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转基因棉花再生植株育性影响因素研究
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作者 罗晓丽 肖娟丽 +3 位作者 王志安 刘圆 张安红 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期230-238,共9页
【目的】探究影响农杆菌介导棉花体细胞转化体系产生的再生植株育性的影响因素。【方法】从载体大小、目的基因大小、不同阶段组织培养时间等因素对6个载体的转基因再生植株当代(T0)育性影响进行分析。【结果】不同载体/目的基因的转基... 【目的】探究影响农杆菌介导棉花体细胞转化体系产生的再生植株育性的影响因素。【方法】从载体大小、目的基因大小、不同阶段组织培养时间等因素对6个载体的转基因再生植株当代(T0)育性影响进行分析。【结果】不同载体/目的基因的转基因植株不育率呈现显著差异,但是转基因植株育性与载体大小、目的基因大小之间没有明显关系。进一步研究发现转基因再生植株不育率与胚性愈伤组织分化-植株再生的培养时间呈显著正相关,分化-植株再生培养时间少于110 d、110~130 d、130~150 d、150~170 d、超过170 d的植株不育率分别为19.6%、45.5%、63.8%、72.3%、94.5%;而与诱导愈伤组织形成-胚性愈伤组织分化的持续培养时间没有相关性。【结论】转基因棉花再生植株育性受到胚性愈伤组织持续培养时间的显著影响,缩短胚性愈伤组织到植株再生的培养时间能够提高转基因再生植株的育性。 展开更多
关键词 棉花 转基因再生植株 胚性愈伤组织 分化 植株再生 培养时间 不育率
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转基因抗虫棉研究进展 被引量:2
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作者 张安红 肖娟丽 +3 位作者 赵战胜 王志安 刘圆 罗晓丽 《生物技术进展》 2023年第5期657-662,共6页
棉花是我国重要的经济作物,虫害对棉花生产造成巨大损失,而转基因技术培育抗虫棉为害虫防治提供了一个行之有效的方法。从转苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因棉花、RNAi转基因抗虫棉花、基因编辑创制抗虫棉花、转次生代谢物基因与棉花抗... 棉花是我国重要的经济作物,虫害对棉花生产造成巨大损失,而转基因技术培育抗虫棉为害虫防治提供了一个行之有效的方法。从转苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因棉花、RNAi转基因抗虫棉花、基因编辑创制抗虫棉花、转次生代谢物基因与棉花抗虫性的相关研究等方面对近年来转基因抗虫棉的研究进展进行了综述,以期为进一步研究转基因抗虫棉提供方向和参考。 展开更多
关键词 抗虫棉 转基因 棉花
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棉蚜腺苷三磷酸酶E亚基基因RNAi载体的构建及其抗蚜性分析 被引量:8
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作者 罗晓丽 张安红 +3 位作者 肖娟丽 王志安 陈晓英 吴家和 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期353-362,共10页
【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害虫之一,严重危害棉花的生产。利用靶标昆虫重要基因的双链RNA进行干涉从而防治农业害虫是当今发展的1种新技术。通过转基因的方法,在棉花中表达棉蚜靶标基因的双链RNA(Double stranded RNA,dsR... 【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害虫之一,严重危害棉花的生产。利用靶标昆虫重要基因的双链RNA进行干涉从而防治农业害虫是当今发展的1种新技术。通过转基因的方法,在棉花中表达棉蚜靶标基因的双链RNA(Double stranded RNA,dsRNA),特异性地抑制棉蚜内源基因的表达,从而控制蚜虫对棉花的危害。【方法】本研究利用棉蚜腺苷三磷酸酶E亚基(Adenosine triphosphatase subunit E,ATPase E)基因,构建其RNA干扰载体,并通过农杆菌介导转化棉花。PCR技术初步筛查45个独立转化植株,对PCR阳性植株进行DNA印迹(Southern blot)分析,确认外源基因插入的拷贝数。同时利用RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction)方法检测dsRNA的表达情况。最后结合网棚和大田抗蚜性鉴定分析转基因株系的抗蚜效果。【结果】从45个转基因再生植株中获得22株阳性转基因株,其中12株为单拷贝插入。根据农艺性状和dsRNA表达量分析结果,筛选出4个转基因株系,分别为CZ1、CZ2、CZ3和CZ4。2年的网棚和大田的蚜虫抗性鉴定结果表明:转基因棉花CZ1、CZ2和CZ3具有较高的抗蚜性,2015年和2016年的蚜害减退率分别达70%和60%以上。【结论】利用RNAi技术将蚜虫腺苷三磷酸酶E亚基基因片段转化棉花,可以提高棉花的抗蚜性,为棉花抗蚜育种提供了新种质和新方法。 展开更多
关键词 棉花 棉蚜 腺苷三磷酸酶E亚基基因 RNAI 抗蚜性
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转新型抗虫基因Vip3A棉花新种质的创制 被引量:3
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作者 张安红 王志安 +2 位作者 肖娟丽 刘圆 罗晓丽 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1287-1293,共7页
该研究构建植物表达载体pBin438-Vip3A,通过农杆菌介导法转化棉花品种‘冀合713’,将新型抗虫基因Vip3A导入到棉花植株,创制对棉铃虫抗性的转基因棉花新种质。结果表明:(1)PCR检测Vip3A基因已经导入到棉花基因组中且能够稳定遗传。(2)... 该研究构建植物表达载体pBin438-Vip3A,通过农杆菌介导法转化棉花品种‘冀合713’,将新型抗虫基因Vip3A导入到棉花植株,创制对棉铃虫抗性的转基因棉花新种质。结果表明:(1)PCR检测Vip3A基因已经导入到棉花基因组中且能够稳定遗传。(2)室内抗虫性鉴定表明,与对照相比转基因植株对棉铃虫的抗性显著提高,并获得2株高抗和3株抗棉铃虫的转Vip3A基因株系。(3)Southern blotting结果显示,转基因株系BV01为单拷贝。(4)Elisa检测表明,外源Vip3A基因在BV01的根、茎、叶、花、种子中都有表达,在叶片中的Vip3A蛋白表达为苗期>蕾期>花期>铃期>吐絮期。该研究创制了新型抗虫转基因棉花材料,为培育棉花新型抗虫品种提供了种质资源。 展开更多
关键词 抗虫性 VIP3A基因 棉花 棉铃虫
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棉花转录因子基因GhMYBPA1的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 张安红 赵战胜 +3 位作者 王志安 肖娟丽 刘圆 罗晓丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期9-14,共6页
MYB转录因子蛋白普遍存在于植物中,在生物和非生物胁迫中发挥着重要作用。为了探讨棉花MYB转录因子的功能,采用同源克隆技术,在棉花叶片组织中克隆GhMYBPA1基因,并对其进行生物信息学和不同逆境胁迫下的表达分析。结果表明,从中棉35中... MYB转录因子蛋白普遍存在于植物中,在生物和非生物胁迫中发挥着重要作用。为了探讨棉花MYB转录因子的功能,采用同源克隆技术,在棉花叶片组织中克隆GhMYBPA1基因,并对其进行生物信息学和不同逆境胁迫下的表达分析。结果表明,从中棉35中成功克隆得到1个新的MYB转录因子基因GhMYBPA1(基因登录位点为XM016869420),cDNA全长为825 bp,开放阅读框630 bp,编码210个氨基酸;生物信息学分析结果表明,GhMYBPA1蛋白分子质量为20.183 ku,N端含有2个MYB的DNA保守结合域,属于R2R3-MYB型转录因子;氨基酸同源分析发现,GhMYBPA1蛋白与来自亚洲棉GaMYB12-like同源性较高;qRT-PCR分析结果表明,GhMYBPA1在棉花根、茎、叶、花中均有表达,花中相对表达量最高,其次是叶;逆境胁迫分析表明,在受到高盐、低温和干旱处理诱导时,GhMYBPA1基因的表达量均发生了变化,推测GhMYBPA1可能在棉花非生物胁迫过程中起重要的调控作用。研究结果可为进一步开展GhMYBPA1基因功能研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 棉花 GhMYBPA1 生物信息学分析 转录因子 非生物逆境胁迫 功能分析
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Introduction of Bacillus thuringiensis(Bt)gene does not reduce potassium use efficiency of Bt transgenic cotton(Gossypium hirsutum L.) 被引量:1
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作者 WANG Qianqian YAN Wei +7 位作者 ZHANG Yichi ZHAN Manman LUO xiaoli ENEJI AEgrinya ZHANG Anhong xiao juanli LI Fangjun TIAN xiaoli 《Journal of Cotton Research》 CAS 2022年第3期274-284,共11页
Background:Potassium(K)deficiency has become a common field production problem following the widespread adoption of Bacillus thuringiensis(Bt)transgenic cotton(Gossypium hirsutum L.)worldwide.The purpose of this study... Background:Potassium(K)deficiency has become a common field production problem following the widespread adoption of Bacillus thuringiensis(Bt)transgenic cotton(Gossypium hirsutum L.)worldwide.The purpose of this study was to clarify whether the introduction of Bt gene directly reduces the K-use efficiency of cotton to induce K deficiency.Results:The cotton variety,Jihe 321(wild type,WT)and its two Bt(Cry1Ac)-transgenic overexpression lines(OE-29317,OE-29312)were studied in field with low soil-test K+(47.8 mg·kg^(−1)).In the field with low soil-test K+,only OE-29317 had less biomass and K+accumulation than the WT at some growth stages.Both Bt lines produced similar or even greater seed cotton yield than WT in the field.When the Bt gene(~70%)in OE-29317 and OE-29312 plants was silenced by virus-induced gene silencing(VIGS),the VIGS-Bt plants did not produce more biomass than VIGSgreen fluorescent protein(control)plants.Conclusions:The introduction of Bt gene did not necessarily hinder the K use efficiency of the cotton lines under this study. 展开更多
关键词 Biomass Bt(Bacillus thuringiensis)gene Cotton(Gossypium hirsutum L.) K uptake K utilization index Yield
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棉花miR397-LAC4模块调控棉铃虫抗性研究
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作者 王志安 魏太平 +3 位作者 罗晓丽 肖娟丽 刘圆 张安红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1629-1636,共8页
miRNA(microRNA)通过调控其靶标基因在植物的生长、发育和抗逆过程中扮演着重要的角色。该研究采用分子生物学和生物化学等方法,探讨棉花miR397-LAC 4参与植株木质素生物合成和对棉铃虫抗性响应机制。结果发现:(1)棉花miR397(ghr-miR397... miRNA(microRNA)通过调控其靶标基因在植物的生长、发育和抗逆过程中扮演着重要的角色。该研究采用分子生物学和生物化学等方法,探讨棉花miR397-LAC 4参与植株木质素生物合成和对棉铃虫抗性响应机制。结果发现:(1)棉花miR397(ghr-miR397)在转录后调控漆酶基因(GhLAC 4)的表达,GhLAC 4属于蓝铜氧化酶家族,通过调控木质素合成,抵御棉铃虫入侵棉花。(2)GUS报告基因融合表达和酶活性测定表明,ghr-miR397在转录后切割靶标基因GhLAC 4抑制其表达。(3)利用VIGS(virus induced gene silencing)技术在棉花中沉默和过表达ghr-miR397,棉铃虫抗性检测分析表明,沉默miR397表达会增加棉花对棉铃虫的抗性,但过表达ghr-miR397则会降低棉花的抗性。(4)选择性和非选择性棉铃虫实验分析、组织化学染色和木质素含量测定表明,沉默GhLAC 4表达会减少木质素的积累,增加棉花对棉铃虫的敏感性。研究表明,ghr-miR397-GhLAC 4模块共同微调棉花木质素合成来参与棉花抗虫性调控,同时也为棉花抗虫育种提供了新思路。 展开更多
关键词 miR397 GhLAC4 木质素 棉铃虫
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转新型抗虫基因Vip3A棉花的获得及抗虫性鉴定
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作者 肖娟丽 罗晓丽 +1 位作者 王志安 张安红 《山西农业科学》 2020年第5期692-695,共4页
为获得新型抗棉铃虫棉花种质材料,利用农杆菌介导法获得新型抗虫基因Vip3A的转化植株,通过卡那霉素、PCR、ELISA鉴定和筛选,并结合室内试验分析这些转基因植株分子特征和抗棉铃虫效果。结果表明,从32个转基因植株中获得22个阳性植株,根... 为获得新型抗棉铃虫棉花种质材料,利用农杆菌介导法获得新型抗虫基因Vip3A的转化植株,通过卡那霉素、PCR、ELISA鉴定和筛选,并结合室内试验分析这些转基因植株分子特征和抗棉铃虫效果。结果表明,从32个转基因植株中获得22个阳性植株,根据农艺性状表现,筛选出3个转基因株系分别是BV01、BV02、BV03,其对2代棉铃虫的校正死亡率分别达到85.7%、83.2%和86.6%。研究结果可为棉花抗虫育种提供新的抗性种质材料。 展开更多
关键词 棉花 VIP3A基因 棉铃虫 抗虫性
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Overexpressing rice lesion simulating disease 1-like gene(OsLOL1)in Gossypium hirsutum promotes somatic embryogenesis and plant regeneration
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作者 WANG Zhian WANG Peng +4 位作者 HU Guang xiao juanli ZHANG Anhong LUO xiaoli WU Jiahe 《Journal of Cotton Research》 2020年第3期149-155,共7页
Background:Cotton somatic embryogenesis is difficult or rarely frequent to present,which has limited gene function identification and biotechnological utility.Here,we employed a rice key somatic embryogenesis-related ... Background:Cotton somatic embryogenesis is difficult or rarely frequent to present,which has limited gene function identification and biotechnological utility.Here,we employed a rice key somatic embryogenesis-related gene,rice lesion simulating disease 1-like gene(OsLOL1),to develop transgenic cotton callus for evaluating its function in ectopic plants.Results:Overexpressing OsLOL1 can promote cotton callus to form embryogenic callus,not only shortening time but also increasing transition of somatic callus cells to embryogenic callus cells.And the regenerating plantlets per transgenic OsLOL1 embryogenic callus were significantly higher than those in the control transformed with empty vector.Analysis of physiological and biochemical showed that OsLOL1 can repress cotton superoxide dismutase 1 gene(GhSOD1)expression,possibly resulting in reactive oxidant species(ROS)accumulation in transgenic callus cells.And OsLOL1-overexpressed embryogenic callus exhibited higherα-amylase activity compared with the control,resulting from the promotion of OsLOL1 to cotton amylase 7 gene(GhAmy7)and GhAmy8 expression.Conclusion:The data showed that OsLOL1 could be used as a candidate gene to transform cotton to increase its somatic embryogenesis capacity,facilitating gene function analysis and molecular breeding in cotton. 展开更多
关键词 Gossypium hirsutum Somatic embryogenesis OsLOL1 GhSOD1 GhAmy7
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