,发现存在的问题并改进,能够逐步提高其取材水平和质量,从而增强培训效果。

2021年~2022年我国猪盖塔病毒流行情况调查及其E2基因序列遗传变异分析

为了解2021年~2022年我国猪盖塔病毒(GETV)的流行现状和遗传变异情况,本研究对我国16个省份采集2512份临床样品,采用荧光定量RT-PCR方法进行GETV的检测,按照省份和地区进行GETV流行病学调查分析;采用RT-PCR方法对部分GETV阳性样品经PCR扩增E2基因并连接至p MD18-T载体并测序,利用DNAStar软件分析E2基因及其编码氨基酸序列与GETV参考株相应序列的同源性及其氨基酸变异情况;利用MEGA6.0软件构建E2基因的进化树,分析GETV的基因型及遗传进化关系。结果显示,7个省份猪群样品中均检测出GETV阳性样品,阳性率为3.34%(84/2512)。其中,陕西省和黑龙江省为首次在猪中检测到GETV。不同生长阶段猪中,仔猪GETV的检出率最高,达9.52%。同源性分析显示,获得的32个猪源GETV E2基因序列之间的同源性为98.3%~100%,与马来西亚GETV MM2021株相应基因序列的同源性为94.4%~94.9%。氨基酸序列变异分析显示,与参考株相比,本研究测序的E2蛋白有9个氨基酸位点只出现于猪源GETV。遗传演化分析显示,32个GETV株均属于III亚群,与III亚群内早期中国M1株、韩国QIAG9301株、日本Kochi等病毒株相比,本研究鉴定的GETV形成了新的进化分支。本研究揭示了我国当前猪群中GETV的感染现状及流行株的遗传变异情况,为该病毒的分子生物学研究和相关疫病防控策略的制定提供基础数据和参考依据。

髋关节置换术病人出院准备服务实践研究进展

对髋关节置换术病人出院准备服务的评估工具、计划制定、实施过程、成效评价进行综述,并对现存问题提出建议,以期提高临床实践者的出院准备服务知识水平,为髋关节置换病人出院准备服务的发展提供参考。

同频组网的医院无线零漫游网络建设

介绍了某医院基于同频组网的分场景无线零漫游改造方案,无线网络整体仍采用集中式管理的AC+AP架构,内外网采用同一套物理AP实现WLAN信号覆盖,通过分别设置不同的SSID及虚拟局域网实现内外网业务的隔离。该方案实现了医院医疗业务和互联网无线网络全面覆盖,同时网络质量显著提高,且通过企业微信统一认证实现了医院教职工互联网一键接入,可以满足未来较长时间内无线网络业务的发展要求。

mRNA疫苗递送系统研究进展

与传统疫苗相比,mRNA疫苗具有易于编译、免疫原性高、安全性强、生产成本低等优点,而将mRNA高效递送至细胞并成功表达,是mRNA疫苗发挥作用的关键环节,也是mRNA疫苗研发的主要瓶颈与痛点。因此筛选经济高效的核酸递送系统对于mRNA疫苗研发至关重要。目前,关注较多的核酸递送系统主要包括物理递送、纳米脂质体递送、聚合物递送、外泌体递送和阳离子乳剂递送等。物理递送主要是通过物理方法使裸mRNA直接穿过细胞膜进入细胞,纳米脂质体、聚合物、外泌体和阳离子乳剂等是以自身作为递送载体保护mRNA,从而提高递送效率、减少免疫反应。笔者基于mRNA疫苗最新研究进展,总结概述了不同递送方法的应用前景和局限性,并对其研究前景进行展望,以期为新型递送系统研发提供理论基础,促进mRNA疗法的临床应用,为更多疾病的预防和治疗提供新的mRNA疫苗解决方案。

天然产物库中体外颉颃A型塞内卡病毒化合物的筛选及作用途径研究

【目的】寻找对A型塞内卡病毒(SVA)具有抑制活性的天然产物,并深入研究其颉颃途径。【方法】将天然产物浓度统一稀释至10μmol/L,与荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)相结合,在天然产物小分子库中筛选出具有荧光素酶抑制活性的化合物,采用实时荧光定量RT-PCR方法验证其活性,通过乳酸脱氢酶(LDH)法进行细胞毒性试验确定最大无毒浓度,结合病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR、Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)等技术,在病毒感染周期的不同阶段,对其颉颃SVA的效果及途径进行研究。【结果】通过初筛,从136种天然产物中筛选出莫能霉素钠盐、孕酮、叶下珠次素、4-羟基德里辛和2-甲基雌酮5种能体外颉颃SVA的化合物。进一步通过实时荧光定量RT-PCR复核验证和细胞毒性检测,筛选出一种能体外颉颃SVA的天然产物——孕酮。与空白对照组相比,其在体外可导致SVA mRNA表达水平极显著下降(P<0.01),最大无毒浓度达50μmol/L。进一步研究表明,孕酮能在感染后8、12、24、36 h持续抑制SVA增殖,与对照组相比,在感染后24和36 h病毒滴度显著下降(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度(10、20和50μmol/L)孕酮在吸附阶段导致SVA吸附水平极显著下降(P<0.01);在复制阶段使SVA VP3水平显著下降且使病毒滴度极显著下降(P<0.01);在释放阶段使释放胞外的病毒比例极显著下降(P<0.01);但对其他途径无显著影响。说明孕酮能在体外抑制SVA吸附、复制和释放,但对其入胞、组装途径无明显作用。【结论】本研究从天然产物小分子库中筛选出一种具有低细胞毒性且对SVA具有较强颉颃作用的天然产物——孕酮。该产物对SVA吸附、复制和释放阶段具有抑制作用,从而颉颃SVA的感染。本研究为促进抗SVA药物的开发和研究SVA的感染偏好性提供了科学参考。

山东地区1株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况,为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液,利用RT-PCR方法进行病原鉴定,接种MDBK细胞进行病毒分离培养,采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定,对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序,并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、N^(pro)和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带,与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光;电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子,表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株,命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12232 nt,与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%~93.8%,其中,与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高,为93.8%;N^(pro)和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异;SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支,而与BVDV 1型毒株处于同一分支,属于BVDV 1c基因型。【结论】本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株,并进行基因组和遗传演化分析,与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近,为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

我国部分省份牛冠状病毒HE基因遗传变异分析

2020-2023年收集我国14个省份78个临床发病牛群的肛拭子、粪便、组织等样品1819份,用实时荧光RT-PCR方法进行牛冠状病毒(BCoV)检测,并选取部分核酸阳性样品进行HE基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。78个发病牛群中,BCoV阳性场占56.41%,共获得35条HE基因全长序列,与参考序列相比,核苷酸同源性为97.0%~100.0%,氨基酸同源性为97.0%~99.8%。系统进化分析表明,BCoV毒株HE基因在进化上呈现典型的地域性特点,亚洲毒株和美国毒株进化上较为接近,而欧洲毒株位于另一个分支,所测毒株与中国参考毒株处于亚-美型毒株分支中,位置相对较为集中。所测35个HE序列中,有34个没有发生插入或缺失突变,来自宁夏的BCoV/NX13/CHN/2023毒株其HE基因存在12个核苷酸的插入突变,证实了BCoV HE基因插入变异株在我国的存在。基因重组分析显示,该毒株与BCoV/HeB120/CHN/2021的HE基因可能发生了重组,预测重组值分别为0.797和0.759。说明了我国部分省份临床发病牛群BCoV感染及BCoV HE基因的遗传变异,为明晰我国BCoV流行毒株分子特征提供参考。

猪流行性腹泻病毒实时荧光RT-RAA检测方法的建立及应用

为了建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的方法,试验基于PEDV N基因保守区域设计3对特异性引物和1个探针,通过引物的筛选和反应温度的优化建立PEDV实时荧光逆转录重组酶介导等温扩增(reverse-transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)检测方法,对该方法进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验,并分别采用该方法和实时荧光定量RT-PCR检测方法对72份猪淋巴结、肝脏等组织临床样品进行检测,计算两种方法的符合率。结果表明:建立的实时荧光RT-RAA方法在41℃条件下反应20 min即可完成检测,对PEDV的最低检测限为1×10~1拷贝/μL;且仅能检测出PEDV,与传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRoV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV-3)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV-4)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)均无交叉反应;相同拷贝浓度的质粒标准品3次重复的扩增曲线几乎重合,起峰时间与荧光值没有明显差异。对72份临床样品进行检测,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率为100%。说明建立的实时荧光RT-RAA方法敏感性高,特异性和重复性良好,同时耗时短、操作简单,可用于PEDV的临床检测。

尼帕病毒的环境存活能力及相关消毒剂研究现状

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性病毒,其在环境中的存活能力及对消毒剂的敏感性对防控其人兽感染至关重要。NiV对温度、干燥、紫外线均较敏感,对pH的耐受范围较广;在适宜环境下,病毒在尿液和果汁中稳定性较高。季铵类、含氯类及高浓度醇类消毒剂等均可完全灭活NiV,但其有效浓度和消毒时间是确保病毒被完全灭活的关键因素,同时要现配现用。本文综述了NiV在不同环境因素下的存活能力及其相关消毒剂研究现状,以期为NiV感染防控提供参考。

荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡生物学特性分析与免疫效果评价

旨在探究荚膜B型多杀性巴氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)的生物学特性及免疫保护效果。本研究利用超高速离心和密度梯度离心方法提取荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察OMVs的形态及大小,采用SDS-PAGE、LC-MS/MS分析OMVs主要蛋白,以蛋白定量试剂测定其蛋白浓度以及鲎试剂法测定其内毒素含量,然后以新西兰白兔为动物模型,开展免疫保护效果评价。结果显示,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的OMVs呈完整规则的球形结构,平均粒径108.3 nm,其中的蛋白质主要集中在33、40、53 ku处,内毒素含量为3.31×10^(6) EU·mL^(-1),用制备的OMVs以50μg·只^(-1)免疫新西兰白兔2次后,免疫兔血清抗体效价可达1∶405 600,外周血淋巴细胞IFN-γ和IL-4转录水平明显升高,对荚膜B型多杀性巴氏杆菌攻击的保护效率为75%。综上表明,荚膜B型多杀性巴氏杆菌的外膜囊泡具有良好的免疫保护效果,有作为候选疫苗的潜质,本研究为外膜囊泡疫苗的研究奠定了基础。

胸腔镜肺切除术患儿术后肺部并发症的危险因素

目的分析患儿胸腔镜下肺切除术后肺部并发症(PPCs)的危险因素。方法回顾性分析行胸腔镜肺切除术566例患儿的临床资料,男334例,女232例,年龄≤6岁,ASAⅠ或Ⅱ级。根据患者术后7 d内是否发生PPCs分为两组:PPCs组和非PPCs组。将单因素分析中P≤0.2以及临床认为可能有意义的协变量纳入多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)。结果有123例(21.7%)发生PPCs。多因素Logistic回归分析显示,单肺通气时间长、单肺通气时呼吸频率快、手术医师经验不足是PPCs的独立危险因素,术中最大PEEP升高(最大为7 cmH2O)是保护因素。预测模型为Logit(P)=-4.410+0.006×单肺通气时间+0.063×单肺通气呼吸频率+0.569×手术医师经验不足(赋值为1)-0.160×最大PEEP值,该模型预测患儿胸腔镜肺切除术PPCs发生率的AUC为0.682(95%CI 0.631~0.734),敏感性76.4%,特异性69.6%。结论单肺通气时间长、单肺通气时呼吸频率快、手术医师经验不足是患儿胸腔镜肺切除术PPCs的危险因素,术中最大PEEP升高是PPCs的保护因素。

自由体位联合芳香疗法对初产妇自然分娩产程进展与分娩结局的影响

目的探讨自由体位联合芳香疗法对初产妇自然分娩产痛、产程时间及结局的影响。方法选择2020年7月—2021年2月医院收治的100例初产妇为研究对象,按照组间基线资料均衡可比的原则分为对照组和观察组,各50例。对照组给予常规产程观察护理,观察组在常规护理基础上予以芳香疗法。比较两组疼痛评分、药物分娩镇痛率、产程时长、分娩方式、产后2 h阴道出血量、会阴损伤情况、新生儿窒息率等指标,评价芳香疗法的效果。结果观察组产妇疼痛分值及药物分娩镇痛率与对照组无差异(P>0.05);观察组第一产程、总产程时长短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),第二产程时长差异无统计学意义(P>0.05);观察组会阴裂伤程度较对照组轻,差异有统计学意义(P<0.05);新生儿窒息率、产后2 h阴道出血量、阴道分娩率,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论自由体位联合芳香疗法能减轻初产妇疼痛,减少药物分娩镇痛的使用,缩短产程。