4T1乳腺癌细胞株接种联合慢性束缚应激诱导乳腺癌合并抑郁小鼠模型构建探索

目的研究4T1乳腺癌细胞株接种联合慢性束缚应激方法构建乳腺癌合并抑郁症小鼠模型核心行为症状、生物学指标、病理学等改变。方法BABL/c小鼠随机分为正常(Control)组、束缚(Stress)组、移植瘤(Tumor)组和束缚移植瘤(Stress+Tumor,S+T)组,将4T1细胞株接种于Tumor和S+T组小鼠腋下,待成瘤后,给予Stress和S+T组小鼠束缚应激21 d。造模期间监测各组小鼠体重、摄食量。实验结束后,采用糖水偏好、旷场、高架十字迷宫、强迫游泳等试验评价各组小鼠抑郁样行为。小鼠处死后,测量小鼠瘤体重量和体积;采用ELISA方法检测各组小鼠血清肿瘤标志物糖类抗原(CA199)、癌胚抗原(CEA)、血管内皮生长因子(VEGF)以及相关神经递质5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、皮质酮(CORT)的含量;运用HE染色法观察小鼠肿瘤和海马组织病理学改变。结果S+T组小鼠体重、摄食量显著降低,瘤体重量和体积明显增大,血清肿瘤标志物(CA199、CEA、VEGF)水平显著升高,快感和对新环境的探索欲望减弱,紧张和绝望行为显著增强,血清神经递质5-HT和NE水平显著降低,CORT水平显著升高;另外肿瘤组织细胞排列松散,间质减少,病理性核分裂象增多,海马CA3区神经元细胞排列和形态紊乱,核内空泡化样改变明显。结论4T1乳腺癌细胞株接种联合慢性束缚应激诱导的乳腺癌合并抑郁小鼠模型出现了乳腺癌和抑郁症双重典型症状和生物学指标改变,可为乳腺癌合并抑郁实验研究提供较好的模型参考。

基于TGF-β1/CD147信号探讨慢性束缚应激促小鼠乳腺癌进展及逍遥散调节机制研究

目的基于TGF-β1/CD147信号探讨慢性束缚应激促小鼠乳腺癌进展及逍遥散调节机制。方法40只BABL/c小鼠随机分为移植瘤组(Tumor)、模型组(Model)、逍遥散组(Xiaoyaosan)和米非司酮组(Mifepristone),将4T1细胞株接种于各组小鼠腋下,待成瘤后,除Tumor组外其余各组小鼠均进行慢性束缚应激21天,同时Xiaoyaosan组和Mifepristone组小鼠给予相对应的药物灌胃,Tumor组和Model组小鼠灌胃生理盐水。造模结束后,小鼠麻醉断头处死,测量小鼠瘤体重量和体积、内脏指数;采用ELISA方法检测各组小鼠血清肿瘤标志物糖类抗原ca199(Carbohydrate antigen199,CA199)、癌胚抗原(Carcino-embryonic antigen,CEA)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量,血清多巴胺(Dopamine,DA)和皮质酮(Corticosterone,CORT)的含量,以及肿瘤组织转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和白介素10(Interleukin 10,IL-10)的含量。采用免疫组化和Western blot方法检测各组小鼠肿瘤组织巨噬细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)和精氨酸酶1(Arginase-1,Arg-1)的表达,以及肿瘤组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导剂(Extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,CD147)及其下游信号分子基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinases 2),MMP2、基质金属蛋白酶9(MMP9)和VEGF的表达。结果与Tumor组比较,Model组小鼠肿瘤重量和体积,血清CA199、CEA、VEGF、CORT含量,肿瘤TGF-β1和IL-10含量均显著增加;内脏指数和血清DA含量显著减少;肿瘤巨噬细胞M2型极化标志物Arg-1的表达显著增加,M1型极化标志物iNOS的表达显著降低;肿瘤CD147及其下游信号分子MMP2、MMP9和VEGF蛋白表达显著增加,逍遥散和米非司酮均可有效逆转以上改变。结论慢性束缚应激促小鼠乳腺癌进展的机制与肿瘤相关巨噬细胞M2型极化释放TGF-β1增加、激活CD147及其下游相关信号有关,而逍遥散可缓解应激条件下皮质酮增高引起的巨噬细胞M2型极化,减少TGF-β1的生成,抑制CD147及其下游信号,从而抑制慢性应激引起的小鼠乳腺癌进展。

脑内星形胶质细胞-神经元相互作用参与抑郁症发病研究进展

经典的观点认为星形胶质细胞是神经元的支持细胞,在大脑信息处理中没有直接作用。而越来越多的证据表明神经元-与星形胶质细胞之间相互作用功能障碍可能与各种神经和神经退行性疾病的病理学有关,近年来也逐渐成为抑郁症发病机制研究的热点。本文总结了星形胶质细胞-神经元相互作用参与抑郁症脑氧化防御、突触可塑性、脑能量代谢、神经炎症、谷氨酸循环等过程障碍的重要证据,这些证据表明星形胶质细胞-神经元之间的相互作用障碍是抑郁症发病的重要机制之一。本文还对星形胶质细胞-神经元参与抑郁症发病的新观点,以及研究中存在的问题进行了讨论,以便为后续研究提供思路和借鉴。

基于本草类文献整理探讨调理三焦中药的功能属性特点

目的:通过对本草类文献整理归纳分析,探讨调理三焦中药的性味、归经及功能属性特点,为临床治疗三焦疾病遣方用药提供理论参考。方法:以“三焦”为关键词,检索中华医典数据库本草类中关于三焦的中药,筛选明确记载具有调节三焦功效的中药,采用Excel表格对纳入文献数据进行频数分析,统计各味中药出现的频数,并对其调节三焦功能、记载年代、功效、性味、归经进行频数分析,初步归纳出具有调节三焦功能中药的特点。结果:共筛选出91味中药。其中,通行三焦之气的中药材共31味;通调三焦水道功能的中药共10味;清三焦之火的中药有28味;具有补三焦功效的中药共19味,包括补气药、补阴药、补阳药、安神药、固精缩尿药以及清热药;治疗三焦血病的中药3味,为硇砂、凌霄花、忍冬藤。记载调理三焦中药的文献以明清时期居多。从四气来看,治疗三焦病的中药药性以温性、寒性药为主。从五味来看,药味频次较高的分别是甘、苦、辛。从归经角度看,治疗三焦中药以肺、脾、肾、胃、肝、心经居多。调节三焦功能主要包括畅达三焦之气、清三焦火(热)、补三焦、通利三焦水道、治疗三焦血病。结论:以三焦为依据治疗疾病的文献以明清为主,调理三焦的中药在四气、五味、归经属性上具有一定规律。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

基于胶质细胞增殖调控因子bFGF/TGF-β1探讨逍遥散治疗抑郁症的机制

目的基于胶质细胞增殖调控因子bFGF/TGF-β1探讨逍遥散治疗抑郁症的机制。方法采用CUMS方法建立抑郁症小鼠模型。造模成功后,给予逍遥散和盐酸氟西汀干预,对小鼠体重、摄食量、行为学进行评估;采用Elisa、免疫组化和Western blotting方法检测小鼠前额皮质bFGF和TGF-β1蛋白表达情况及逍遥散的调节作用。结果模型组小鼠体重、饮食情况、糖水摄入量较正常组小鼠出现显著降低(P<0.01),强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01),经逍遥散和氟西汀治疗以后得到显著改善(P<0.05);另外Elisa、免疫组化和western blot实验结果均表明,抑郁症小鼠前额皮质bFGF蛋白含量表达显著降低(P<0.01),经逍遥散和氟西汀治疗后,抑郁症小鼠前额皮质bFGF蛋白表达情况可被扭转(P<0.05),而各组小鼠前额皮质TGF-β1蛋白表达情况与bFGF刚好相反。结论逍遥散可通过调控AST抑制剂TGF-β1和促活化剂bFGF而发挥治疗抑郁症的作用,其机制可能与逍遥散通过bFGF/TGF-β1调控前额皮质AST功能有关。

中医肺脾肾三脏与机体免疫调节的关系

大量临床和文献报道显示,机体免疫功能的调节与肺、脾、肾密切相关,但目前对其之间的调节关系理解仍较为模糊,有待明晰.该文从现代医学机体免疫系统的组成及其与中医肺、脾、肾的关系,中医"肺-脾-肾"轴的含义、功能、调节关系,"肺-脾-肾"轴与机体免疫稳态的联系,"肺-脾-肾"轴功能失调导致机体免疫紊乱的中医病机,以及基于"肺-脾-肾"轴理论治疗免疫性疾病等方面对现代医学机体免疫系统与中医肺、脾、肾的关系进行阐述和分析,并在此基础上提出了"肺-脾-肾"轴为机体免疫调节轴的思想,认为肺、脾、肾三脏功能失调是临床免疫性疾病的关键原因,对此类疾病的辨证和治疗可以多从此三脏考虑,以期为免疫性疾病的临床诊断和治疗提供思路和借鉴.

内生伏邪实质及致病特点探析

立足中医病因学角度,探讨内生伏邪的概念、性质和致病特点,举例分析内生伏邪与临床部分疑难杂病病因病机的关系;认为内生伏邪致病的临床治疗重在调理脏腑经络功能,匡扶正气,疏导气血津液代谢,调整伏邪的性质,引导体内伏邪向正气转化。

基于中医整体观认识肿瘤形成的生态学规律

中医整体观强调内外环境的统一性及机体自身的整体性。肿瘤的形成与其所处的自然生态、社会生态、机体内生态、局部微生态、细胞内分子生态也构成一个有机的整体,具有生态医学的特征。从中医整体观角度认识肿瘤形成过程中的生态学规律,有助于明确中医防治肿瘤的生物学内涵,也可以为解释肿瘤发病机制和指导肿瘤的临床治疗提供思路。

河南某大学在校大学生肿瘤知识普及现状调查与思考

目的了解在校大学生的肿瘤知识普及现状,为在大学生群体中采取合理有效的教育和宣传手段提供参考,从而加强大学生对肿瘤知识的了解。方法采用群体随机抽样调查的方法,在河南某大学医学专业大学二年级学生(医学组)、选修《肿瘤病因与癌症预防》课程的非医学专业组大学二年级或大学三年级学生(简称选修组)及未选修《肿瘤病因与癌症预防》课程非医学专业组大学二年级或大学三年级学生(简称未选修组)中进行问卷调查。内容包括对肿瘤的基本认识和态度,致癌因素、肿瘤预防知识,肿瘤早期症状的了解情况等。结果共有708名在校大学生参与问卷调查,其中医学生组283人,选修组217人,未选修组208人。医学组学生对致癌因素吃烟熏油炸食物(96. 8%)、精神压力过大(86. 6%)、长期接触油烟等有害气体(91. 5%)和黄曲霉毒素(89. 4%)等的认知程度比非医学专业学生高(P <0. 05);选修组对于肿瘤属于何种疾病(50. 2%)和致癌因素病毒或细菌感染(87. 1%)和拥有多个性伴侣(85. 3%)等认识比较深刻(P <0. 05);但医学组和选修组学生对于肿瘤的态度(72. 4%vs 74. 2%)和致癌因素中酗酒(88. 3%vs83. 7%)、吸烟(85. 4%vs 82%)以及不吃早餐(84. 8%vs 90. 3%)致癌的认识等差异无统计学意义(P>0. 05);而未选修组对于肿瘤的认识、致癌因素等知晓率都比较低,均不超过42. 7%。此外,3组学生对于肿瘤的预防措施和早期症状知晓率都不高。结论即使文化水平较高的在校大学生,对肿瘤知识仍然存在一定程度的欠缺。因此,学校充分利用雄厚的教育资源、在学生中广泛开展有效的肿瘤科普健康教育是非常有必要的。

双轨合一背景下中医专硕培养模式探索

中医专业学位硕士研究生培养与规培“双轨合一”是医教协同深化中医学人才培养改革的关键,是加强中医临床人才队伍建设的有效方式,有利于加快构建具有中国特色医学人才培养体系。在“学科评估”战略背景下,探索符合“双轨合一”实际情况中医专硕培养模式和培养质量监控体系对于实现研究生教育内涵式发展、培养一流人才和提升学科水平具有重要意义。

基于研究生微课的分子生物学常用技术的教学探索

中医院校进入分子生物实验中心的研究生,主要应用分子生物学的常用技术开展毕业论文课题研究。大部分学生学习过分子生物学这门课程,但基础薄弱,很多知识没有消化,在课题的研究中还是不能很好地应用。针对这种现象,我们对刚进入分子生物实验中心的研究生以微课的形式探索对分子生物常用技术的教学,希望学生能了解各技术的原理、相应的操作步骤、相关的仪器使用以及注意事项。本文从分子生物学常用技术和微课的特点分析,将微课的优缺点应用于此门课程中。微课的内容短小精悍、碎片化、主题突出,方便在移动设备上反复观看的特点,能更好地方便分子生物学常用技术课程的开展,有效提高了对研究生实验的指导作用。

杜仲CONSTANS-like全基因组鉴定、系统进化及表达模式分析

【目的】揭示CONSTANS-like在杜仲Eucommia ulmoides基因组中的分布、结构特征及表达模式。【方法】利用生物信息学方法,对杜仲CONSTANS-like基因家族进行鉴定及理化性质、进化关系、基因结构、启动子元件和表达模式分析。【结果】杜仲基因组中共鉴定到8个EuCOLs基因,分别命名为EuCOL1~EuCOL8,氨基酸数目为315~469,理论等电点分布范围为5.10~6.47,分子量为35.21~52.65 kDa。亚细胞定位预测均定位在细胞核中,为亲水性蛋白,分布于8条染色体。系统进化分为2个亚家族(群组Ⅰ和群组Ⅲ),分别包含2和6个EuCOLs蛋白,同一亚家族基序具有相似性。EuCOLs基因结构简单,启动子中含有多个光周期响应元件。表达模式分析显示:EuCOLs在杜仲叶片发育中表达水平相对较低,EuCOL7在杜仲胶形成中表达量最高,各家族成员表达特征存在差异。蛋白互作预测显示:EuCOL7可与多个光周期响应蛋白互作。【结论】杜仲CONSTANS-like基因家族含有典型的CCT和B-box结构域,可能参与叶片发育及杜仲胶的形成。

六君子汤在肿瘤疾病的应用及疗效机制的研究进展

通过对近10年六君子汤相关文献的收集及整理,发现六君子汤在临床上可以治疗肿瘤疾病,如胃癌、肺癌、结肠癌、食管癌、肝癌、大肠癌等肿瘤疾病,且具有显著的临床效果;六君子汤可以通过促进消化和吸收、减毒增效、保护胃黏膜、增强人体免疫功能、抑制肿瘤增长等机制发挥治疗肿瘤疾病的作用。

PPARγ信号通路对香烟烟雾所致COPD模型小鼠肺泡巨噬细胞的影响

目的观察过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对香烟烟雾诱导的小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型体质量、肺功能、炎症因子、凋亡指数、PPARγ相关蛋白表达水平等的影响。方法选择24只SPF级C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、PPARγ激动剂组、PPARγ抑制剂组,每组6只。采用香烟熏吸法复制COPD小鼠模型。制模后PPARγ激动剂组给予生理盐水灌胃同时腹腔注射PPARγ激动剂吡格列酮(给药量为10 mg·kg^(-1)·d^(-1));PPARγ抑制剂组给予生理盐水灌胃同时腹腔注射PPARγ抑制剂GW9662(给药量为1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组和正常对照组给予生理盐水灌胃(雄鼠每次0.25 mL,雌鼠每次0.2 mL)及腹腔注射(雄鼠每次0.2 mL,雌鼠每次0.15 mL),均每日1次,每周6次,连续给药8周。给药后观察各组小鼠体质量、肺功能、肺组织病理变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)水平;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测肺组织凋亡细胞凋亡情况;采用免疫组化法检测肺组织巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD163,PPARγ的蛋含量。结果与正常对照组相比,模型组体质量明显减轻(g:21.05±0.84比27.12±1.13,P<0.05),最终潮气量(TV)、每分钟呼气量(MV)、呼气峰流速(PEF)、50%潮气量呼气流量(EF50)、PPARγ的蛋白表达水平均明显降低〔TV(mL):0.28±0.03比0.39±0.02,MV(mL/min):120.35±13.01比179.32±17.70,PEF(mL/s):5.72±0.38比9.99±0.67,EF50(mL/s):0.27±0.05比0.49±0.04,PPARγ(A值):12.69±0.85比18.85±0.39,均P<0.01〕;TNF-α、IL-4、肺组织细胞凋亡指数、小鼠肺泡巨噬细胞iNOS、CD163的蛋白含量均明显升高〔TNF-α(ng/L):642.16±146.03比325.99±84.63,IL-4(ng/L):431.39±50.17比343.24±48.87,细胞凋亡指数:(61.68±4.37)%比(41.34±1.69)%,iNOS(A值):17.06±1.16比8.58±0.84,CD163(A值):15.11±0.44比9.04±0.39,均P<0.01〕;光镜下可见小鼠肺泡壁断裂融合,泡腔增大,支气管管壁厚度增加,周围纤维组织增生。与模型组比较,PPARγ激动剂组体质量、TV、MV、PEF、EF50均明显升高〔体质量(g):25.35±0.70比21.05±0.84,TV(mL):0.34±0.01比0.28±0.03,MV(mL/min):151.24±9.37比,120.35±13.01,PEF(mL/s):6.84±0.59比5.72±0.38,EF50(mL/s):0.36±0.05比0.27±0.05,均P<0.05〕,肺组织细胞凋亡指数、iNOS、CD163均明显下降〔肺组织凋亡指数:(38.78±3.65)%比(61.68±4.37)%,iNOS(A值):9.07±0.78比17.06±1.16,CD163(A值):9.36±0.35比15.11±0.44,均P<0.01〕,PPARγ水平明显升高(A值:19.14±0.36比12.69±0.85);而PPARγ激动剂组和PPARγ抑制剂组TNF-α、IL-4均明显降低〔TNF-α(ng/L):286.57±44.66、354.93±88.40比642.16±146.03,IL-4(ng/L):237.05±32.05、285.58±50.47比431.39±50.17,均P<0.01〕。光镜下可见PPARγ激动剂组肺组织病理学改变均有所改善,PPARγ抑制剂组则无明显变化。结论PPARγ通路参与了COPD的病理生理过程;PPARγ信号通路激动剂可改善COPD模型小鼠的一般情况、肺功能、炎症因子、肺组织凋亡指数,抑制肺泡巨噬细胞的极化。

基于EGFR/PI3K/AKT/mTOR通路探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯调控非小细胞肺癌细胞周期和凋亡的机制

目的:基于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞周期和凋亡的作用机制。方法:将A549细胞随机分为空白对照组、模型组、EGCG组、吉非替尼组、EGCG+吉非替尼组。采用MTT法检测A549细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。通过分子对接和细胞热力学迁移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)检测EGCG与EGFR的靶向结合情况。采用Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、B-细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR表达水平。结果:与模型组比较,EGCG和吉非替尼均对细胞表现出显著的抑制作用。与空白对照组比较,模型组在G1/G0期细胞百分比降低,在G2/M期细胞百分比升高(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组在G1/G0期细胞百分比升高(P<0.01),吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组在G2/M期细胞百分比降低(P<0.01)。与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率降低(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组的细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组细胞CDK4、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达水平升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组和EGCG+吉非替尼组细胞CDK4、Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白表达水平降低(P<0.01),Bax蛋白表达水平增加(P<0.05)。分子对接结果显示,EGCG和吉非替尼与EGFR的结合能均小于-5.0 kcal·mol^(-1)。CETSA结果显示,与RPMI 1640组比较,EGCG组细胞EGFR蛋白的CETSA曲线向右漂移。与空白对照组比较,模型组细胞p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,EGCG组、吉非替尼组、EGCG+吉非替尼组细胞的p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:EGCG可能通过靶向调控EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路,诱导A549细胞周期阻滞和凋亡,从而发挥抗癌作用。

基于Rac1信号通路研究淫羊藿苷对慢性阻塞性肺疾病模型小鼠肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能的影响

目的探讨淫羊藿苷基于Rac1信号通路改善慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型小鼠肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬功能障碍的作用机制。方法40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、Rac1抑制剂(2.5 mg/kg)组和淫羊藿苷低、高剂量(40、80 mg/kg)组,每组8只,除空白组外其余各组小鼠采用香烟烟雾熏吸8周的方法制备COPD模型,造模后ip Rac1抑制剂或ig淫羊藿苷,1次/d,每周给药6次,连续4周。检测小鼠体质量、肺功能指标;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-6、乳脂球表皮生长因子8(milk fat globule EGF factor 8,MFG-E8)和生长停滞特异性蛋白6(growth arrest specific protein 6,GAS6)含量;流式细胞术检测肺泡巨噬细胞胞葬及吞噬能力、小鼠全血巨噬细胞M1/M2分型;苏木素-伊红染色(hematoxylineosin staining,HE)观察肺组织病理变化及肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)、单位面积平均肺泡数(mean alveolar numbers,MAN);qRT-PCR和Western blotting分别检测肺组织Rac1、P21蛋白激活激酶(P21 activated kinase,PAK)m RNA和蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬及骨架结构变化。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、肺功能指标、吞噬及胞葬功能降低(P<0.05、0.01),MLI上升(P<0.01),MAN降低(P<0.01),肺组织中炎症因子IL-4、IL-6、TNF-α水平上升(P<0.05、0.01),胞葬辅助因子MFG-E8、GAS6水平降低(P<0.05),M1型巨噬细胞增多(P<0.05),肺组织Rac1、PAK mRNA及蛋白表达上调(P<0.05、0.01);与模型组比较,Rac1抑制剂及淫羊藿苷干预后小鼠肺功能指标好转(P<0.05、0.01),吞噬及胞葬功能均有改善(P<0.05、0.01),炎症因子水平降低(P<0.05、0.01),胞葬辅助因子水平增加(P<0.05),M2型巨噬细胞增多(P<0.05、0.01),肺组织Rac1、PAK m RNA及蛋白表达降低(P<0.05、0.01)。结论淫羊藿苷可以调控Rac1信号通路介导巨噬细胞骨架重排,改善COPD小鼠肺泡巨噬细胞吞噬及胞葬功能障碍。

从正邪转化探讨肿瘤病机与治疗

通过阅读文献,对正邪相互转化的关系进行探讨,并在古今文献报道基础上指出肿瘤发生的关键因素——"恶气"是由正气失和化邪,邪气伏而化恶产生的。恶气弥散、熏蒸、充斥于机体组织内部,为肿瘤的形成提供了温床,与现代医学肿瘤微环境的概念有着异曲同工之妙。治疗当和其不和、疏利气机,使邪气复正、恶气消散。基于正邪转化角度阐释恶气产生机制,可更好地解释肿瘤的中医病因病机,指导临床治疗。将恶气理论与肿瘤微环境相接轨,可从细胞和分子水平上揭示恶气的内涵,为中医理论现代化研究提供思路和借鉴。

基于PPARγ研究补肺益肾方对肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍的改善机制

目的:在前期确立香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract, CSE)诱导的肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍体外模型后,观察补肺益肾方对胞葬功能、胞葬辅助因子及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)信号通路相关蛋白的影响,探讨其对慢阻肺的作用机制。方法:将NR8383细胞分为正常对照组(20%大鼠空白血清)、模型对照组(20%大鼠空白血清、5%CSE)、18.5 g/kg补肺益肾组(20%大鼠含药血清、5%CSE)、GW9662组(20%大鼠空白血清、10μmol/L GW9662)、补肺益肾方合GW9662组(20%大鼠含药血清、10μmol/L GW9662),采用流式细胞术检测NR8383细胞胞葬功能;酶联免疫吸附实验检测胞葬辅助因子GAS6、MFG-E8的含量;免疫印迹法检测PPARγ信号通路活性及通路下游膜识别受体CD36的表达。:结果:与正常对照组相比,模型对照组的胞葬功能、GAS6、MFG-E8含量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。PPARγ核蛋白、CD36蛋白表达均明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,18.5 g/kg补肺益肾20%含药血清组胞葬功能、GAS6、MFG-E8含量明显升高;PPARγ核蛋白、CD36蛋白表达均明显上调(P<0.05或P<0.01),与GW9662组相比,补肺益肾方合GW9662组胞葬功能、GAS6、MFG-E8含量、PPARγ核蛋白、CD36蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肺益肾方可改善香烟烟雾诱导的肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍,其机理与调控PPARγ通路、上调胞葬辅助因子(MFG-E8、GAS6)及膜识别蛋白CD36有关。

健脾和胃法六君子汤通过影响细胞能量代谢增强顺铂对EC9706活性抑制作用

目的:观察六君子汤增强顺铂对食管癌EC9706细胞疗效并探索机制。方法:以EC9706细胞为研究对象,体外常规培养后将细胞进行如下分组:空白对照组、六君子汤50、100μg/mL组、顺铂1、2μg/mL组、顺铂和六君子汤联合用药组、二甲双胍15 mmol/L组。MTT法检测细胞活性,能量代谢分析系统检测细胞糖酵解速率和线粒体压力,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位。结果:与空白对照组相比,六君子汤(25、50、100、200μg/mL)可明显抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),六君子汤50μg/mL组ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧明显降低、备用呼吸能力明显降低(P<0.05),六君子汤100μg/mL组补偿糖酵解、糖酵解潜能、ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧、备用呼吸能力明显降低(P<0.05);顺铂(1、2、4、8μg/mL)可抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),顺铂1μg/mL组ATP合成耗氧、基础呼吸值明显降低(P<0.05),JC-1单体比率明显提高(P<0.05),顺铂2μg/mL组补偿糖酵解、基础糖酵解、ATP合成耗氧、基础呼吸值明显降低(P<0.05),JC-1单体比率明显提高(P<0.05);二甲双胍(12.5、25、50、100 mmol/L)可抑制EC9706细胞的活力(P<0.05),二甲双胍15 mmol/L组补偿糖酵解、线粒体代谢与基础糖酵解比值、糖酵解潜能、ATP合成耗氧、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧、备用呼吸能力明显降低,JC-1单体比率明显提高(P<0.05);与顺铂2μg/mL组相比,顺铂2μg/mL+六君子汤100μg/mL组细胞活力、补偿糖酵解、基础糖酵解速率、线粒体代谢与基础糖酵解比值、糖酵解潜能、ATP合成耗氧量、线粒体最大耗氧能力、基础呼吸值、非线粒体耗氧和备用呼吸能力明显降低,JC-1单体比率明显提高(P<0.05)。结论:六君子汤增强顺铂对EC9706细胞活力抑制作用,二者在调节食管癌EC9706细胞的糖酵解能力、线粒体呼吸能力和线粒体膜电位方面有协同作用。