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多子小瓜虫PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 曹泽艺 周庆杰 +4 位作者 陈凯 习丙文 谢骏 潘良坤 毛颖 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期161-168,共8页
为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性... 为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法。其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μL,荧光定量PCR在掠食体0.02个/μL时依然能有效检出,荧光定量PCR检测灵敏度高于普通PCR。研究表明,在临床样本和养殖水环境样本检测应用中,基于该引物的两种PCR方法表现出很高的一致性,能有效检出潜伏感染鱼体和养殖水环境中的多子小瓜虫。本研究所建立的多子小瓜虫的检测方法特异性强、灵敏度高,适用于淡水养殖中小瓜虫病的早期诊断和病原体的检测。 展开更多
关键词 多子小瓜虫 PCR 荧光定量PCR 小瓜虫病 检测方法
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淡水鱼小瓜虫、黏孢子虫病流行规律及防控措施(下)
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作者 习丙文 《科学养鱼》 2023年第12期11-12,共2页
四、黏孢子虫的基础生物学特征黏孢子虫大多数寄生在海淡水鱼的组织器官内,其在进化上与后生动物中的刺丝胞动物水螅、水母等有较近的亲缘关系。国内外报道的黏孢子虫种类约2000多种,其中我国报道鱼的寄生黏孢子虫约600多种。黏孢子虫... 四、黏孢子虫的基础生物学特征黏孢子虫大多数寄生在海淡水鱼的组织器官内,其在进化上与后生动物中的刺丝胞动物水螅、水母等有较近的亲缘关系。国内外报道的黏孢子虫种类约2000多种,其中我国报道鱼的寄生黏孢子虫约600多种。黏孢子虫可以广泛寄生在鱼的体表、鳍、鳃、肌肉、脑及内脏器官或神经系统等组织器官。 展开更多
关键词 后生动物 神经系统 淡水鱼 水螅 组织器官 小瓜虫 防控措施 亲缘关系
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淡水鱼小瓜虫、黏孢子虫病流行规律及防控措施(上)
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作者 习丙文 《科学养鱼》 2023年第11期13-14,共2页
一、多子小瓜虫的基础生物学特征多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)隶属于原生动物纤毛门、寡膜纲、膜口目、凹口科和小瓜虫属(Ichthyophthirius),可感染世界范围内几乎所有淡水硬骨鱼。严重感染时鱼体皮肤、鳃覆盖一层小白点,... 一、多子小瓜虫的基础生物学特征多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)隶属于原生动物纤毛门、寡膜纲、膜口目、凹口科和小瓜虫属(Ichthyophthirius),可感染世界范围内几乎所有淡水硬骨鱼。严重感染时鱼体皮肤、鳃覆盖一层小白点,故称“白点病”。病鱼呼吸、渗透压调节等功能受到严重影响;同时,由成虫钻出鱼体所产生的伤口会进一步诱发细菌性继发感染。 展开更多
关键词 多子小瓜虫 继发感染 白点病 流行规律 淡水鱼 渗透压调节 防控措施 生物学特征
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2株乳酸菌抑菌作用研究及安全性评价 被引量:13
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作者 陈凯 朱璐丹 +4 位作者 谭宏亮 黄东宇 习丙文 潘良坤 谢骏 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期118-125,共8页
该研究利用无菌操作技术对2株乳酸菌[乳酸菌S60(干酪乳杆菌Lactobacillus casei)和S72(植物乳杆菌Lactobacillus plantarum)]开展了常规生化检测、药敏实验、体外抑菌实验和动物实验,验证了其作为渔用益生菌的可行性和安全性。结果显示,... 该研究利用无菌操作技术对2株乳酸菌[乳酸菌S60(干酪乳杆菌Lactobacillus casei)和S72(植物乳杆菌Lactobacillus plantarum)]开展了常规生化检测、药敏实验、体外抑菌实验和动物实验,验证了其作为渔用益生菌的可行性和安全性。结果显示,2株乳酸菌均能在pH为4.5和0.1%的胆盐环境中存活,对水产动物常见病原菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等均有一定的抑制作用,且抑菌物质分析结果显示,其有效抑菌物质与其代谢过程中产生的有机酸类相关。安全性评价实验结果显示2株乳酸菌无分解明胶和溶血的能力。死亡统计和血液生化指标结果显示,高达1.0×10^9 CFU·mL^-1的活菌腹腔注射攻毒并未引起实验鱼类[异育银鲫(Carassius auratus)]的严重死亡和机体损伤。可见2株乳酸菌作为口服益生菌具有较高的安全性。此外,耐药特性研究表明,2株乳酸菌对所用药物中的氨基糖苷类和磺胺甲唑耐受能力强,对氨苄青霉素、恩诺沙星、氟苯尼考和多西环素敏感。因此,2株乳酸菌的应用需要注意管理过程中药物的选择。 展开更多
关键词 乳酸菌 益生特性 安全性 药敏实验
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团头鲂糖皮质激素受体基因组织表达分布及其在应激中的表达变化 被引量:2
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作者 陈凯 习丙文 +3 位作者 滕涛 秦婷 潘良坤 谢骏 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期719-730,共12页
为了解团头鲂糖皮质激素受体(GR)在应激反应中的调控机制,本研究以皮质醇注射模拟应激事件,采集组织样品,常规检测血糖、血清皮质醇水平;利用荧光定量PCR检测了gr在不同组织中的表达丰度及其参与调控的功能基因的表达变化;并通过常规石... 为了解团头鲂糖皮质激素受体(GR)在应激反应中的调控机制,本研究以皮质醇注射模拟应激事件,采集组织样品,常规检测血糖、血清皮质醇水平;利用荧光定量PCR检测了gr在不同组织中的表达丰度及其参与调控的功能基因的表达变化;并通过常规石蜡切片开展了组织病理学研究。结果显示,gr1在脾脏、鳃、头肾等组织中有较高的表达量,gr2则在肝、垂体、肠等组织中具有较高的表达丰度。应激恢复过程中,下丘脑gr1表达量存在波动,gr2在0 h表达显著上调,gr1/gr2值逐渐增大;垂体中gr1和gr2均呈现先升后降的趋势,gr1/gr2值在2 h达到峰值水平;头肾中gr1表达量有波动,而gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点的表达量,gr1/gr2值逐渐减小;肝脏中gr1的表达量在0 h和2 h的表达量显著高于其他检测点,gr2表达有上下波动的现象,gr1/gr2值有减小的趋势,而pepck表达则出现了显著上调,在2 h达到峰值;皮肤中gr1先升高后降低,gr2在0 h和2 h的表达量显著低于其他检测点,gr1/gr2值在2~8 h维持在较大值,而occ表达呈现先增加后降低的变化趋势;鳃中gr1与gr2均在2 h时发生了显著上调,gr1/gr2值在2~8 h维持在较大值,occ表达峰值出现在2 h。组织学研究显示鳃丝有增生现象,肾间组织中类淋巴细胞增多,其他所检视组织无明显病理改变。应激反应过程中gr在不同组织不同亚型间存在不同的表达变化,以及和不同组织器官中相关功能基因的相关性显示了GR在相关调控中的复杂性,而组织学研究结果则表明了应激反应存在诱发病理变化的风险。 展开更多
关键词 团头鲂 糖皮质激素受体 应激 皮质醇 闭合蛋白
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饲料中脂肪水平对团头鲂幼鱼生长性能、血清生化指标及黏蛋白基因表达的影响 被引量:3
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作者 习丙文 陆春云 +2 位作者 任鸣春 米海峰 谢骏 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期3559-3566,共8页
本试验旨在研究饲料中不同脂肪水平对团头鲂幼鱼生长性能、血清生化指标及黏蛋白基因表达的影响。试验选取540尾初始体重为(10.0±0.5)g的团头鲂幼鱼,随机分为6组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别投喂脂肪水平为2.29%、4.29%、6.29... 本试验旨在研究饲料中不同脂肪水平对团头鲂幼鱼生长性能、血清生化指标及黏蛋白基因表达的影响。试验选取540尾初始体重为(10.0±0.5)g的团头鲂幼鱼,随机分为6组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别投喂脂肪水平为2.29%、4.29%、6.29%、8.29%、10.29%和12.29%的等氮等能试验饲料。饲养8周后检测鱼体生长指标、血清生化指标和表皮、肠道中黏蛋白基因的表达。结果表明:1)6.29%和8.29%组的增重率(WGR)显著高于其他组(P<0.05),饲料系数(FCR)显著低于其他组(P<0.05)。2)12.29%组血清皮质醇含量及谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性最高,显著高于2.29%、4.29%、6.29%和8.29%组(P<0.05),但与10.29%组没有显著差异(P>0.05)。3)8.29%组鱼体肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著高于2.29%组(P<0.05);而谷胱甘肽还原酶(GR)活性在6.29%组最高,除8.29%组外,显著高于其他各组(P<0.05);丙二醛(MDA)含量在6.29%组最低,显著低于2.29%和12.29%组(P<0.05)。4)12.9%组肠道黏蛋白2(Muc2)基因表达量显著高于其他各组(P<0.05),8.29%组表皮黏蛋白5b(Muc5b)基因表达量与12.29%组没有显著性差异(P>0.05),但显著高于其他各组(P<0.05)。5)病原菌感染试验表明,2.29%和12.29%组死亡率较高,6.29%和8.29%组死亡率较低,且显著低于其他各组(P<0.05)。综上,在本试验条件下,饲料脂肪水平在6.29%~8.29%时,团头鲂幼鱼生长性能、抗病力和表皮黏蛋白Muc5b基因表达量最高。 展开更多
关键词 团头鲂 脂肪 黏蛋白 Muc5b
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白藜芦醇对脂多糖诱导草鱼肾脏细胞炎症的抑制作用 被引量:1
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作者 陈凯 谭宏亮 +2 位作者 习丙文 谢骏 潘良坤 《中国渔业质量与标准》 2021年第1期18-26,共9页
为评价白藜芦醇(resveratrol)对脂多糖诱导损伤草鱼(Ctenopharyngodon idella)肾脏细胞(CIK)的保护作用,本研究通过脂多糖(LPS)诱导细胞炎症损伤,测定和分析白藜芦醇对CIK细胞抗氧化因子活性和抗氧化、炎症相关基因表达变化的影响。结... 为评价白藜芦醇(resveratrol)对脂多糖诱导损伤草鱼(Ctenopharyngodon idella)肾脏细胞(CIK)的保护作用,本研究通过脂多糖(LPS)诱导细胞炎症损伤,测定和分析白藜芦醇对CIK细胞抗氧化因子活性和抗氧化、炎症相关基因表达变化的影响。结果表明,与对照组相比,LPS处理导致CIK细胞活力降低(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活性升高(P<0.05),降低了细胞内过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并导致还原型谷胱甘肽(GSH)浓度降低(P<0.05)和丙二醛(MDA)含量升高(P<0.05)。此外,LPS处理能引起CIK细胞的CAT、TNF-α、IFN-γ、IL-1基因表达显著上调(P<0.05),而对IL-10和SOD基因的转录表达无显著影响(P>0.05)。通过向培养基中添加白藜芦醇(4μg/mL)可以显著减弱LPS对CIK细胞造成的损伤,维系细胞抗氧化能力,抑制TNF-α等炎症相关基因的表达(P<0.05),促进CAT基因的表达(P<0.05)。研究认为白藜芦醇对LPS造成的CIK细胞损伤有明显的干预作用,主要原因可能是由于白藜芦醇对CIK细胞的抗氧化能力的改善以及对促炎因子表达的抑制。本研究可为白藜芦醇应用于鱼类炎症、氧化损伤相关疾病的防治提供理论依据。 展开更多
关键词 白藜芦醇 脂多糖 CIK细胞 氧化损伤 炎症
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淡水鱼小瓜虫病防控方案 被引量:1
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作者 习丙文 《科学养鱼》 2021年第3期55-55,共1页
小瓜虫病是淡水养殖常见的寄生虫病,尤其以水质清瘦、养殖密度高的环境下发生最为严重,广泛危害淡水养殖品种的苗种和成鱼。目前,小瓜虫病的病原种类被认为只有1种,即多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis Fouquet,1876);不同地区... 小瓜虫病是淡水养殖常见的寄生虫病,尤其以水质清瘦、养殖密度高的环境下发生最为严重,广泛危害淡水养殖品种的苗种和成鱼。目前,小瓜虫病的病原种类被认为只有1种,即多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis Fouquet,1876);不同地区和养殖品种感染的虫株间可能存在一定的血清和遗传多样性。 展开更多
关键词 小瓜虫病 多子小瓜虫 淡水养殖 养殖密度 病原种类 防控方案 养殖品种 成鱼
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秦皮素的抑菌作用及其对嗜水气单胞菌毒力的影响 被引量:9
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作者 朱璐丹 陈凯 +1 位作者 习丙文 谢骏 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期984-992,共9页
为探讨中草药单体秦皮素对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)生长和毒力的影响,实验测定了秦皮素对嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)、生长曲线、生物膜以及脂肪酶活性、运动性、蛋白酶活性和溶血性等毒力相关因子的影响。结果表明,秦... 为探讨中草药单体秦皮素对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)生长和毒力的影响,实验测定了秦皮素对嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)、生长曲线、生物膜以及脂肪酶活性、运动性、蛋白酶活性和溶血性等毒力相关因子的影响。结果表明,秦皮素对嗜水气单胞菌具有明显的抑制效果,MIC为128μg/mL;秦皮素浓度大于16μg/mL时,对嗜水气单胞菌的生物膜形成有显著促进作用(P<0.05);秦皮素浓度大于8μg/mL时,对嗜水气单胞菌的脂肪酶活性有显著降低作用(P<0.05);秦皮素浓度为2~8μg/mL时,对嗜水气单胞菌的运动性和溶血性无显著影响(P>0.05),但能降低嗜水气单胞菌蛋白酶活性(P<0.05)。秦皮素对嗜水气单胞菌有一定的抑菌作用,但期望通过低浓度秦皮素实现对嗜水气单胞菌的防治仍有待进一步研究。 展开更多
关键词 秦皮素 嗜水气单胞菌 抑菌作用 毒力
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团头鲂黑素皮质素3型受体基因克隆及表达分析 被引量:1
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作者 廖盛臣 陈凯 +3 位作者 习丙文 秦婷 潘良坤 谢骏 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期445-456,共12页
黑素皮质素3型受体(MC3R)系统与动物摄食行为以及能量调控密切相关。为丰富鱼类MC3R相关基础研究,探索鱼类摄食行为与能量调控机制,本研究克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)mc3r基因,采用分子生物信息学和相对荧光定量PCR方法分... 黑素皮质素3型受体(MC3R)系统与动物摄食行为以及能量调控密切相关。为丰富鱼类MC3R相关基础研究,探索鱼类摄食行为与能量调控机制,本研究克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)mc3r基因,采用分子生物信息学和相对荧光定量PCR方法分别对氨基酸序列保守结构域、组织表达分布和禁食条件下的表达变化等开展分析研究。结果显示,团头鲂mc3r基因编码区全长984 bp,编码327个氨基酸,与现有报道的MC3R氨基酸序列高度相似,具有典型的7次跨膜结构域。组织表达图谱分析表明,mc3rmRNA在下丘脑、垂体、肝脏和卵巢有相对较高的表达。禁食试验结果显示,下丘脑和垂体中的转录变化与周期性摄食信号相关,其中下丘脑mc3r mRNA在禁食72 h和14 d的表达显著上调(P<0.05),垂体mc3r mRNA在禁食72 h和禁食72 h后恢复投喂6 h表达量显著升高(P<0.05),而肝脏中mc3r mRNA在禁食48 h和14 d的表达量显著上调(P<0.05)。此外,对血液皮质醇和血糖的监测结果显示,两者均在禁食14 d有显著变化,其中皮质醇水平显著高于对照组(P<0.05),而血糖水平显著低于对照组(P<0.05)。综合本研究结果表明,MC3R在鲤科鱼类中具有高度相似的氨基酸序列和结构域;在组织中的转录表达变化与食物摄取有明显相关性,对调控鱼体摄食行为和能量代谢具有重要作用。 展开更多
关键词 团头鲂 黑素皮质素 3 型受体 基因克隆 组织分布 禁食
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团头鲂与鲫鱼养殖常见疾病及其防治方法(下)
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作者 习丙文 毛颍 马迪 《科学养鱼》 2022年第6期26-27,共2页
(2)治疗:该病发生后可选用以下方法进行控制。①全池泼洒硫酸铜和硫酸亚铁粉,每立方米水体分别为0.5克和0.2克。②饲料拌喂苦参末、雷丸槟榔散等中药,用量参照产品说明书。(3)注意事项:硫酸铜有杀藻作用,使用后注意增氧和肥水培藻。硫... (2)治疗:该病发生后可选用以下方法进行控制。①全池泼洒硫酸铜和硫酸亚铁粉,每立方米水体分别为0.5克和0.2克。②饲料拌喂苦参末、雷丸槟榔散等中药,用量参照产品说明书。(3)注意事项:硫酸铜有杀藻作用,使用后注意增氧和肥水培藻。硫酸铜不能与生石灰同时使用。 展开更多
关键词 防治方法 增氧 团头鲂 槟榔散 硫酸铜 产品说明书 硫酸亚铁 生石灰
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Isolation and characterization of AHL-degrading bacteria from fish and pond sediment 被引量:2
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作者 LI Miaoyu xi bingwen +2 位作者 QIN Ting CHEN Kai xiE Jun 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期1460-1467,共8页
Quorum sensing (QS) disruption is considered as a potential alternative strategy to combat bacterial diseases in aquaculture. In this study, we isolated and identified bacteria degrading QS molecules from pond sedimen... Quorum sensing (QS) disruption is considered as a potential alternative strategy to combat bacterial diseases in aquaculture. In this study, we isolated and identified bacteria degrading QS molecules from pond sediment and fish intestine. A total of 132 strains were obtained in the enrichment culture, of which two strains were identified as Enterobacter sp. f003 and Staphylococcus sp. sw120, being isolated from the fish intestine and pond sediment, respectively. We found that strains f003 and sw120 could degrade acyl-homoserine lactones (AHLs) and cause no hemolysis of sheep red blood cells. The AHL lactonase (aiiA) homologous gene in the two strains was detected in PCR amplification and the high-degrading activity to N-hexanoyl-L-homoserine lactone (C6-HSL) and AHLs secreted from pathogenic Aeromonas hydrophila was assessed. Meanwhile, the artificial infection of cyprinid Carassius auratus gibelio with intraperitoneal injection showed that the two strains were avirulent. Therefore, the obtained indigenous bacteria are candidate probiotics against pathogenic A. hydrophila in aquaculture. 展开更多
关键词 QUORUM sensing (QS) AEROMONAS HYDROPHILA probiotic ENTEROBACTER STAPHYLOCOCCUS
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