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猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量:6
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作者 万颖 周改静 +9 位作者 麻园 石正旺 肖书奇 罗俊聪 宋锐 曹丽艳 杨波 王丽娟 田宏 郑海学 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1173-1181,共9页
旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样... 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL^(-1),血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 抗体检测 阻断ELISA
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猪流行性腹泻病毒S蛋白纳米抗体的筛选与鉴定 被引量:3
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作者 王天宇 李志伟 +5 位作者 杨婷 董林芳 马志倩 边巴次仁 肖书奇 李爽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期2589-2598,共10页
猪流行性腹泻病(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种高度接触性肠道传染性疫病,主要危害1周龄以内的仔猪,仔猪感染死亡率高达100%,是目前危害世界养猪业的主要疫病之一。本研究旨在制备针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的特异性纳米抗体并... 猪流行性腹泻病(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种高度接触性肠道传染性疫病,主要危害1周龄以内的仔猪,仔猪感染死亡率高达100%,是目前危害世界养猪业的主要疫病之一。本研究旨在制备针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的特异性纳米抗体并鉴定其结合活性。作者原核表达并纯化PEDV S1蛋白,将纯化后的PEDV S1重组蛋白免疫双峰驼,第4次免疫后分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞RNA,反转录得到cDNA,通过巢式PCR扩增VHH片段,并构建至pCANTAB-5E载体中,电转化至TG1感受态细胞,得到VHH噬菌体抗体展示文库;随后,对构建的噬菌体抗体展示文库进行救援和3轮富集,利用噬菌体展示技术从中筛选针对PEDV S蛋白纳米抗体,通过ELISA验证筛选的纳米抗体的特异性和结合力。通过Western blot和间接免疫荧光验证纳米抗体与PEDV的结合活性。结果显示:成功表达并纯化PEDV S1蛋白,经4次免疫后,双峰驼血清中的特异性抗体效价达到了1∶256000。构建的噬菌体展示文库的库容量为2.1×10^(7),阳性率85%;对噬菌体展示文库3轮的淘选富集后,最终筛选出6株氨基酸序列不同的纳米抗体,ELISA结果显示,6株纳米抗体均对PEDV S1重组蛋白具有良好的结合力与特异性。随后验证了Nb3能够与PEDV结合,表明其具有良好的活性。成功筛选到针对PEDV S1蛋白的特异性纳米抗体,所筛选纳米抗体有望用于PED的诊断和治疗,同时为PEDV的致病机制研究提供抗体材料。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 结构蛋白S 纳米抗体 噬菌体展示技术
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The Influence of Extractable Organic Matter on Pore Development in the Late Triassic Chang 7 Lacustrine Shales, Yanchang Formation, Ordos Basin, China 被引量:8
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作者 HAN Hui LIU Pengwei +11 位作者 DING Zhengang SHI Pitong JIA Jianchao ZHANG Wei LIU Yan CHEN Shijia LU Jungang Chen Kang PENG Xudong WANG Zhiyong xiao shuqi GAO Yuans 《Acta Geologica Sinica(English Edition)》 CAS CSCD 2018年第4期1508-1522,共15页
To investigate the influence of extractable organic matter (EOM) on pore evolution of lacustrine shales, Soxhlet extraction, using dichloromethane, was performed on a series of Chang 7 shale samples (Ordos Basin, C... To investigate the influence of extractable organic matter (EOM) on pore evolution of lacustrine shales, Soxhlet extraction, using dichloromethane, was performed on a series of Chang 7 shale samples (Ordos Basin, China) with vitrinite reflectance of 0.64% to 1.34%. Low-pressure gas adsorption experiments were conducted on the samples before and after extraction. The pore structure parameters were calculated from the gas adsorption data. The results show complex changes to the pore volumes and surface areas after extraction. The pore development of both the initial and extracted samples is strongly controlled by total organic carbon (TOC) content. Micropores developed mainly in organic matter (OM), while mesopores and macropores predominantly developed in fractions other than OM. The influence of EOM on micropores is stronger than on mesopores and macropores. Organic solvents with a higher boiling point should be used to explore the effect of EOM on pore structure in the future. 展开更多
关键词 lacustrine shale pore development extraction shale gas Chang 7 Ordos Basin
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酸性硫酸钙对临床常见致病微生物的杀灭能力
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作者 付霞丽 郑紫方 +5 位作者 马志倩 徐乐乐 李志伟 李洋 肖书奇 李爽 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期2906-2915,共10页
【目的】研究消毒剂酸性硫酸钙(ACS)对微生物的杀灭效果,为用消毒剂防控人畜疫病提供基础数据和理论依据。【方法】将ACS与中和剂(3%卵磷脂、5%吐温-80的磷酸盐缓冲液)共孵育一段时间后,再分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌... 【目的】研究消毒剂酸性硫酸钙(ACS)对微生物的杀灭效果,为用消毒剂防控人畜疫病提供基础数据和理论依据。【方法】将ACS与中和剂(3%卵磷脂、5%吐温-80的磷酸盐缓冲液)共孵育一段时间后,再分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)共培养一段时间,将与细菌的混合物涂布于营养琼脂平板,置于37℃生化培养箱培养18-24 h;将与病毒的混合物接种于细胞板,在37℃细胞培养箱内培养一定时间,评价中和剂的中和效果。其对照设置和评判标准如下:消毒剂+菌悬液或病毒悬液(第1组),(消毒剂+菌悬液或病毒悬液)+中和剂(第2组),(中和剂+消毒剂)+菌悬液或病毒悬液(第3组),(无菌硬水+菌悬液或病毒悬液)+中和剂(第4组),(无菌硬水+菌悬液或病毒悬液)+PBS(第5组),无菌硬水+PBS(第6组);细菌杀灭试验中和剂效果评价标准:第1组有极少量细菌生长或无菌生长,第2组有菌生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组细菌数接近且与阳性对照组细菌数接近,第6组无菌生长,3次重复试验均符合上述条件,结果一致,判定所选中和剂及浓度合适;病毒灭活试验中和剂效果评价标准:第1组有极少量病毒生长或无病毒生长,第2组有病毒生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组病毒生长与原接种量相近,第6组细胞正常生长,3次重复试验结果一致,判定所选中和剂及浓度合适。利用悬液定量杀菌法和测定病毒滴度的方法评价ACS对上述细菌和病毒的消灭效果,将ACS稀释200、300、400、500、600、700倍分别与上述细菌或病毒作用不同时间后加入中和剂进行中和,然后将细菌混合物涂布于营养琼脂平板,通过计算菌落数评价ACS杀灭细菌的效果,测定病毒混合物中病毒滴度评价ACS对病毒的杀灭效果。【结果】所选用的中和剂能够有效地中和ACS 200倍稀释液对细菌和病毒的残留作用,且该中和剂对细菌、病毒和细胞无毒性。当ACS与细菌作用0 h后立即被中和,最大稀释300倍对大肠杆菌的灭菌率为100%,最大稀释600倍对金黄色葡萄球菌的灭菌率为100%,最大稀释700倍时对沙门氏菌的灭菌率为100%。当ACS稀释至700倍时,分别与上述细菌作用1d或6d后被中和,灭菌率均为100%;此外,ACS稀释200倍时,与PRRSV作用60 min后被中和,未检测出病毒滴度。【结论】ACS稀释700倍与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌作用1 d或1 d以上均能产生较好的杀灭效果;ACS稀释200倍与PRRSV作用60 min能完全杀灭病毒。这可为养殖场选用消毒剂防控疫病提供参考。 展开更多
关键词 酸性硫酸钙 微生物 中和剂 杀灭效果
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围产期使用抗菌药物对PRRSV阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响
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作者 肖书奇 刘俊 +2 位作者 冯英桐 李洋 徐乐乐 《畜牧兽医学报》 CAS 2024年第6期2751-2760,共10页
旨在评估围产期使用抗菌药物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响。从广西某规模化PRRSV阳性猪场挑选280头临产母猪随机分为5组,在其围产期分别用替米考星、泰妙菌素、多西环素和泰万菌素等兽医常用抗生素... 旨在评估围产期使用抗菌药物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响。从广西某规模化PRRSV阳性猪场挑选280头临产母猪随机分为5组,在其围产期分别用替米考星、泰妙菌素、多西环素和泰万菌素等兽医常用抗生素,对照组不使用抗菌药物。采集各组断奶仔猪前腔静脉血进行PRRSV核酸和抗体检测,以评估各药物对防控仔猪PRRSV感染的效果;统计各组断奶仔猪腹泻窝数及比率,以探究常用抗生素对仔猪腹泻的防控效果;统计各组断奶母猪的断配间隔及断奶7、10 d内发情配种率,统计各组仔猪的窝均断奶数、断奶存活率和断奶重等生产指标,以评估围产期常用抗生素使用对母猪和仔猪生产性能的影响并计算使用药物所带来的经济效益。结果表明:泰万菌素、替米考星组断奶仔猪PRRSV核酸阳性检出率为0%,且PRRSV抗体水平显著高于对照组;泰万菌素组仔猪的腹泻率低于其它用药组及对照组;相关生产指标统计显示,与其他组相比,泰万菌素组仔猪断奶存活率及断奶均重最高,母猪的断配间隔最短,窝均损失资产更低。综上,本研究评估了围产期使用兽医临床常用抗生素对PRRSV阳性猪场母猪和仔猪生产性能的影响,发现使用泰万菌素可以有效阻断PRRSV垂直传播,提升仔猪抗体水平,显著改善断奶仔猪腹泻率;使用泰万菌素显著提升了仔猪断奶存活率及断奶均重,缩短了母猪的断配间隔,降低了窝均损失资产。本研究的开展为规模化PRRSV阳性猪场的有效药物使用提供了重要试验数据和理论支持,为在PRRSV大流行背景下实现规模化猪场降本增效提供了必要的补充措施。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 规模化猪场 围产期 抗生素 泰万菌素
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PRRSV感染继发细菌性病原的致病性及耐药性分析 被引量:4
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作者 付霞丽 郑紫方 +2 位作者 李洋 肖书奇 李爽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1470-1475,共6页
旨在探索感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后引起继发性严重炎症反应的细菌性病原,以期为疾病的诊断、治疗和预防提供参考依据。从感染PRRSV的猪体内无菌采取胸腔积液,经菌落培... 旨在探索感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后引起继发性严重炎症反应的细菌性病原,以期为疾病的诊断、治疗和预防提供参考依据。从感染PRRSV的猪体内无菌采取胸腔积液,经菌落培养、革兰染色观察、生理生化鉴定、药物敏感性试验、16S rRNA序列比对分析和动物致病性试验,了解病原菌生长特性、菌落形态、生理生化特性、药物敏感性和致病性。结果显示,该分离菌株在普通琼脂平板呈圆形、白色小菌落,血平板呈α溶血,革兰染色为阳性球菌、呈两联或四联,能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,赖氨酸脱羧酶反应呈阳性,对头孢他啶、头孢呋辛、头孢西啶、苯唑西林高度敏感,对万古霉素、青霉素G不敏感。16S rRNA基因序列分析显示,该分离菌株与NCBI登录的绿色气球菌的同源性高达99%,小鼠攻菌试验表明该分离菌株具有致病性。本试验为进一步探索绿色气球菌的致病机制奠定前期基础,并为动物疾病的诊断、预防和治疗提供技术支撑和实践指导。 展开更多
关键词 PRRSV 绿色气球菌 分离鉴定 16S rRNA
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