比较蛋白质组学揭示茉莉酸甲酯诱导的雷公藤甲素生物合成

目的:探索雷公藤甲素生物合成途径,以提高其产量或用于合成生物学异源生产。方法:使用无标记(lable-free)比较蛋白质组学对茉莉酸甲酯(MeJA)诱导的雷公藤悬浮细胞进行测序,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)、基因本体(GO)分析等方法,结合基因转录表达分析和基因体内功能研究,逐步筛选参与雷公藤甲素生物合成的功能基因。结果:MeJA诱导不同时间的样品组鉴定得到376个差异蛋白质,包括8个细胞色素P450酶(CYP450)、3个转录因子(TF)和2-氧戊二酸依赖的双加氧酶(2ODD)。其中CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因在MeJA诱导及植物不同组织部位中,均与已知参与雷公藤甲素母核环化的二萜合酶TwTPS7(v2)和TwTPS27(v2)基因具有相似的表达模式,表明其可能与雷公藤甲素生物合成相关。进一步利用植物细胞体内功能研究,验证了CYP71BE89、CYP82AQ2和Tw2ODD基因干扰使雷公藤甲素积累分别降低了24.1%、41.4%和71.4%,表明了3个基因与雷公藤甲素生物合成直接相关。结论:利用比较蛋白质组学技术揭示了几种与雷公藤甲素生物合成相关的蛋白,进一步表征了雷公藤甲素生物合成与外源激素刺激之间的关系,并为发掘中药活性成分生物合成途径提供了一种有效方法。

蒲公英总黄酮的提取工艺优化及抗氧化活性评价

本文采用乙醇浸提法从蒲公英中提取总黄酮,考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间等因素对蒲公英总黄酮提取效果的影响。以总黄酮含量为指标,在单因素实验基础上采用正交实验法对提取工艺进行优化。最佳工艺条件为:乙醇浓度为40%,提取温度为70℃,提取时间为80min,此条件下蒲公英提取物总黄酮含量为0.9170mg·mL^(-1)。通过DPPH清除实验、羟基自由基清除实验,对蒲公英总黄酮提取物进行抗氧化活性评价,其中DPPH自由基清除率IC_(50)值为0.8492mg·mL^(-1),羟基自由基的清除能力IC_(50)值为1.0717mg·mL^(-1)。该结果表明,蒲公英总黄酮提取物具有良好的抗氧化清除自由基能力。

雨课堂混合教学模式在药用植物学课程中的实践探索

雨课堂是一种将电脑多媒体幻灯片PowerPoint(PPT)与手机微信(Wechat)对接互联的智慧教学模式,因其不受时间、空间等因素的限制,故可使师生课前、课上、课后的互动更为有效、便捷。本文结合药用植物学的课程特点,探索建立了基于雨课堂的混合教学模式,并进行了为期2年的教学实践,分析了混合教学模式在药用植物学教学实践中所存在的优势、弊端及改进对策,以期激发学生的学习热情,提高教师的教学效率,为药用植物学教学模式的改革提供一定的思路和方向。

瓜蒌饮片防虫和防酸败的包装技术研究

目的针对瓜蒌饮片特别容易虫蛀和酸败的现象,研制其包装技术。方法以遭受印度谷螟轻度虫蛀的瓜蒌饮片为试验材料,采用4种前处理方法、6种包装材料、5种包装形式相结合的方式进行包装,在常温简易库中贮藏1年,打开包装后,进行虫蛀的观察,按《中国药典》2015年版有关"脂肪与脂肪油测定法"进行酸值的测定,以是否出现虫蛀和酸值指标进行防虫和防酸败效果的比较。结果 4种前处理方法中,微波中火50 s处理的瓜蒌饮片,未虫蛀合格率和酸值合格率均最高;6种包装材料中,0.10mm单层厚度的低密度聚乙烯材质的厚塑料袋和0.15 mm单层厚度的聚乙烯材质的铝塑复合膜包装的瓜蒌饮片,未虫蛀合格率较高,酸值合格率最高;5种包装形式中,0.07 MPa真空度包装的瓜蒌,未虫蛀合格率和酸值合格率均最高。结论采用微波中火前处理,以0.10 mm单层厚度的厚塑料袋或0.15 mm单层厚度的铝塑复合膜为包装袋,0.07 MPa真空包装处理的结合技术,对瓜蒌饮片进行包装后,可以有效地防虫和防酸败,达到最佳的贮藏效果。该包装技术的形成具有中药贮藏和包装研究方法学的突破。

化工原理课程设计的专创融合教学改革与实践

化工原理课程设计是一门综合性很强的实践课程,是化工原理基础知识和基本理论课程后的一次重要的实践教学环节。文章结合全国大学生化工设计竞赛内容和化工原理课程设计教学课程的现状,设计了专创融合教学模式,并对设计内容及评分细则进行标准化设计。改革后的课程,在培养高素质人才的同时,提高了教师的专业素质,达到了教学相长的效果。

二代测序技术检测650例非小细胞肺癌驱动基因突变

目的探讨驱动基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的突变情况。方法采用二代测序(next-generation sequencing,NGS)靶向检测,分析650例NSCLC组织中ALK、BCL2L11、BRAF、EGFR、ERBB2、FGFR、KRAS、MAP2K1、MET、NRAS、NTRK、PIK3CA、RET、TP53、ROS1共15种基因的突变情况。结果NSCLC中至少发生1种基因突变频率为61.23%。67.65%突变位点位于EGFR基因;携带EGFR突变患者有313例(48.15%),其中56例(17.89%)合并其他基因突变,包括48例EGFR合并另1种基因突变,7例EGFR合并其他2种基因共突变以及1例EGFR合并其他3种基因共突变。除exon 19del、exon 20ins、T790M和L858R外,还发现其他24种非常见EGFR突变;除EML4-ALK融合外,还发现3种ALK基因其他不同位点突变。NSCLC中女性、腺癌患者发生突变的频率更高(P<0.05)。结论应用NGS技术可揭示NSCLC各驱动基因变异更多的独特特征,为NSCLC药物开发和靶向治疗提供参考。

宫颈癌ⅠA1期的临床诊治进展分析

目的了解宫颈癌ⅠA1期的诊断和治疗手段在10年间的变化,探讨宫颈癌ⅠA1期有效并且安全的诊治方法。方法回顾性检索并复核了2005—2014年复旦大学附属妇产科医院收治的721例宫颈癌ⅠA1期患者的病史档案和随访资料,应用Pearsonχ2检验、确切概率法、Spearman相关分析,讨论10年间诊治方法的变化和效率。结果 721例宫颈癌ⅠA1期患者中,396例(54.9%)患者无症状,宫颈活检检出宫颈癌ⅠA1期患者82例(11.4%),宫颈锥切术检出640例(89.9%),检出率差异有统计学意义(P<0.01);2010—2014年较2005—2009年腹腔镜手术明显增加,经腹手术明显减少(P<0.01),根治性手术比例亦明显减少(P<0.01);35例失访,失访率为4.9%,随访期内复发1例,无死亡病例。结论宫颈锥切术有助于明确宫颈癌ⅠA1期的诊断;腹腔镜下全子宫切除术可以作为宫颈癌ⅠA1期的基本治疗手段。

Monte-Carlo simulation to determine detector efficiency of plastic scintillating fiber

Fundamental characteristics of the plastic scintillating fiber (PSF) as a detector for electromagnetic radiation (X & γ) are obtained by GEANT4 detector simulation tool package. The detector response to radiation with energy of 10~400 keV is found out. Energy deposition as well as detector efficiency (DE) of the PSF are studied. In order to make linear array of the PSF for imaging purpose, the optimum length of fiber is also estimated.

2019-2020年欧美召回我国玩具质量安全风险分析

玩具安全一直被世界各国关注,而我国玩具产品因存在质量安全风险经常被国外召回。本文对2019-2020年欧美召回我国玩具产品的通报进行分析,发现被召回次数较多的产品是塑料玩具、填充玩具和娃娃玩具,产品主要存在窒息、化学伤害和受伤等风险,风险因子主要是小部件、邻苯二甲酸酯、有害可迁移元素硼、重金属铅和镉重金属等,提出应对玩具质量安全风险的建议。

离子印迹共价有机骨架材料对放射性锝的替代物——铼的吸附及应用

该文以高铼酸盐作为高锝酸盐的非放射性结构替代物,结合离子印迹技术的特异性、共价有机骨架(COF)材料的多孔性和酸/热稳定性,通过自由基聚合和季胺化反应,制备出表面离子印迹共价有机骨架(IICOF)材料,并将其应用于实际环境样品中高铼酸根离子的高效捕获。首先利用1,4-二醛基-2,5-二乙烯基苯与1,3,5-三(4-氨苯基)苯为构筑基元,通过微波辅助合成出乙烯基功能化的COF-V。然后以N-乙烯基咪唑和4-氯甲基苯乙烯作为功能单体产生带正电的结合位点,通过与模板离子(高铼酸根)的静电作用以及自由基聚合反应在COF-V表面制备出IICOF。考察了吸附剂用量、吸附时间、pH值、温度、初始浓度、共存离子等对IICOF吸附性能的影响。IICOF在<2 min即可达到吸附平衡状态,吸附热力学研究表明其对高铼酸根离子的吸附是一个放热的自发过程,在动力学上遵循准二级模型。在298.15 K时,最大吸附容量为416.67 mg/g。与非印迹复合材料相比,IICOF表现出更高的选择性、更快的动力学和更大的吸附容量。在珠江水以及尾矿渗滤液的加标吸附实验中,吸附效率分别在87%及98%以上,证实了IICOF能够在现实环境中有效去除高铼酸根离子。该技术为环境中高锝酸根的有效吸附、分离提取以及资源回收提供了一条新途径。

血流向量图分析左心室射血初速度与舒张晚期涡流的关系

目的应用血流向量图技术(vector flow mapping,VFM)研究射血前期左心室流出道血流速度与舒张晚期涡流之间关系。方法对照组健康人55例,冠心病患者123例分为左心室射血分数(LVEF)>50%组和LVEF<50%组。左室长轴切面记录彩色多普勒信号,测量舒张末期前向涡流面积及流量(除以心腔面积进行校正)及流出道射血前期血流速度(V0)。结果对照组V0与涡流校正前、后流量及二尖瓣口A峰速度中度相关,校正后流量(β=0.532,P<0.01)是V0的独立影响因素(R2=0.283,P<0.01)。LVEF<50%组涡流面积、流量大于其余两组,校正后流量小于其余两组(均P<0.05),校正后涡流面积3组之间的差异无统计学意义。LVEF<50%组V0小于其余两组(均P<0.05),其余两组之间的差异无统计学意义。患者中V0与涡流校正后流量、左心室大小、LVEF、二尖瓣环收缩和舒张晚期速度s’、a’中度相关,舒张短径(β=-0.329,P<0.01)、a’(β=0.266,P=0.01)及涡流校正后流量(β=0.188,P<0.05)是V0的独立影响因素(R2=0.441,P<0.01)。结论左心室射血初速度与涡流密切相关。

巧用文本留白 让语文课堂“熠熠生辉”

留白艺术源自中国古代道家思想,并对中国的绘画、文学等艺术领域产生深远的影响。初中语文教学中的“留白”就是对这种艺术的借鉴和移植。通过运用文本中的“留白”,可以加强学生对文字的理解与领悟,让语文课堂熠熠生辉。

应用血流向量图研究左心室舒张末期涡流的影响因素

目的应用血流向量图技术(vector flow mapping,VFM)研究左心室舒张末期涡流的影响因素及与充盈方式的关系。方法选择健康志愿者48人、冠心病患者51人、扩张性心肌病患者51人,根据二尖瓣口充盈方式分为正常充盈组29人,松弛受损组85人,假性正常组22人,限制型充盈组14人。心尖左心室长轴观采集左心室彩色多普勒血流图像,VFM技术测量舒张末期左心室涡流面积与流量。结果涡流面积与心率、A峰及瓣环a’速度、左心室大小显著相关,其中A峰速度、心率及左心室舒张长径是涡流面积的独立影响因素(P<0.01)。涡流流量与年龄、心率、A峰速度、左心室大小与功能各指标显著相关,其中A峰速度、心率、左心室收缩短径及舒张长径是涡流流量的独立影响因素(P<0.01)。4组之间涡流面积与流量有显著性差异(均P<0.05),松弛受损组涡流面积显著大于限制型充盈组,正常充盈和松弛受损组流量显著大于假性正常和限制型充盈组。结论舒张末期涡流大小与心率、左心室大小及A峰速度有关,不同充盈方式之间具有显著性差异,提示舒张末期涡流可用于鉴别二尖瓣口充盈的假性正常。

GRACE评分对STEMI患者预后的预测价值

目的:探索GRACE评分对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者6个月内的主要心脑血管不良事件(MACCE)与出血事件的预测价值。方法:回顾性分析2020年6月至2021年12月收治的89例STEMI患者的临床资料,用GRACE评分将患者分为:低危组(评分≤108分)、中危组(评分为109-140分)及高危组(评分≥140分)。对患者进行6个月的随访,记录其MACCE[包括全因死亡、心肌梗死、缺血性卒中及靶血管血运重建(TVR)]与出血事件的发生情况,应用生存曲线计算累积发生风险,评价GRACE评分对STEMI患者MACCE与出血事件的预测价值。结果:3组患者6个月内发生MACCE20例(19.1%),其中,全因死亡5例(5.62%)、心肌梗死4例(4.49%)、TVR者4例(4.49%)及缺血性卒中4例(4.49%);发生出血事件6例(6.74%)。单支病变的发生率随着GRACE评分的增加而减少,三支病变的发生率随着GRACE评分的增加而增加,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GRACE评分对STEMI患者出院后6个月内MACCE具有较高的预测价值,对出血事件也具有一定的预测价值。

红花黄酮类糖基转移酶基因CtUGT49功能表征及酶学特性分析

红花作为传统的活血化瘀中药,具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节等药理活性。黄酮糖苷是红花植物的主要生物活性组分,糖基转移酶作为活性糖苷化合物生物合成的下游后修饰酶,具有重要的研究意义。该研究基于红花转录组数据分析,挖掘到一条糖基转移酶基因CtUGT49,对其进行了系统的生物信息学分析和酶学性质考察。该基因开放阅读框(ORF)长度为1416 bp,编码471个氨基酸残基,相对分子质量约为52 kDa。系统进化分析表明,该糖基转移酶属于UGT73家族。体外酶促结果显示,CtUGT49可催化柚皮素查尔酮生成樱桃苷和南酸枣苷;催化根皮素生成的主产物为根皮苷和三叶苷,并且具有良好的底物宽泛性。通过蛋白异源表达与纯化得到较为纯净的重组蛋白CtUGT49后,进行CtUGT49催化柚皮素查尔酮的酶学性质考察。结果显示,CtUGT49催化反应的最适pH为7.0,最适温度为37℃,反应8 h后,底物转化率达到最高。采用米氏方程计算CtUGT49的酶活常数Km=209.90μmol·L^(-1),kcat=48.36 s^(-1)。该研究发现的新颖糖基转移酶CtUGT49对于丰富糖基化工具酶库具有重要意义,且能为进一步解析红花黄酮糖苷的糖基化过程奠定基础。

基于通报数据的密胺与植物纤维餐具质量安全风险分析

基于欧盟召回、国内监督抽查、国内召回的通报数据,运用数据统计分析、数据可视化方法,从通报次数、通报原因、不符合项目等角度对密胺与植物纤维餐具的通报数据进行比较分析。欧盟召回通报数据分析表明:植物纤维是通报次数最多的食品接触制品材质;密胺餐具存在甲醛迁移量和三聚氰胺迁移量超标风险;植物纤维餐具含有未授权成分,其中竹纤维成分的通报频次最高。国内监督抽查数据分析表明:密胺餐具的平均不合格率较低,主要风险为耐污染性超标;植物纤维餐具的不合格率高于密胺餐具,主要风险为甲醛迁移量和三聚氰胺迁移量超标。国内召回通报数据表明:密胺餐具的主要风险是耐污染性、标签标识和结构存在缺陷;植物纤维餐具的主要风险是三聚氰胺迁移量超标。相比密胺餐具,植物纤维餐具中三聚氰胺和甲醛迁移超标风险更高。

白芷的产地盐水腌制干燥技术分析

目的：采用盐水腌制干燥技术,使新鲜的白芷在产地快速干燥,避免腐烂和霉变,获得一种白芷药材。方法：取稍蔫的新鲜白芷,除去泥土,整齐地放置在容器中,用压石压住,加入盐水,浸过白芷,腌制1~2 d,将预处理的盐水倒出,加入与预处理时几乎等量的盐水,密封,腌制一段时间,取出白芷,用水反复浸泡和淋洗,晾干,即可获得白芷药材。结果：采用盐水腌制法加工的白芷中指标成分、醇溶性浸出物含量等指标均达到了2015年版《中国药典》对白芷药材的质量规定,所有样品中亚硝酸盐质量分数均低于3.3 mg·kg-1（检测限）,符合盐渍品中亚硝酸盐的限量指标。结论：在产地采用盐水腌制法获得的药材白芷,在简易仓库中贮藏2年未见变质现象,为中药白芷的产地加工提供了一条新技术。

红花组织培养体系的建立及悬浮细胞中次生代谢产物的分析

红花作为一种常见的价值丰富的药用植物,近年来被广泛关注。为了建立更加稳定的红花组织培养体系,为红花中次生代谢产物的深入研究提供更加稳定、优质的实验材料。该研究以红花种子为基础,进行了愈伤组织的培养,然后分化成无菌苗,进一步通过悬浮培养得到了稳定的悬浮细胞系。并以此悬浮细胞系为实验材料,通过UPLC-Q-TOF-MS等技术手段定性分析了其中所含的次生代谢产物,及其在4种不同的诱导子(茉莉酸甲酯、硝酸银、水杨酸和酵母提取物)作用下的变化规律。该研究利用Progenesis QI软件在红花悬浮细胞中预测了黄酮、苯丙素、生物碱、有机酸和芳香苷类等23种同样存在于红花植物体内的次生代谢产物,并进行了PCA分析发现其中11种化合物的相对含量在诱导子的作用下发生了改变,不同诱导子对红花悬浮细胞中次生代谢产物的积累有着不同的影响,其中酵母提取物表现出相对明显的正向诱导作用。这些都为进一步研究红花的功能基因搭建了平台,也为将来寻找靶向诱导剂和实现一些有价值的次生代谢产物的大规模生产提供了可能性。

基于丹参酮类化合物生源途径的丹参质量标志物研究思路探讨

该研究基于中药质量标志物(Q-marker)理论以丹参为研究对象,对丹参毛状根进行诱导实验,采用实时荧光定量PCR检测毛状根中SmCPS,SmKSL,CYP76AH1 3条基因的相对表达量;分别采用UPLC和GC-MS技术检测毛状根与药材中丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、1,2-二氢丹参酮、铁锈醇以及次丹参酮二烯的含量;统计学分析表明:丹参毛状根中次丹参酮二烯与铁锈醇的含量与下游丹参酮类化合物的含量存在正相关,且丹参酮类化合物生源途径上重要基因的相对表达量可在一定程度上反映丹参酮类化合物的含量;在多省份丹参药材中,初步发现铁锈醇与丹参酮类化合物的含量也存在正相关。该研究从丹参毛状根体系可控实验入手,结合丹参药材,以丹参中特有指标性成分丹参酮类化合物的生源途径为研究基础,突出了生源途径上游基因、中游中间体化合物与下游丹参酮类化合物含量之间的重要关系,进而为从生源途径方面理解和研究丹参质量标志物(Q-marker)提供了可能的研究思路,以期建立多元、完整的中药丹参的质量控制体系。

雷公藤CYP450生物信息学及组织分布分析

细胞色素P450家族是一种广泛存在于自然界中的生物催化剂,它具有催化植物次生代谢产物生物合成、调节植物修复等多种功能。该研究基于对雷公藤蛋白组数据的分析,利用多种生物信息学分析的方法对雷公藤CYP450基因进行了初步分析和预测,文章结果显示,使用茉莉酸甲酯诱导雷公藤悬浮细胞表达后,获取到雷公藤蛋白组数据并对其进行分析,最终筛选出10条雷公藤CYP450蛋白;通过分析与拟南芥家族CYP450基因构建得到的系统进化树,将这10条CYP450蛋白聚类归为6个不同的CYP450家族,各个家族CYP450蛋白质的理化性质存在一定差异,二级结构主要以不规则卷曲为主要构成元件,其中8条CYP450蛋白亚细胞定位结果为叶绿体,其余为质体;随后,通过对多重序列比对结果进行分析,找到了CYP450基因共有的保守结构域(亚铁血红素活性位点);最后,通过分析雷公藤转录组数据,初步确认了其在不同组织中的表达分布,从而验证了其与雷公藤活性物质生物合成具有相关性,为雷公藤有效活性成分生物合成途径解析提供了重要的基因资源。