鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究

建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。

女贞子中主要活性成分红景天苷和特女贞苷的逆转铁过载促进骨形成相互作用研究

目的评价女贞子中主要活性成分红景天苷和特女贞苷的逆转铁过载促进骨形成抗绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)效应,并探讨其相互作用关系。方法建立柠檬酸铁铵诱导的斑马鱼骨质疏松模型,分别评估红景天苷(1、5、25、50、100μmol/L)、特女贞苷(1、5、25、50、100μmol/L)及其两种成分混合溶液(1∶1)对骨矿化的影响;茜素红染色后以骨骼染色面积和累积光密度评价其骨矿化程度,并运用等效线法和等辐射分析法评价红景天苷、特女贞苷抗PMOP的相互作用。结果红景天苷、特女贞苷及其混合溶液均有较好地逆转铁过载所致的骨形成抑制作用,且在1~100μmol/L内呈现显著的浓度依赖性;在等效线法中,经半数有效浓度(EC50)计算得混合组γ>1,表明二者无明显的协同作用;在等辐射分析法中,混合组中相应成分的EC50比值分数总和为1.16,其复合点落在95%可信限内(P>0.05),表明两者呈相加作用关系,且未见明显协同作用。结论红景天苷和特女贞苷均可逆转铁过载诱导的骨形成抑制,且当红景天苷和特女贞苷联合使用时,两者呈相加作用。

基于WOFOST模型与遥感数据同化的县级尺度玉米估产研究

区域尺度的作物生长动态监测和产量预测对于保障粮食安全和农业政策的制定具有重要参考依据。遥感数据同化应用极大提高了作物估产的时效性和精度。为及时、准确地实现县级尺度粮食产量的估测,以及提升产量估测的精度,以辽宁省铁岭县为研究区,采用WOFOST(world food studies)模型与遥感同化相结合的方法对铁岭县玉米进行估产研究。通过采用扩展傅里叶幅度敏感性检验算法(extened Fourier amplitude sensitivity test,EFAST)敏感性分析方法实现玉米估产敏感性参数的分析,以及本地化;通过采用参数自动率定程序PEST(parameter estimation)实现参数的优化,验证结果为采样点产量的平均误差为852.39 kg·hm^(-2),模型模拟的精度达到92.82%。为进一步提高和优化模型估产精度,将遥感反演得到的叶面积指数采用集合卡尔曼滤波算法与模型模拟的叶面积指数进行数据同化,平均误差从同化前的852.39 kg·hm^(-2)降低为435.01 kg·hm^(-2),估产精度从92.82%提高到96.33%,有效提高了WOFOST模型估产的精度。结果表明:水分对玉米的生长发育限制并不大,其产量形成主要受光温影响,对温度、光能利用效率和最大同化速率有关的参数具有较高的敏感性;优化后的模型能够较好模拟铁岭县玉米生长发育情况,产量验证表明优化后的模型模拟的效果较好,但仍存在一定的误差;比值植被指数与叶面积指数的相关性最高,反演模型精度较好,反演结果表明叶面积指数在抽雄吐丝期差距较大,而在成熟期的差距不大;经过作物模型与遥感数据同化之后,估产的精度得到明显提高,说明遥感与作物模型同化是一种有效地提高作物估产和产量预测精度的方法。

小麦中miR164的靶基因鉴定及其在衰老过程中的表达

miR164是植物中一种重要的非编码RNA,对植物的生长发育具有重要作用。为了解miR164靶基因与小麦衰老的关系,本研究通过在线软件对小麦中miR164家族成员进行了鉴定并对其进行生物信息学和表达分析。结果表明,从小麦中共鉴定出13个miR164家族成员,其不均匀分布在9条染色体上。系统进化分析表明,13个小麦miR164与同属于禾本科单子叶植物的水稻亲缘关系较近。13个Tae-miR164均能形成稳定的二级结构,成熟序列碱基具有高保守性,仅有3个Tae-miR164成员在第21位存在差异,成熟序列产生于前体中具有碱基高保守性的第1~21位。Tae-miR164的靶基因中,有18个为NAC转录因子,占所有靶基因总数的75%,表明Tae-miR164的主要靶基因为NAC转录因子。Tae-miR164家族成员在小麦叶片中的表达量明显高于其他组织;在小麦叶片衰老过程中,与其他Tae-miR164靶基因相比,有3个Tae-miR164靶基因表达差异显著,其ID分别为TraesCS4A02G225100、TraesCS5B02G054800和TraesCS5A02G04910,其中TraesCS5A02G04910为NAC转录因子,推测NAC转录因子与小麦叶片衰老密切相关。比较不同物种中miR164家族成员数量,发现miR164家族成员数量与物种基因组大小和物种亲缘关系无关。

外源茉莉酸甲酯诱导大麦叶斑病抗性研究

【目的】探讨不同浓度外源茉莉酸甲酯(MeJA)诱导大麦抗叶斑病效应差异及其分子机制,为应用MeJA防治大麦叶斑病提供理论依据。【方法】以‘蒙啤麦3号’大麦品种幼苗为材料,设置不接菌(无菌水处理叶片)、接菌(无菌水处理叶片接种麦根腐平脐蠕孢菌)和接菌+MeJA(0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mmol/LMeJA喷施叶片后接菌)3组处理,于三叶期调查叶斑病发病情况,并据此筛选最适MeJA浓度,然后测定不接菌、接菌及接菌+MeJA(最适浓度)下不同处理时间叶片的抗氧化酶、抗病相关酶活性、丙二醛含量、渗透调节物质含量以及相关基因表达水平。【结果】(1)叶面喷施外源MeJA提高了大麦对叶斑病的抗性,1.5mmol/LMeJA处理叶片的病情指数较对照显著降低19.03%,诱导抗性效果最佳;(2)与单独接菌处理相比,1.5mmol/LMeJA处理大麦叶片超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性均显著提高,而其丙二醛、脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量显著降低,同时受MeJA调控转录因子及编码抗病相关酶的基因表达量显著上调。【结论】外源喷施1.5mmol/LMeJA通过调节抗病相关酶活性和渗透调节物质含量,以及调控抗病相关酶基因及茉莉酸信号途径关键转录因子基因表达,进而提高大麦植株的叶斑病抗性。

盐胁迫对小麦籽粒萌发中淀粉分解及苗期根系生长的影响

【目的】通过测定盐(NaCl)胁迫下两个小麦品种籽粒萌发过程中的淀粉颗粒的分解、淀粉酶活性及根系生长等指标,研究并解释其耐盐性,以期为筛选耐盐小麦种质筛选提供理论依据。【方法】试验在小麦籽粒萌发过程中设0 mmol/L(CK)、100 mmol/L、200 mmol/L、300 mmol/L 4个NaCl胁迫浓度处理。在胁迫48 h时,使用扫描电子显微镜观察胚乳中淀粉颗粒的分布状况,利用3,5-二硝基水杨酸法测定籽粒中α-淀粉酶活性,发芽势及发芽率;在胁迫4、6、8、10、12 d时测定幼苗的根长、根面积、根体积等指标。【结果】与CK相比,随着NaCl浓度的增大,两个小麦品种籽粒胚乳A、B型淀粉粒的数量逐渐增多,紫小麦的A、B型淀粉降解情况优于甘春24号;两个小麦品种籽粒的α-淀粉酶的活性逐渐减小;在同一时期,两个小麦品种幼苗的发芽势、发芽率及根系生长指标均呈现逐渐减小趋势,且与CK差异显著(P<0.05),甘春24号降幅降低幅度高于紫小麦。【结论】紫小麦耐盐性优于甘春24号。

自膨式瓣膜行导管主动脉瓣膜置换术治疗单纯主动脉瓣反流患者35例

目的评价主动脉瓣膜反流(AR)患者应用自膨式瓣膜行经导管主动脉瓣膜置换术(TAVR)的安全性及可行性。方法回顾性分析2019年8月—2022年8月于河北医科大学第二医院心脏外科应用自膨式瓣膜行TAVR的重度AR患者35例,其中男25例,女10例,年龄59~83(70.03±1.07)岁。分析手术成功率、病死率、手术并发症发生率及术后患者左心功能变化。结果35例患者均采用自膨式介入瓣膜经股动脉行TAVR手术成功,成功率100%,无死亡病例。采用体外循环辅助完成手术的患者17例(48.6%),平均体外循环辅助时间(32.5±14.6)min。同期行经皮冠状动脉介入术(PCI)治疗的患者5例(14.3%)。采用瓣中瓣技术的患者14例(40.0%)。术前LVEF(48.01±12.20)%,术后1周LVEF(50.22±15.11)%,差异无统计学意义(t=0.552,P>0.05);术前左心室舒张末期内径(65.04±10.10)mm,术后1周左心室舒张末期内径(63.44±11.03)mm,差异无统计学意义(t=0.710,P>0.05)。术前5例患者存在二尖瓣中量及以上反流,术后二尖瓣反流均较术前减轻,其中2例转为少中量反流,3例转为少量反流。术后即刻出现完全性左束支传导阻滞14例(40.0%),三度传导阻滞1例(2.9%),转入心内科植入永久起搏器。术中出现心包积液1例(2.9%),胸骨正中剑突下切口植入心包引流管后痊愈。少中量瓣周漏3例(8.6%),其余为少量及微量瓣周反流32例(91.4%)。结论应用自膨式瓣膜经股动脉行TAVR治疗重度主动脉瓣关闭不全患者手术安全性高,具有创伤小、并发症少、恢复快等优点。

老年退行性心脏瓣膜病临床误诊分析

目的总结分析老年退行性心脏瓣膜病(SDHVD)的临床特点及误诊原因、防范措施。方法对2020年1月—2022年12月收治的曾在外院误诊的SDHVD 15例的临床资料进行回顾性分析。结果15例中单纯主动脉瓣病变8例,二尖瓣病变5例,主动脉瓣及二尖瓣双病变2例;有高血压病史8例,高脂血症史6例,2型糖尿病史4例,慢性阻塞性肺疾病史3例,脑卒中史2例;有吸烟史7例。10例因伴不同程度心悸、胸闷、气促、乏力及心前区闷痛,初步诊断为冠心病;5例因伴不同程度心悸、胸闷、气促、乏力及下肢水肿,听诊发现心脏杂音,初步诊断为风湿性心脏病。误诊时间0.5~2个月。初步诊断为冠心病者予药物治疗症状未见缓解就诊我院;初步诊断为风湿性心脏病者未予任何治疗转我院进一步诊治。15例就诊我院后,根据临床表现和高压断层X线检查、心脏超声心动图检查等,确诊为SDHVD。6例行介入治疗,后失访;9例行药物保守治疗,随访1年病变瓣膜钙化情况控制较好。结论SDHVD病初常无明显症状,或症状轻微被老年基础疾病症状所掩盖,加之部分患者心脏瓣膜杂音缓慢发展,易误诊。提高接诊医生对本病的认知、丰富其诊断及鉴别诊断经验,及早行高压断层X线及超声心动图等检查,有利于减少或避免本病误诊误治。

糖尿病加速肌腱病进展的致病机制研究进展

目的检索搜集既往有关糖尿病影响肌腱病进展的相关文献,总结相关结论并讨论糖尿病加速肌腱病进展的发病机制,主要包括概述糖尿病患者病变肌腱的生物力学改变与组织学变化,以及其从细胞分子水平上的发病机制等方面的问题。方法通过检索PubMed、Springer Link、中国知网(CNKI)、谷歌学术等中英文数据库,查阅并分析涉及与糖尿病肌腱病相关领域的国内外文献。结果以往大多数研究更支持退变学说作为肌腱病的发病机制,但目前越来越多研究者发现糖尿病作为一种全身性的代谢性疾病,可通过多种机制诱发或加重肌腱病的进展,如晚期糖基化终末产物(AGEs)在病变部位处沉积、病变部位慢性炎症反应、肌腱细胞氧化应激水平上升、基质金属蛋白酶和谷氨酰胺转氨酶活性的改变等。通过概述分析既往研究者们提出的糖尿病对肌腱病的相关致病机制的多种理解,糖尿病与肌腱病之间的关系逐渐明确。结论作为一种全身性的代谢性疾病,糖尿病可通过多种途径和机制诱发或加重肌腱病的进展,通过研究和阐明这些途径可以为我们研究和治疗肌腱病提供有力武器。但目前糖尿病肌腱病可能存在的发病途径繁多,仍需逐步开展研究以进一步明确其主要发病机制。

基于指南的两种失禁护理方案用于老年COVID-19伴失禁患者的效果分析

背景老年人是新型冠状病毒感染(COVID-19)和伴失禁的高发人群,也是失禁相关性皮炎(IAD)的易患人群,如何做好失禁护理以提高预防和治疗IAD的有效性一直在探索中。目的探讨基于指南的两种失禁护理方案用于老年COVID-19伴失禁患者的应用效果,为做好此类患者的失禁护理和预防IAD提供参考依据。方法采用探索性干预研究设计,于2022-12-26—2023-03-30在中国人民解放军东部战区总医院、中国人民解放军陆军特色医学中心和南京医科大学附属逸夫医院3所医院的外科和内科选取符合条件的老年COVID-19患者60例为研究对象。将研究对象非随机分为干预组和对照组,其中中国人民解放军东部战区总医院30例患者纳入干预组,另外两家医院30例患者纳入对照组。同时将两组中的IAD患者分别纳入干预亚组和对照亚组。分析老年COVID-19伴失禁患者的病情特点和失禁类型,基于指南推荐,改良修订了评估失禁和皮肤状况(A)、识别和管理危险因素(I)、管理失禁(M),皮肤护理(S)“AIMS四步改良失禁”护理方案(简称AIMS护理方案)。干预组采用改良AIMS护理方案,对照组采用结构化皮肤护理方案,均连续干预至少14 d,每班检查皮肤,采用国际标准判断是否发生IAD以及变化。主要结局指标为两组患者IAD的发生率,次要结局指标为IAD愈合率和愈合时间。收集记录两组患者干预前后的相关临床资料并进行比较。结果两组患者一般资料包括性别、年龄、失禁类型、失禁频次、慢性病共病、血清白蛋白、血红蛋白、血糖、脉氧浓度、Braden计分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。60例老年病毒性肺炎伴失禁患者IAD发生率为33.3%(20/60),其中对照组IAD发生率为43.3%(13/30),干预组IAD发生率为23.3%(7/30);两组患者IAD发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两亚组患者IAD分级、愈合率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);干预亚组患者IAD发生时间(t=3.225,P=0.005)较对照亚组延迟,IAD愈合时间(t=2.644,P=0.020)、住院时间(t=4.364,P<0.001)短于对照亚组。结论基于指南的两种失禁护理方案均能够有效预防老年失禁患者发生IAD并促进其愈合,但改良的AIMS护理方案效果更优,可在临床护理中参考使用。

产前微信平台知信行健康教育对孕产妇妊娠结局影响

目的:观察基于微信平台的知信行健康教育对门诊孕产妇妊娠结局的影响.方法:选择2023年3月-2023年9月在本院产前检查80例孕产妇,随机数字表法分为对照组(n=40)采用常规门诊健康教育,观察组(n=40)采用基于微信平台的知信行健康教育.比较两组分娩自我效能、分娩方式、抑郁状态、焦虑状态、母乳喂养率、妊娠结局及新生儿Apgar评分.结果:干预后,两组简化版分娩自我效能量表(CBSEI-C32)评分均大于干预前且观察组(256.93±19.92分)大于对照组(187.15±24.55分),(62.5%)高于对照组(20.0%),阴道助产率(17.5%)、剖宫产率(20.0%)低于对照组(37.5%、42.5%);干预后两组汉密顿抑郁量表(HAMD)、汉密顿焦虑量表(HAMA)评分均小于干预前且观察组(8.69±1.63分、11.16±2.03分)小于对照组(14.58±1.82分、14.45±2.92分);产后1周、4周、8周、16周观察组母乳喂养率均高于对照组,产妇不良结局总发生率(7.5%)、新生儿不良结局总发生率(7.5%)均低于对照组(25.0%、27.5%)(均P<0.05),新生儿出生1minApgar评分两组无差异(P>0.05).结论:微信平台知信行健康教育可增强门诊孕产妇分娩自我效能,提高母乳喂养率、顺产率,改善妊娠结局,减轻抑郁、焦虑.

注意力和生成对抗网络融合的图像超分辨率重建

针对生成对抗网络训练过程中超分辨率重建图像边缘细节模糊的问题,提出注意力和生成对抗网络相融合改进网络.通过在生成对抗网络中加入注意力模块,减少对深层网络的依赖,降低模型的深度.加入残差模块进行密集连接,减少网络参数的个数,提取出更丰富的图像特征,提高计算效率.在生成器损失函数中增加纹理损失和感知损失,纹理损失用于增强局部信息的匹配度,感知损失在激活层之前利用特征信息获得更详细的特征.实验结果表明,与双三次、SRCNN、VDSR和SRGAN主流算法对比,改进后的生成对抗网络峰值信噪比提高了0.45db,结构相似度增加了0.02,增强了重建图像的纹理细节.

流程化管理在口腔医疗突发事件中的应用价值

目的分析流程化管理在口腔医疗突发事件中的应用价值。方法回顾性分析2020年12月至2021年12月四川大学华西口腔医院修复一科诊治的160例患者的一般资料,按流程化管理实施时间将患者分组,分为对照组(2020年12月至2021年5月实施常规护理)和观察组(2021年6~12月实施流程化管理),各80例。统计2组护理人员的医疗突发事件认识情况和基础知识水平,以及2组患者的突发事件发生率和护理满意率。结果实施前,2组护理人员的医疗突发事件认知评分和急救基础知识评分比较,均无统计学差异(P均>0.05);实施后,观察组的上述评分均明显高于对照组(P均<0.05)。观察组的突发事件总发生率(2.50%)低于对照组(11.25%),护理总满意率(98.75%)高于对照组(91.25%),均存在统计学差异(P均<0.05)。结论流程化管理可提高护理人员的医疗突发事件认知水平和急救知识水平,降低突发事件发生率,提高患者的护理满意率。

神经外科术后脑脊液PCT影响因素及价值研究

目的探讨神经外科术后脑脊液降钙素原(procalcitonin,PCT)的影响因素及临床价值。方法收集2021年1月至2022年5月宁波大学附属人民医院神经外科术后所有怀疑颅内感染患者腰椎穿刺或脑室引流的脑脊液及血清样本。Logistic多因素分析神经外科术后脑脊液PCT升高的影响因素。所有研究对象根据颅内感染诊断标准分为颅内感染组和无菌性脑膜炎组。非参数检验比较颅内感染组和无菌性脑膜炎组各指标差异。采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价各指标对颅内感染的诊断效能。结果本研究共入组139例患者,其中109例患者脑脊液PCT升高(78.4%),其中颅内感染患者59例(54.1%),无菌性脑膜炎患者50例(45.9%)。Logistic多因素分析结果表明,颅内感染和血性脑脊液是神经外科术后脑脊液PCT增高的独立危险因素;颅内感染组与无菌性脑膜炎组的脑脊液PCT和血清PCT水平差异无统计学意义。两组患者的脑脊液乳酸水平和脑脊液PCT/血清PCT差异有统计学意义。脑脊液PCT、血清PCT、脑脊液乳酸、脑脊液PCT/血清PCT、脑脊液PCT和乳酸联合诊断ROC曲线下面积分别为0.56、0.58、0.82、0.85、0.83。结论颅内感染和血性脑脊液是神经外科术后脑脊液PCT升高的独立因素。单纯以脑脊液PCT增高诊断神经外科术后颅内感染价值有限,需通过联合其他指标提高诊断效能。

外源甜菜碱和脯氨酸对盐胁迫下大麦种子萌发及幼苗生长的影响

为探讨盐胁迫条件下外源甜菜碱(GB)和脯氨酸(Pro)对不同大麦品种种子萌发及幼苗的效应,以课题组前期筛选到的耐盐品种中川大麦和盐敏感品种ZY218为材料,在萌发期和苗期以200 mmol·L^(-1)NaCl为胁迫条件,分别施加浓度为0、0.5、1.0、5.0、10.0 mmol·L^(-1)的外源GB和浓度为0、5.0、15.0、30.0、45.0 mmol·L^(-1)的外源Pro进行处理,测定并分析了不同处理下大麦萌发及幼苗相关指标。结果表明,与不添加外源物质的对照相比,施加外源GB和Pro均可有效缓解盐胁迫对大麦种子萌发及地上部分生长的抑制作用;提高叶片过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及叶绿素含量;外源Pro可以显著增加幼苗的总根长、总根体积和总根表面积,有效缓解盐胁迫对大麦幼苗根系生长的抑制作用,且对盐敏感品种效应更大。因此,施加外源GB或Pro可有效缓解盐胁迫对大麦种子萌发和幼苗生长的抑制作用。

大麦叶斑病菌侵染过程及几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性变化的研究

【目的】探究叶斑病菌Bipolaris sorokiniana对大麦叶片的侵染过程。【方法】以大麦感病品种蒙啤1号(MP1)和抗病品种蒙啤3号(MP3)为材料,接菌后,并在不同时间采集MP1发病叶片制做切片,结合石蜡切片和扫描电镜观察叶斑病病原菌对大麦叶片的侵染过程。【结果】接菌后,MP1和MP3中的CHT和β-1,3-GA的活性均高于对照,且MP3中的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性要高于MP1。孢子在接种12~24 h后开始萌发,顶端长出长短不一的芽管;接种36 h后,菌丝伸长且向细胞间隙处直接侵入大麦叶片表皮细胞内,组织内部的孢子主要分布在维管束中;接种4~5 d后,菌丝快速产生分枝,呈网状扩散,叶片表面形成密集的菌丝网,叶片外部出现明显病斑;接种7~14 d后,叶片表皮的孢子明显减少,在维管束组织中存在孢子。【结论】病原菌从细胞间隙侵入可能是该病侵入的主要途径,孢子萌发后形成菌丝进入组织,再向其他部位蔓延,病原菌侵入后期寄主表面菌丝形成网状结构。

小麦耐低磷基因型的鉴定和筛选

【目的】为了鉴定供试小麦品种的耐低磷特性。【方法】通过盆栽方法,设置正常磷(CK)和低磷胁迫(LP)处理,对9个小麦品种的苗期性状地上干质量、地下干质量、苗长总根长等8个指标进行鉴定分析。【结果】通过主成分分析将苗期测定的8个指标转化为3个综合指标,累计贡献率为87.00%,然后采用隶属函数分析法对性状指标进行综合分析排序,以综合评价值(D值)为依据对品种的耐低磷特性进行排序和聚类,顺序依次为为新春17号、中麦175、甘春26号、陇春27号、西旱3号、陇春23号、陇春9786、西旱2号、宁春4号。其中新春17号D值达到0.80;其次为中麦175的为0.78;宁春4号最低为0.37。【结论】苗期试验初步筛出新春17号和中麦175为耐低磷材料,而西旱2号和宁春4号为磷敏感品种。

大麦PHT1基因家族的鉴定及表达特性分析

植物磷转运蛋白1(phosphase transporter protein 1,PHT1)家族在植物磷吸收和转运中发挥着重要作用。为研究大麦PHT1基因家族成员的特性,利用生物信息学方法在全基因组范围内对大麦PHT1家族成员进行鉴定,结果共鉴定到14个大麦PHT1(HvPT1~HvPT14)基因,分布在2H、4H、5H和7H染色体上。根据系统发育关系、基因结构和保守蛋白基序,可将14个大麦PHT1基因分为3个亚群。基于RNA-seq数据对大麦品种GN121(磷高效基因型)根和叶片中12个PHT1基因的表达模式进行分析,发现在低磷胁迫处理下,根中HvPT1、HvPT7、HvPT10和HvPT12基因以及叶片中HvPT13基因均上调表达。进一步利用荧光定量PCR技术对大麦品种GN121和GN42(磷低效基因型)根中10个PHT1基因的表达模式进行分析,发现两个品种根中HvPT7、HvPT8、HvPT10、HvPT12和HvPT14基因在磷恢复后第3 d的表达量均显著低于低磷处理第22 d的表达量,推测这5个基因在低磷胁迫下参与磷的吸收和转运;此外HvPT5基因在磷恢复后第3 d的GN42根中表达量显著下降,而在GN121根中的表达量显著上升,说明HvPT5基因的表达与品种类型有关。

A型塞内卡病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立基于VP2蛋白、VP3蛋白检测猪塞内卡病毒A(SVA)抗体血清学方法。本研究扩增SVA VP2基因和VP3基因(VP23基因),基因全长1569 bp,并与原核表达载体pGEX-6p-1构建重组载体,IPTG诱导表达可溶性rVP23蛋白,经蛋白酶切除标签蛋白得到sVP23蛋白,分子量约为58 kDa。通过矩阵优化、确定临界值、敏感性分析、特异性鉴定,建立了SVA抗体间接ELISA方法。该方法的S/P临界值标准为0.35,批内批间变异系数均小于7%,与中和试验结果符合率为95.49%。上述结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。

偏穗鹅观草RT-PCR内参基因筛选及验证

偏穗鹅观草(Roegneria komarovii Nevski)是小麦族鹅观草属的植物,具有抗旱、抗病等特点,是多年生优良牧草,也是小麦三级资源库。为分析偏穗鹅观草耐盐机制及抗病基因的表达,筛选出偏穗鹅观草在不同非生物胁迫条件下稳定表达的内参基因,以偏穗鹅观草根、茎、叶对照组及盐胁迫处理组的偏穗鹅观草为材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,对肌动蛋白(Actin1、Actin2、Actin3)、微管蛋白(BUTB)、亲环素(Cyclophilin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate,GAPDH)、组蛋白(histone 3,H3)、延伸因子(EF1a1)8个常用小麦内参基因进行筛选;并借助geNorm、BestKeeper软件对内参基因表达的稳定性进行评价,进一步利用SnRK2基因对获得的内参基因的稳定性和可靠性进行验证。结果表明,2个软件筛选出的内参基因基本一致,8个候选内参基因在偏穗鹅观草不同胁迫处理下的表达丰度及稳定性存在差异,盐处理及干旱处理下Cyclophilin、GAPDH稳定性表现最好,高温处理下EF1a1、Cyclophilin稳定性最好。综合分析表明,Cyclophilin、GAPDH及EF1a1在偏穗鹅观草中表达丰度相对较高,并且在器官中表达较为稳定。通过对盐、高温及干旱处理组的稳定性评价,确定Cyclophilin为偏穗鹅观草最适内参基因。研究结果为后续探讨偏穗鹅观草抗逆性分子机制奠定了基础。