LPA对牦牛卵丘细胞扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3表达的影响

本研究以溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)在卵丘细胞扩张中的作用为切入点,旨在探讨不同浓度LPA对牦牛卵丘细胞(yak cumulus cells,YCCs)中卵丘扩张因子(透明质酸合成酶2(hyaluronate synthase 2,HAS2)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)和正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3))表达的影响。本研究以健康成年(3~4岁)雌牦牛的YCCs为研究对象,取对数生长期的YCCs,将不同浓度的LPA(空白对照、阴性对照、5、15、30和50μmol·L^(-1))作用于体外培养的YCCs,分别培养12、24、36、48 h后,CCK-8检测YCCs的细胞活性,采用RT-qPCR和Western-blot法检测YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3 mRNA和蛋白相对表达量,细胞免疫荧光染色法检测卵丘扩张因子HAS2、PTGS2和PTX3在YCCs中的分布。试验中每个处理组3个重复。结果显示,LPA孵育12、24、36和48 h,对YCCs的活性有着明显的促进作用。当孵育时间为24 h时,LPA对YCCs活性的促进作用最明显。相比较于对照组而言,当LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,不同孵育时间中YCCs的活性提升最为显著(P<0.05)。当LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,与空白对照组相比,HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量最高(P<0.05),且YCCs中HAS2、PTGS2和PTX3的荧光强度明显增强。当LPA浓度大于15μmol·L^(-1)时,HAS2、PTGS2和PTX3的mRNA和蛋白相对表达量逐渐下降。本研究表明,LPA对YCCs活性具有促进作用。当孵育时间为24 h,并且LPA浓度为15μmol·L^(-1)时,活性提升最为显著(P<0.05)。LPA可以增强YCCs中卵丘扩张因子HAS2、PTGS2、PTX3的表达,且其作用浓度具有剂量依赖性,最佳浓度为15μmol·L^(-1)。研究结果为阐明LPA促进牦牛卵丘细胞扩张的分子机制提供了理论依据,为进一步提高牦牛卵母细胞的质量和体外受精(in vitro fertilization,IVF)成功率提供理论基础。

奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。

DNA指纹图谱技术发展及其在十字花科蔬菜育种中的应用

十字花科蔬菜作物在我国蔬菜生产和市场供应上占有重要地位。DNA指纹图谱技术是研究植物种质资源遗传多样性、种子纯度等的有效方法,近年来该技术逐渐成熟,可以快速且准确地检测物种的真实性并对其进行鉴定和分类。本文综述了十字花科蔬菜DNA指纹图谱技术研究进展及其在品种鉴定、遗传多样性分析、杂种优势群等遗传育种中的应用,并对该技术在十字花科蔬菜育种应用中存在的问题进行分析讨论。

高产纤维素酶菌株选育及其产酶工艺的研究

为获取高产纤维素酶的菌株,本研究以潮湿纤维单胞菌(Cellulomonasuda)为研究对象,采用紫外诱变方式进行菌株突变,通过刚果红选择培养基筛选,以及测定纤维素酶活性后得到菌株W3,酶活高达37.6 U/mL,较初始菌株提升了49.4%。经传代十次后仍有较高酶活,结果说明该突变菌株遗传性状稳定且产纤维素酶能力强。对突变菌株进行单因素优化实验确定最优培养条件,后对关键因子通过正交实验确定最佳参数。最佳培养条件为:12.5 g/L蔗糖,2 g/L硝酸铵,2 g/L磷酸二氢钾,菌悬液接种量体积比3%,pH=6.0,发酵培养温度35℃。优化后酶活性达43.06 U/mL,极显著高于原始菌株(P=0.008 9<0.01),较最初菌株酶活性提高了78.7%。研究结果可为高效降解纤维素提供一定理论依据和应用价值。

牦牛早期胚胎核旁斑点形成及对后续发育的影响

【目的】明确牦牛早期胚胎发育过程中核旁斑点形成的关键时期,确定其参与形成长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNAs),探索核旁斑点形成对后续胚胎发育能力的影响及调控机制。【方法】体外受精生产牦牛胚胎,DAPI染色标记结合核旁斑点结构蛋白1(paraspeckle Protein 1,PSPC1)mRNA实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测确定牦牛早期胚胎发育核旁斑点形成关键时期,免疫荧光技术验证胚胎PSPC1蛋白表达水平;qRT-PCR检测核旁斑点形成相关LncRNAs核旁斑点组装转录因子1(encoding nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)、共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator associated arginine methyltransferase 1,CARM1)及54 kD核结合蛋白(non-POU domain containing octamer-binding protein,p54nrb)mRNA在各时期胚胎中表达水平;RNA干扰技术抑制合子PSPC1 mRNA水平,比较后续各阶段胚胎发育率,通过分析囊胚细胞总数、滋养层细胞数(trophoblast cells,TE)、内细胞团数(inner cell mass,ICM)评估囊胚质量;检测对照组和PSPC1 mRNA干扰组囊胚中B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B-celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)和B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(B-cell lymphoma/leukemia associatedx protein,Bax)表达水平。【结果】(1)在不同发育阶段胚胎细胞的细胞核均可观察到核旁斑点,但2-细胞和4-细胞时期胚胎细胞核中核旁斑点更为清晰,2-细胞至桑椹胚阶段PSPC1 mRNA呈现高水平表达,其中4-细胞到桑椹胚阶段PSPC1 mRNA水平最高,PSPC1蛋白荧光强度在此阶段最强。(2)NEAT1、CARM1及p54nrb mRNA均在2-细胞到桑椹胚阶段呈现高水平表达,其中NEAT1和p54nrb在4细胞时期水平最高,CARM1在2-细胞到桑椹胚3个阶段表达水平差异不显著(P>0.05)。(3)PSPC1 mRNA干扰组桑椹胚与囊胚发育率均显著降低,且桑椹胚发育率降低幅度高于囊胚,PSPC1 mRNA干扰组囊胚细胞总数显著低于对照组,其中以ICM细胞数降低为主,TE细胞数在两组之间差异不显著。(4)PSPC1 mRNA干扰处理组囊胚中促细胞凋亡因子Bax mRNA和蛋白均显著增加,抑凋亡相关因子Bcl-2 mRNA和蛋白降低,且囊胚中内细胞团发生裂解。【结论】牦牛早期胚胎发育核旁斑点形成的关键时期为2-细胞至桑椹胚阶段,其中主要集中在4-细胞时期,且PSPC1、NEAT1、CRAM1、p54nrb在核旁斑点形成时期呈高水平表达。干扰牦牛合子PSPC1 mRNA导致后续胚胎发育能力降低,并通过诱导ICM凋亡降低囊胚质量,影响囊胚中细胞命运决定。

抑制素A对牦牛颗粒细胞FSH、LH及其受体表达的影响

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外源性INHA(0、1.25、2.5、5、10、20 ng·mL^(-1))作用12 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测颗粒细胞中FSHβ、LHβ、FSHR、LHR基因的表达情况,采用酶联免疫分析试验(ELISA)检测细胞内外FSH、LH的含量。结果显示,FSHR和LHR在颗粒细胞质与细胞核中均有表达。FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达随INHA浓度的增大呈先降后升的趋势;INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,FSHβ表达最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,LHβ表达最低;FSHR和LHR基因的表达与INHA浓度呈负相关。INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外FSH含量最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外LH含量最低;其他INHA浓度下,当颗粒细胞内容物中FSH和LH含量降低时,细胞上清中含量升高。综上所述,INHA对FSHR和LHR基因在颗粒细胞中的表达存在明显的抑制作用,并且影响FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达。研究表明INHA可以抑制牦牛卵泡颗粒细胞中FSH、LH与其受体的结合;同时,INHA对颗粒细胞内外FSH和LH的含量具有重要调节作用。本研究为进一步探索抑制素对雌性牦牛生殖调控的影响提供了理论依据。

AI绘画创作的运行规律及应用

从AI绘画发展现状入手,分析了基于生成式对抗网络进行深度学习的AI绘画基本运行训练原理,探讨了AI绘画面临的问题和AI绘画对于艺术相关行业的影响。

牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备及在生殖器官表达检测中的应用

旨在克隆牦牛微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,LC3B)基因,制备牦牛LC3B多克隆抗体,为探究自噬在牦牛生殖生理过程中的作用奠定基础。本研究通过基因克隆方法获得牦牛LC 3B基因序列,利用原核表达、亲和层析法纯化牦牛LC3B重组蛋白,使用纯化的蛋白为抗原免疫10月龄日本大耳白兔,Sepharose4B柱层析法纯化制备牦牛LC3B多克隆抗体,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,并使用蛋白质免疫印迹(WB)、免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光技术(IF)检测牦牛生殖器官中LC3B蛋白的表达。结果显示,本研究成功克隆了牦牛LC 3B基因(登录号:OP572227),构建的重组质粒pET-32a-LC3B能够诱导产生重组蛋白,并且在包涵体和上清中均有表达;所纯化的牦牛LC3B重组蛋白大小为34 ku(含Trx和His标签),符合预期结果。通过免疫日本大耳兔后得到的兔抗牦牛LC3B蛋白血清,抗体效价分别为1∶640000和1∶320000,特异性良好,表明牦牛LC3B蛋白多克隆抗体制备成功。纯化后的抗体应用于牦牛生殖器官中LC3B的表达检测,LC3B在牦牛卵巢、输卵管和子宫中表达,并且能识别LC3B-Ⅰ和发生脂化后的LC3B-Ⅱ,主要表达于细胞质及细胞核周。本研究通过成功克隆牦牛LC 3B基因制备了牦牛LC3B多克隆抗体,使用抗体检测发现LC3B蛋白在牦牛生殖器官中均有表达,表明所制备的多克隆抗体特异性良好,能够应用于牦牛LC3B蛋白的检测和细胞自噬水平的研究。

镉胁迫下生化黄腐酸对玉米种子萌发及幼苗生长的影响

【目的】研究镉胁迫下黄腐酸对玉米种子萌发及幼苗生长的影响,为提高玉米对重金属镉污染的抗逆性及土壤重金属污染治理提供借鉴。【方法】采用培养皿及盆栽试验方法,以不施用黄腐酸为空白对照,研究不同浓度生化黄腐酸(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L和200 mg/L)对镉胁迫下(镉胁迫浓度10 mg/kg)玉米品种金海5号种子萌发和幼苗生长特性的影响。【结果】镉胁迫对玉米种子萌发产生明显抑制作用,在10 mg/kg镉胁迫下,玉米种子的发芽率、发芽势和发芽指数较未受镉胁迫处理分别降低20.79%、17.04%和11.45%,差异显著;施用黄腐酸可促进受镉胁迫玉米种子的萌发,黄腐酸浓度为100 mg/L时,受镉胁迫的玉米种子发芽率、发芽势和发芽指数分别为95.24%、86.24%和81.02,与未受镉胁迫处理相当。镉胁迫破坏玉米幼苗的抗氧化酶系统,引起玉米植株体内产生活性氧、抑制植物光合作用,导致玉米植株生长发育受到抑制;施用100 mg/L黄腐酸能够显著提高玉米幼苗叶片中脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD和CAT活性,显著降低MDA含量,缓解镉胁迫对玉米植株抗氧化酶系统的破坏作用,提高光合色素(叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素)含量,增强植物光合作用,维持玉米幼苗生长。【结论】施用适宜浓度黄腐酸明显缓解镉胁迫对玉米种子萌发影响,显著提高玉米幼苗抗逆性,缓解镉胁迫对玉米幼苗生长造成的伤害,镉胁迫浓度为10 mg/kg时,黄腐酸施用最适浓度为100 mg/L。

几种食用菌胞外降解酶的研究进展

近年来,我国食用菌产业发展迅速,已成为继粮、油、蔬、果后的第五大种植业,食用菌胞外降解酶可分解基质中的纤维素、半纤维素、木质素、多糖和蛋白质等高分子物质,具有对其生长发育提供营养的重要作用,其酶活力的高低直接决定食用菌对培养基料中营养物质的降解速率,影响食用菌对营养的吸收与利用速率,进一步影响其产质量;而胞外降解酶的合成分泌主要受基因控制,也受外界环境等因素影响。为我国食用菌胞外降解酶的研究与应用提供参考,对食用菌的纤维素酶、半纤维素酶、木质素降解酶和淀粉酶4种主要胞外酶的研究概况、活性测定方法和应用等方面进行了概述,并从产酶条件、酶学性质和编码基因等方面对今后的研究方向进行展望。

单宁对断奶羔羊生长性能、血清抗氧化指标和瘤胃发酵的影响

目的本试验旨在探究饲粮中添加单宁对断奶羔羊生长性能、血清抗氧化指标和瘤胃发酵的影响。方法采用单因子试验设计,选取3月龄、体重相近断奶湖羊公羔30只,随机分成3组,每组10个重复,每个重复1只。对照组饲喂基础饲粮,试验1组和试验2组分别在基础饲粮中添加0.15%和0.3%的单宁。预试期7 d,正试期45 d,整个试验周期为52 d。结果单宁对断奶羔羊的生长性能没有显著影响;0.15%单宁组和0.3%单宁组总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量显著高于对照组(P<0.05);对照组和0.3%单宁组的丙二醛(MDA)含量显著高于0.15%单宁组(P<0.05);0.15%单宁组总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,0.15%单宁组和0.3%单宁组氨态氮(NH 3-N)浓度降低(P<0.05);菌体蛋白(MCP)浓度提高(P<0.05);各组间挥发性脂肪酸(VFA)浓度无显著影响。结论日粮中添加0.15%和0.3%的单宁显著提高了断奶羔羊血清抗氧化能力,显著降低了血清中MDA含量,显著降低了瘤胃发酵参数中的NH 3-N浓度,显著提高了瘤胃发酵参数中MCP浓度,对生长性能和VFA浓度没有显著的影响。

国家高新区创新驱动战略、科技投入与高质量创新

创新驱动战略是实现国家高新区高质量创新的重要支撑,已成为国家高新区创新转型发展的关键依托,但其对高质量创新究竟起到何种影响仍需要进行深入研究。采用准自然实验法,实证检验了创新驱动战略对高质量创新的影响,并进一步分析了科技资金与人才要素在这一过程中的作用。研究表明:创新驱动战略显著促进了国家高新区的高质量创新,并通过集聚科技资金与人才要素显著强化了这一效应;进一步研究发现,创新驱动战略对高新区高质量创新的影响存在明显的成长周期异质性与发展定位异质性,即“非成熟型”与“非世界一流”高新区创新驱动战略对高质量创新的影响效应更加显著。

不同水氮供应对温室番茄各穗层果实养分和产量构成的影响

【目的】探明不同水氮供应对温室番茄各穗层果实养分和产量构成的影响。【方法】设计4个施氮水平(0、150、300、450 kg/hm^(2),分别记为N0、N1、N2、N3)和3个基于20 cm标准蒸发皿累积蒸发量(E_(pan))的灌溉水平(50%E_(pan)、70%E_(pan)、90%E_(pan),分别记为I1、I2、I3),研究不同水氮供应对温室番茄各穗层果实含水率(FW)、全氮量(FTN)、全钾量(FTK)和产量构成的影响。【结果】番茄不同穗层的果实养分和产量构成要素存在显著差异,其中第1穗层不协调的氮、钾比例不利于产量构成要素的提高,第2穗层氮、钾的协同作用促使该穗层坐果数和平均单果质量最大。增加灌水量显著提高了各穗层FW、坐果数和平均单果质量,但灌水量超过70%E_(pan)时,各穗层坐果数增幅较小。增施氮肥显著降低了各穗层FW,促进了各穗层果实对氮、钾的吸收,提高了坐果数和产量;当施氮量超过150 kg/hm^(2)时,各穗层坐果数和产量增幅较小。与N0处理相比,N1、N2、N3处理各穗层的平均坐果数分别提高了13.94%、10.38%、10.68%,产量分别提高了13.63%、10.66%、8.42%。【结论】本研究区域最优的水氮管理模式为:施氮量150kg/hm^(2)+灌水定额70%E_(pan)。

血清MIF、G-CSF水平对早产儿支气管肺发育不良的诊断价值

目的探讨血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)水平对早产儿支气管肺发育不良(BPD)的诊断价值。方法选择早产儿126例,其中发生BPD 35例(BPD组)、未发生BPD 91例(非BPD组)。采集两组外周静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清MIF、G-CSF。比较两组胎龄、出生体质量、性别、胎儿宫内生长受限、新生儿窒息、呼吸窘迫、机械通气、氧疗时间、使用肺表面活性剂以及其母亲年龄、分娩方式、孕期吸烟、胎膜早破、宫内感染、妊娠合并症等临床资料,将有统计学差异的指标纳入多因素Logistic回归模型,分析早产儿BPD的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MIF、G-CSF水平对早产儿BPD的诊断价值。结果BPD组血清MIF、G-CSF水平均显著高于非BPD组(P均<0.05)。单因素分析显示,两组胎龄、出生体质量、胎儿宫内生长受限、新生儿窒息、呼吸窘迫、机械通气、氧疗时间、使用肺表面活性剂以及母亲孕期吸烟比例比较差异均有统计学意义(P均<0.05),而性别、分娩方式、母亲年龄及妊娠期合并高血压、糖尿病和胎膜早破、宫内感染比例比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,氧疗时间长及血清MIF、G-CSF水平升高是早产儿BPD的独立危险因素,而胎龄大则为其独立保护因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清MIF、G-CSF水平单独和联合诊断早产儿BPD的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.684、0.930,血清MIF、G-CSF水平联合诊断早产儿BPD的AUC显著高于血清MIF、G-CSF水平单独(P均<0.05)。结论血清MIF、G-CSF水平与早产儿BPD密切相关;血清MIF、G-CSF水平对早产儿BPD均有一定诊断价值,二者联合诊断价值更高。

施工用轻型四边形工具式钢支架承载力系统研究

由施工用轻型四边形工具式钢支架理论计算分析、有限元计算分析和试验研究三部分组成,对施工用轻型四边形工具式钢支架承载力进行系统研究,施工用轻型四边形工具式钢支架在实现自身轻巧的同时,进一步实现高周转,采用高效、高性能拼装节点,使连接及拆卸均简便快捷。基于理论推导、有限元分析、试验测试等方法开展施工用轻型四边形工具式钢支架的各项性能研究,以保证最终结构安全。

t-PAIC单克隆抗体制备及磁微粒化学发光免疫检测

以组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物(t-PAIC)为免疫原制备和筛选了一对特异性单克隆抗体,并建立了一种检测人体血浆t-PAIC的磁微粒化学发光免疫检测方法。通过与参比方法比对,选定了反应速度更快的一步法作为反应模式,然后对t-PAIC检测方法的检测性能进行了评估。结果显示:该方法的空白限为0.43 ng/mL,检出限为0.91 ng/mL;线性范围为0.91~100ng/mL;重复性CV小于4%,精密度CV小于3%;样本回收率在100%~110%之间;常见干扰物对检测结果无明显影响。构建了t-PAIC检测方法的参考区间,健康成年男性参考范围为1.85~15.91 ng/mL,健康成年女性参考范围为1.90~9.43 ng/mL。t-PAIC检测方法反应快速,在血栓疾病诊断中有重要的应用价值。

基于不同数理统计方法的河南省ET_0气候影响因素分析

确定影响ET_0年际变化的主要气象因子是准确估算未来作物需水的基础,对于农业生产科学应对气候变化具有重要意义。以河南省17个站点为例,分别采用国内外常用的5种数理统计方法评价7个气象要素对参考作物蒸散量(reference crop evapotranspiration,ET_0)年际变化的影响程度,结果发现:日照和风速是影响河南省地区参考作物蒸散量的主要因子,黄河以北地区主要为风速,黄河以南地区以日照为主,信阳、西峡两地高温作用不容忽视。5种方法评判结果差异较大,采用灰色关联分析法,利用不同的数据变换方式,其结果大相径庭,认为其不适宜用于评价影响ET_0变化主要因子的判定;结合各站气象要素年际变化趋势分析认为,逐步回归分析法得出的结论与各站点气象要素及ET_0实际变化趋势存在多处悖理,不适宜用于评价影响ET_0变化主要因子的判定;相关分析、偏相关分析、主导分析方法结果较为统一,差异较小,认为采用3种方法综合判定某地区影响ET_0的主要因子,其结果较为可信。其中,采用主导分析法对各气象因子的影响排序与各因子对ET_0的影响趋势以及ET_0实际变化趋势较为一致,建议用于评价影响ET_0变化的气象因子排序,但因其无法得到各因子与ET_0的相关关系,需借助相关分析与偏相关分析才能得到详实可信的结果。

IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡

【目的】探索动物机体遭受低温应激及细胞冷冻过程中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor,IGF-1)与RNA结合基序蛋白3(RNA-binding motif protein 3,RBM3)之间的作用关系,及IGF-1参与哺乳动物细胞抑制低温损伤的机制。【方法】体外培养牦牛卵丘细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot,WB)和免疫荧光技术检测不同浓度(0、50、100、200 ng·mL^-1)IGF-1和低温应激(30℃、25℃)对RBM3表达影响。卵丘细胞经最佳浓度IGF-1(100 ng·mL^-1)和对照组(0 IGF-1)作用30 h后,低温(30℃、25℃)应激8 h,比较RBM3表达水平。评估在低温应激组、100 ng·mL^-1IGF-1处理组和100 ng·mL^-1IGF-1+RBM3抑制剂处理组,卵丘细胞25℃应激8 h后凋亡水平差异,并从基因和蛋白水平检测3组卵丘细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。【结果】(1)IGF-1作用卵丘细胞后RBM3基因和蛋白的表达水平显著上升(P<0.05),其在100 ng·mL^-1IGF-1处理组最高,免疫荧光检测显示100和200 ng·mL^-1IGF-1处理组卵丘细胞胞核和细胞质均可检测到RBM3,而0和50 ng·mL^-1处理组,RBM3仅定位在细胞质。(2)卵丘细胞经受低温应激时,RBM3的表达水平显著增加,但其在30℃和25℃应激处理组差异不显著;100 ng·mL^-1IGF-1作用卵丘细胞30 h后,其再次接受25℃、8 h低温应激,卵丘细胞中RBM3的表达水平显著高于低温应激前未经IGF-1处理卵丘细胞中RBM3的表达水平,且该处理组卵丘细胞胞质和胞核均可检测到RBM3。(3)25℃应激后,100 ng·mL^-1IGF-1处理组卵丘细胞的凋亡率为(15.94±2.03)%,显著低于其在未经IGF-1处理组和100 ng·mL^-1IGF-1+RBM3抑制剂处理组中卵丘细胞的凋亡率,两者分别为(25.86±1.09)%和(20.14±2.65)%,在100 ng·mL^-1IGF-1处理组Bcl-2的表达水平显著高于其余两个处理组(P<0.05),而Bax的表达水平显著低于其余两个处理组(P<0.05)。【结论】RBM3参与牦牛卵丘细胞低温应激调控,IGF-1可调控其在低温应激中的表达水平,从而降低低温诱导的卵丘细胞凋亡。本研究为揭示IGF-1和RBM3参与动物机体或细胞免受低温损伤的分子机制提供了关键信息,为体细胞和生殖细胞冷冻技术的提高提供了理论依据。

“十三五”我国萝卜遗传育种研究进展

“十三五”期间,我国萝卜新品种培育工作取得了快速发展,收集、鉴定并创制了一批优异资源,选育了一批新优品种;萝卜育种应用基础研究取得一定进步,定位了一批控制重要性状的QTL或基因,并建立或优化了重要育种技术体系。本文从萝卜种质资源挖掘鉴定及创新、品种选育与改良、育种技术研究等方面进行了回顾,并对萝卜“十四五”育种研究进行了展望。

牦牛p38MAPK在雌性主要生殖器官中的表达

旨在研究p38MAPK在母牦牛主要生殖器官中的表达情况,了解其表达差异性,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。本研究采集卵泡期、黄体期、妊娠期成年健康母牦牛(各2头)主要生殖器官样品,免疫组化技术检测p38MAPK蛋白的表达部位;qRT-PCR和Western-blot技术对其基因和蛋白进行相对表达量测定。结果:1)免疫组化结果显示,p38MAPK蛋白在牦牛的卵巢、输卵管和子宫均呈阳性表达;2)qRT-PCR结果表明,p38MAPK基因在卵巢中的表达量卵泡期显著高于妊娠期(P<0.05);在输卵管中的表达量黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.05);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P<0.01);3)Western-blot结果显示,p38MAPK蛋白在卵巢中的表达量卵泡期极显著高于黄体期和妊娠期(P<0.01);在输卵管中的表达量黄体期极显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.01);在子宫中的表达量妊娠期极显著高于卵泡期和黄体期(P<0.01)。结果表明,p38MAPK在母牦牛同一生殖器官的不同繁殖阶段其表达存在差异性,其可能参与了牦牛卵泡发育、黄体功能发挥以及胚胎着床和发育等一系列生殖过程,为牦牛的繁殖性能研究提供相关基础资料。