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贵州斗篷山地区广义虫草物种多样性初报 被引量:1
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作者 张洁 陆焦焦 +4 位作者 赵欣畅 康超 吴祖建 邓春英 李熠 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期174-187,共14页
笔者于2020年8月对贵州都匀斗篷山地区的虫草资源进行初步调查,采集虫草标本31份,分离菌株8个。利用形态学观察结合ITS序列分析共鉴定出15种已知广义虫草物种,隶属于3科9属,其中麦角菌科奈杰尔菌属(Nigelia)1种;虫草科刺束梗孢属(Akanth... 笔者于2020年8月对贵州都匀斗篷山地区的虫草资源进行初步调查,采集虫草标本31份,分离菌株8个。利用形态学观察结合ITS序列分析共鉴定出15种已知广义虫草物种,隶属于3科9属,其中麦角菌科奈杰尔菌属(Nigelia)1种;虫草科刺束梗孢属(Akanthomyces)2种、虫草属(Cordyceps)5种、棒束孢属(Isaria)1种;线虫草科被毛孢属(Hirsutella)1种、线虫草属(Ophiocordyceps)2种、侧生虫草属(Pleurocordyceps)1种、多头菌属(Polycephalomyces)1种、弯颈霉属(Tolypocladium)1种。鉴定出的物种中有3个中国新记录种,分别是细座刺束梗孢(Akanthomyces tuberculatus)、蜘蛛虫草(Cordyceps araneae)和热带弯颈霉(Tolypocladium tropicale);2个中国大陆地区新记录种,分别是双节棍虫草(Cordyceps ninchukispora)和大团囊多头菌(Polycephalomyces elaphomyceticola)。此外,还有2个疑似新种有待进一步研究。斗篷山地区广义虫草物种多样性较为丰富,揭示广义虫草类群可能在特定区域存在较高的物种多样性。 展开更多
关键词 资源调查 虫草 生物多样性 多样性保护
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基于“一基础、两语言、三学习”模式的“大学计算机基础”教学改革与研究 被引量:1
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作者 吴祖剑 陈展荣 杜慧勤 《科教文汇》 2017年第22期63-66,共4页
以高校通识必修课"大学计算机基础"课程为研究对象,结合现代计算机知识普及与大规模在线课程教学现状,进行基于"一基础、两语言、三学习"教学模式的改革与研究,经过三年的教学实践活动,达到培养并提高大学生自主学... 以高校通识必修课"大学计算机基础"课程为研究对象,结合现代计算机知识普及与大规模在线课程教学现状,进行基于"一基础、两语言、三学习"教学模式的改革与研究,经过三年的教学实践活动,达到培养并提高大学生自主学习与探索研究的综合素质目的。 展开更多
关键词 大学计算机基础 算法 编程语言 慕课
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福建地区草莓斑驳病毒全基因组测序和分子变异分析 被引量:1
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作者 陈道 王新 +3 位作者 江山 张洁 吴祖建 丁新伦 《中国农学通报》 2022年第6期94-101,共8页
为了深入解析草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)的分子变异以及遗传多样性,采用小RNA高通量测序结合RACE和RT-PCR技术获得了福建地区SMoV基因组全长序列。SMoV基因组RNA1和RNA2分别为7034 nt和6354 nt,均含有1个ORF,分别编码... 为了深入解析草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)的分子变异以及遗传多样性,采用小RNA高通量测序结合RACE和RT-PCR技术获得了福建地区SMoV基因组全长序列。SMoV基因组RNA1和RNA2分别为7034 nt和6354 nt,均含有1个ORF,分别编码多聚蛋白P1和P2;SMoV福建分离物同其他15个SMoV分离物的同源性分析表明,RNA1核苷酸和多聚蛋白P1氨基酸同源性分别为79.2%~96.8%和89.0%~99.5%;RNA2核苷酸和多聚蛋白P2氨基酸同源性分别为77.9%~97.8%和89.9%~98.9%。SMoV福建分离物各编码蛋白同其他15个SMoV分离物的同源性分析表明,仅病毒基因组连接蛋白最为保守,其他各蛋白核苷酸序列和氨基酸序列变异均较大。福建分离物和中国部分分离物聚在一个大分支上,和中国分离物DGHY3亲缘关系最近。SMoV中国福建分离物的基因组结构与其他分离物相一致,其核苷酸序列和氨基酸序列分子变异较大,并且和中国其他分离物具有较丰富的遗传多样性,在进化上有一定的地理相关性。 展开更多
关键词 草莓斑驳病毒 高通量测序 全基因组序列 分子变异 遗传进化分析
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木尔坦棉花曲叶病毒编码4个蛋白的抗血清制备
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作者 林丹 林文忠 +4 位作者 尚鹏祥 林文武 丁新伦 吴祖建 张洁 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1359-1364,共6页
【目的】对入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)编码的V1、V2、C1和C4蛋白抗血清进行制备,为CLCuMuV的检验检疫及其致病机制的研究奠定基础。【方法】利用原核表达技术对V1、V2、C1和C4蛋白进行IPTG... 【目的】对入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)编码的V1、V2、C1和C4蛋白抗血清进行制备,为CLCuMuV的检验检疫及其致病机制的研究奠定基础。【方法】利用原核表达技术对V1、V2、C1和C4蛋白进行IPTG诱导表达,western blot分析表达蛋白的特异性后,V1、V2、C1蛋白免疫新西兰大白兔,C4蛋白免疫小白鼠制备抗血清,利用western blot对抗血清的特异性进行分析。【结果】通过PCR分别扩增V1(768 bp)、V2(363 bp)、C1(1089 bp)和C4(300 bp)目的基因片段,分别连接于原核表达载体后,通过SDS-PAGE和western blot分析分别在34、16、44、13 kDa处存在与预期蛋白大小一致的条带,表明该4种蛋白均成功表达。Western blot分析发现获得的4种抗血清均具有较高的特异性。【结论】成功制备了CLCuMuV V1、V2、C1和C4蛋白的抗血清,可用于后续建立CLCuMuV的检疫方法及研究其致病机制。 展开更多
关键词 棉花 木尔坦棉花曲叶病毒 原核表达 免疫印迹 抗血清
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基于粗提物的水稻条纹病毒体外“抓帽”体系
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作者 林文忠 吴然 +4 位作者 金晶 丘萍 张洁 吴祖建 杜振国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期4440-4448,共9页
【背景】布尼亚病毒目(Bunyavirales)和正黏病毒科(Orthomyxoviridae)病毒从帽子结构下游10—20个碱基处切割寄主mRNA,以5′端切割产物(帽子序列)作为引物起始自身基因组的转录,生成含一段异源帽子序列的病毒mRNA,这一过程称为“抓帽”... 【背景】布尼亚病毒目(Bunyavirales)和正黏病毒科(Orthomyxoviridae)病毒从帽子结构下游10—20个碱基处切割寄主mRNA,以5′端切割产物(帽子序列)作为引物起始自身基因组的转录,生成含一段异源帽子序列的病毒mRNA,这一过程称为“抓帽”。水稻条纹病毒(rice stripe tenuivirus,RSV)是一种布尼亚病毒,其“抓帽”机制还不甚清楚。【目的】研究RSV粗提物能否从溶液中的外源mRNA“抓帽”,以建立一种便捷的体外体系,用于解析RSV“抓帽”和转录机制。【方法】以PEG沉淀和超速离心法粗提RSV,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱技术分析粗提物成分。然后取少量粗提液,加入富含珠蛋白(globin)mRNA的兔网织红细胞裂解液(rabbit reticulocyte lysate,RCL)和合适浓度的金属离子配制体外“抓帽”体系。待体外反应结束,提取体系中总RNA,以巢式RT-PCR扩增含珠蛋白-αmRNA帽子序列的RSV mRNA,并对其进行克隆,通过序列分析比较RSV体外“抓帽”与体内“抓帽”的异同。【结果】从100 g感染RSV的水稻叶片获得RSV粗提液2 mL。除RSV病毒粒子外,粗提液中还含核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶等多种叶绿体蛋白。取2μL粗提液,加入4 mmol·L-1 MgCl2、2 mmol·L-1 NTP、0.8 U·μL-1 RNA酶抑制剂和8μL RCL,配成20μL反应体系,30℃孵育1.5 h后,巢式RT-PCR扩增到了目的条带,表明RSV粗提物能切割溶液中的珠蛋白-αmRNA,并利用其帽子序列合成自身mRNA。在反应体系中加入帽子结构类似物m7G(5′)ppp(5′)G后进行相同反应,目的条带变淡,且变淡程度与所加入m7G(5′)ppp(5′)G的浓度成正比,表明识别帽子结构是RSV从溶液中切割利用珠蛋白-αmRNA的前提。对巢式RT-PCR产物克隆和测序后分析发现,与在体内的情况类似,RSV从帽子结构下游的A或C处切割珠蛋白-αmRNA,得到的帽子序列与病毒模板链3′端的U或G配对后引发转录。在利用珠蛋白-αmRNA帽子序列进行转录的过程中,RSV频繁使用引发与重配,且在合成核蛋白基因NP时比在合成主要非核蛋白基因NCP时使用该机制的频率更高。【结论】RSV粗提物能从溶液中的mRNA“抓帽”,且在切取和利用帽子序列的方式上,其表现与细胞内的RSV无明显差别。因而,粗提物可以用来解析RSV的“抓帽”机制,甚至用于研究RSV的转录。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 抓帽机制 体外转录
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木尔坦棉花曲叶病毒“C4 ORF”编码蛋白对病毒致病性的影响
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作者 郑信诗 尚鹏祥 +3 位作者 李景远 丁新伦 吴祖建 张洁 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期2095-2104,共10页
【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通... 【目的】通过分析发现木尔坦棉花曲叶病毒(cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)C4开放阅读框(open reading frame,ORF)附近可编码3个不同大小的蛋白,而NCBI数据库登录的CLCuMuV各个分离物编码的C4蛋白大小也不尽相同,本研究试图通过分析该3个假定的“C4 ORF”编码蛋白对病毒致病性的影响,以明确CLCuMuV C4蛋白ORF的确切定位。【方法】根据双生病毒编码蛋白的保守性,在CLCuMuV C4 ORF附近查找到3个大小不等的ORF,分别标记为C4-L(567 nt)、C4-M(546 nt)和C4-S(303 nt)。利用同源重组的方法将该3个ORF分别构建到PVX异源表达载体,通过农杆菌介导的植物接种法,分析PVX介导的3个蛋白在本氏烟表达对本氏烟症状的影响。利用同源重组的方法构建CLCuMuV野生型及C4-L或C4-S缺失突变型的侵染性克隆,同样通过农杆菌介导的植物接种法,分别与其伴随DNA-β分子的侵染性克隆接种本氏烟,分析C4-L或C4-S缺失对CLCuMuV致病性的影响,并利用Southern blot和Western blot分别对接种烟草的病毒基因组的积累量和病毒C4蛋白的表达量进行分析。同时利用Gateway系统载体对C4-L和C4-S蛋白在本氏烟叶片表皮细胞中的亚细胞定位进行分析。【结果】PVX异源表达载体接种本氏烟,结果发现PVX-C4-L和PVX-C4-S接种的本氏烟叶片卷曲、叶柄伸长,并且PVX-C4-S症状更重,而PVX-C4-M接种的本氏烟症状较轻或基本无症状,Western blot试验也在PVX-C4-L和PVX-C4-S接种组检测到了C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白对PVX异源病毒的致病性影响最大。侵染性克隆接种本氏烟,结果发现野生型(CLCuMuV)和C4-L突变型(CLCuMuV-ΔL)接种的本氏烟叶片皱缩增生、叶柄和茎秆扭曲,而C4-S突变型(CLCuMuV-ΔS)和对照组(Mock)接种的本氏烟未显示任何症状,并且前两者的植株高度明显矮于后两者,同时Southern blot试验在CLCuMuV和CLCuMuV-ΔL接种的本氏烟中均检测到大量病毒基因组的积累,而Western blot试验也在其中检测到C4蛋白的表达,说明C4-S ORF编码的蛋白在CLCuMuV诱导寄主产生症状过程中起关键作用。亚细胞定位发现YFP-C4-L主要定位在本氏烟叶片表皮细胞的叶绿体,YFP-C4-S则定位在细胞膜或细胞质周边,并有点状聚集体结构。【结论】C4-S ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染必不可少,而C4-L和C4-M ORF编码的蛋白对CLCuMuV的侵染不是必需。 展开更多
关键词 木尔坦棉花曲叶病毒 C4开放阅读框 致病性
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2019—2020年河南省小麦茎基腐病病原菌鉴定及致病力测定 被引量:1
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作者 高飞 谢源 +4 位作者 潘鑫 李洪连 张晓婷 吴祖建 关雄 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期298-305,共8页
为监测小麦茎基腐病病原菌的变化,2019—2020年自河南省安阳、濮阳和鹤壁等17个市129个采样点采集小麦茎基腐病病株样品并分离病原菌,对所有分离物进行形态学鉴定,利用特异性引物、ITS和EF-1α基因序列进行分子生物学鉴定,并于室内对优... 为监测小麦茎基腐病病原菌的变化,2019—2020年自河南省安阳、濮阳和鹤壁等17个市129个采样点采集小麦茎基腐病病株样品并分离病原菌,对所有分离物进行形态学鉴定,利用特异性引物、ITS和EF-1α基因序列进行分子生物学鉴定,并于室内对优势病原菌菌株进行致病力测定。结果表明,共分离得到892株镰孢菌Fusarium分离物,所得分离物中假禾谷镰孢F.pseudograminearum共851株,所占比例为95.41%,为优势种;禾谷镰孢F.graminearum共16株,所占比例为1.79%。除信阳市外,其他16个市优势病原菌均为假禾谷镰孢。不同假禾谷镰孢菌株存在明显的致病力分化,但多数为强致病力菌株。 展开更多
关键词 小麦茎基腐病 病原菌 优势种 假禾谷镰孢 致病力分化
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教学生态视域下基层教学组织的回归与重构 被引量:3
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作者 叶玲娟 林文雄 +2 位作者 吴祖建 吴冬青 郑长焰 《高等农业教育》 2020年第2期80-83,共4页
高校基层教学组织作为教学组织、教学管理和教学改革的最基本单位,是高校内涵发展和人才培养的落脚点。各高校的基本教学组织已经呈现出结构失调、功能式微、环境杂乱等的生态困境。因此,教学生态的基层组织建设策略主要是要基于生态稳... 高校基层教学组织作为教学组织、教学管理和教学改革的最基本单位,是高校内涵发展和人才培养的落脚点。各高校的基本教学组织已经呈现出结构失调、功能式微、环境杂乱等的生态困境。因此,教学生态的基层组织建设策略主要是要基于生态稳定性和开放性的要求来重构基层教学组织形式,并利用生态共生和群体动力原理来实现基层教学组织功能的回归。 展开更多
关键词 基层教学组织 生态学 重构 回归
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草莓轻型黄边病毒中国分离物全基因组序列测定和分析 被引量:1
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作者 江山 陈道 +3 位作者 叶立乐 张洁 吴祖建 丁新伦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1187-1194,共8页
草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)是引起我国草莓病毒病害的重要病毒之一,我们测定了共侵染草莓植株的2个SMYEV中国分离物FJ1和FJ2的全基因组序列。FJ1和FJ2分离物基因组全长均为5971 nt,包含5个开放阅读框(O... 草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)是引起我国草莓病毒病害的重要病毒之一,我们测定了共侵染草莓植株的2个SMYEV中国分离物FJ1和FJ2的全基因组序列。FJ1和FJ2分离物基因组全长均为5971 nt,包含5个开放阅读框(ORF),其中,FJ2分离物ORF4编码蛋白C端缺乏7 aa。SMYEV分离物FJ1和FJ2的基因组核苷酸序列一致性为89.8%,两者和其他SMYEV分离物的基因组核苷酸序列一致性分别为83.7%~89.8%和84.1%~90.0%;基于CP基因的系统进化分析表明,SMYEV分离物分为2个大组群4个亚群,FJ1和FJ2分别归属不同的组,两者具有较远的亲缘关系,其中FJ1与中国分离物sy01和sy04、日本分离物T1以及韩国分离物KNS1亲缘关系最近,FJ2与中国分离物sy02、加拿大一株分离物PEI113_12以及日本分离物T2亲缘关系最近。RDP4重组分析表明,FJ1和FJ2均存在潜在的重组事件。本研究首次报道了我国SMYEV基因组全长序列,为该病毒在我国的侵染流行、检测和防控提供了理论基础。 展开更多
关键词 草莓 草莓轻型黄边病毒 基因组全长 序列分析
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Identification of Pns12 as the second silencing suppressor of Rice gall dwarf virus 被引量:7
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作者 wu JianGuo WANG ChunZheng +5 位作者 DU ZhengGuo CAI LiJun HU MeiQun wu zujian LI Yi XIE LianHui 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第3期201-208,共8页
RNA silencing is a conserved mechanism found ubiquitously in eukaryotic organisms.It has been used to regulate gene expression and development.In addition,RNA silencing serves as an important mechanism in plants' ... RNA silencing is a conserved mechanism found ubiquitously in eukaryotic organisms.It has been used to regulate gene expression and development.In addition,RNA silencing serves as an important mechanism in plants' defense against invasive nucleic acids,such as viruses,transposons,and transgenes.As a counter-defense,most plants,and some animal viruses,encode RNA silencing suppressors to interfere at one or several points of the silencing pathway.In this study,we showed that Pns12 of RGDV (Rice gall dwarf virus) exhibits silencing suppressor activity on the reporter green fluorescent protein in transgenic Nicotiana benthamiana line 16c.Pns12 of RGDV suppressed local silencing induced by sense RNA but had no effect on that induced by dsRNA.Expression of Pns12 also enhanced Potato virus X pathogenicity in N.benthamiana.Collectively,these results suggested that RGDV Pns12 functions as a virus suppressor of RNA silencing,which might target an upstream step of dsRNA formation in the RNA silencing pathway.Furthermore,we showed that Pns12 is localized mainly in the nucleus of N.benthamiana leaf cells. 展开更多
关键词 水稻瘤矮病毒 RNA沉默 双链RNA 鉴定 绿色荧光蛋白 马铃薯X病毒 真核生物 基因表达
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