CACNA1C基因突变儿童2例的临床及分子遗传学研究

本研究选取1例5岁5个月男性患儿,因“间断抽搐1年余”就诊,心电图检查提示QT间期延长,合并房室传导阻滞,可疑长QT综合征;另1例2岁3个月女性患儿,因“无明显诱因的发作性惊恐、抽搐伴发热”就诊,查体:小下颌、双眼内斜,脑电图异常,合并肌张力减低、运动、语言运动发育迟滞;2例患儿均完善了基因检测,例1结果提示CACNA1C基因存在c.1204G>A(p.G402S)新发杂合变异,诊断Timothy综合征,给予普萘洛尔治疗,后自行停药后猝死;例2结果提示CACNA1C基因存在c.1841T>C(p.L614P)新发杂合变异,给予抗癫痫治疗,随访仍有运动与语言发育迟滞。以上2例患儿的特征性表现同一基因引起的不同临床表型,均为罕见疾病,临床诊疗中需多加注意。

鸭腺病毒3型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定,并用于DAdV-3 Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示:原核表达获得1.77 mg/mL Fiber-2蛋白,筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10,两株单克隆抗体均为IgG 1型,轻链类型为κ;DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光,免疫印迹试验确认在约59 ku处出现特异性条带;采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3 Fiber-2蛋白的单克隆抗体,为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。

非洲猪瘟病毒p30蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与免疫检测

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。

非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

软弱夹层巷道围岩失稳特征分析及控制技术研究

为研究软弱夹层对煤矿巷道围岩失稳破坏的影响,基于3DEC离散元模拟软件,建立了不同工况条件下含弱层煤矿巷道数值计算模型,提出割底岩掘进方案,并对不同工况条件下方案进行对比分析及对软弱夹层作用下巷道围岩失稳破坏规律展开研究。结果表明:巷道变形特征与巷道在煤层中布置方式、煤层顶底板围岩强度有关,夹矸层在煤层中不同层位对巷道变形破坏影响也不同。弱层的存在改变了围岩中应力传递路径,软弱夹层与上下相对坚硬岩石交界层面处,因摩擦约束应力作用,导致夹层处的水平应力减小,从而该处位置的强度随之下降,夹层丧失承载能力发生破坏,进而加剧围岩的剪切破坏与水平滑移。通过不同工况方案对比,得出巷道掘进过程中控制割岩层位,夹层置于煤层底板下0.3 m工况方案满足要求。

植物照明北美检测标准与技术解析

美国和加拿大对植物灯(园艺灯具)的要求主要包含:机械结构、电气结构及标志说明书部分。本文以LED植物灯为代表,从环境危害和人身伤害方面分别对机械伤害、热伤害、光危害和不当使用方面进行了解析。

基于RS—可拓理论的金属矿山应急能力评估

及时、准确地评估金属矿山的应急能力,能为金属矿山提升应急能力提供科学指导。根据应急相关的法律法规,结合文献分析和现场调研,并利用解释结构模型方法,建立了金属矿山应急能力评估的模型体系。该体系由应急预防能力、应急准备能力、应急响应能力、应急救援能力等4个一级指标、20个二级指标组成。在对比分析各种评估指标权重确定方法的基础上,选择粗糙集理论(Rough Set,RS)和专家评分法确定了金属矿山应急能力评估指标的权重。该方法能充分体现数据的客观性,提高评估结果的精准性。论述了基于可拓理论的应急能力评估方法,能较好地解决综合评估中指标的不相容问题。在某金属矿山应用了基于RS—可拓理论的评估方法,获得了准确、客观的评估结果。该方法具有较强的科学性和实用性,能有效降低金属矿山的事故风险。

淮荒扰动与南北对立之际的郁洲——以新出《北魏尹平墓志》为中心

南朝刘宋失淮北四州,深刻影响了南北政治地理格局。《北魏尹平墓志》中的“淮荒扰动”指琅邪民王万寿以朐山降魏,由是引发了梁魏朐山之战。朐山既是南朝缘淮防线的咽喉,也是郁洲存亡之根本,故萧梁倾国来争。“郁州刺史”张稷在朐山战后,急欲再立军功,以提高其在朝廷的声望,消弭与梁武帝的隔阂,但贸然禁断郁洲与北魏的互市,纵容部曲侵陵土人,最终招致土人徐道角的刺杀。徐道角背后存在强大的士族门户,即东莞徐氏。徐氏世奉天师道,在郁洲拥有影响力,张稷之死揭示出郁洲岛上的土客矛盾。这两起看似孤立的政治事件,透露出南北对立之际,淮海族群文化的同质性,此即“淮蕃海捍,本出北豪”之谓,而“岛夷”是“淮夷”的延伸,是陆地文明走向海洋的体现。

不同来源供体及后腹腔镜活体供肾移植的临床疗效分析

目的探讨亲属活体捐献(living donor,LD)与公民逝世后器官捐献(deceased donor,DD)肾移植的短期临床效果及影响因素,并研究不同活体供肾获取方式对短期移植肾功能的影响。方法回顾性分析2019年1月至2021年8月在宁波市鄞州第二医院接受同种异体肾移植术的80例受者,其中LD肾移植16例,DD肾移植64例;另选取2006年10月至2010年10月在宁波市鄞州第二医院行LD肾移植术的29例受者,其中活体肾移植根据供肾手术方式不同,分为3D后腹腔镜活体供肾切取术和开放活体供肾切取术,其中后腹腔镜组16例,开放手术组13例。观察患者的性别、年龄、术前体质量指数(body mass index,BMI)、透析方式、透析时间、术前及术后(3d、7d、1个月、3个月、6个月、12个月)血肌酐、冷缺血时间(cold ischemia time,CIT)、热缺血时间(warm ischemia time,WIT)、术后住院时间、移植肾恢复及存活情况。结果LD组受者年龄显著小于DD组(P<0.05),透析时间、术后住院时间、CIT、WIT均显著短于DD组(P<0.05),术后3d、7d的血肌酐水平均显著低于DD组(P<0.05)。在短期预后方面,LD组受者的移植肾功能延迟恢复(delayed graft function,DGF)发生率显著低于DD组(P=0.033)。活体肾移植中,后腹腔镜组受者的术后住院时间显著短于开放手术组(P=0.012),出院时血肌酐水平显著低于开放手术组(P=0.008),但两组受者的预后未见明显差异。结论目前DD是供体的主要来源,但短期临床疗效不及LD,应综合评估,提高DD供体的有效利用率。

郑州文化创意产业提升发展研究——以国家中心城市建设为背景

国家中心城市的建设规划为郑州文化创意产业的提升发展提供了新契机。郑州要果断抓住这一历史机遇,正视当前文化创意产业发展中出现的问题,在政策制定上宏观与微观相结合,在人才队伍建设上加强专业人才的培养和引进,在营销渠道上注重与移动互联网的深度融合,实现文化创意产业的提升和发展。

肾移植受者新型冠状病毒感染致急性肾功能损伤的单中心分析

目的 探讨肾移植受者新型冠状病毒感染(COVID-19)后对移植肾功能的影响。方法 选取因COVID-19收治入院的137例肾移植受者为研究对象,收集其临床资料及出院后随访情况,分析肾移植受者COVID-19后移植肾功能的变化特点。结果 137例肾移植受者年龄为51.9岁,其中男86例,女51例,均于本院长期随访。COVID-19前最近一次的血清肌酐值126.61(82,137)μmol/L;COVID-19后,75%(103/137)的患者在感染早期便出现血清肌酐上升,34.31%(47/137)的患者达到了急性肾损伤的诊断标准,其中70.21%(33/47)的患者在COVID-19痊愈后肾功能可以恢复到感染前的水平。出院时,有41.61%(57/137)的患者血清肌酐有所下降。肾移植受者感染前血清肌酐与入院时、出院时差异均有统计学意义(均P <0.05)感染前与出院后1个月差异无统计学意义(P>0.05)。移植肾受者入院时肾小球滤过率与出院时、出院后1个月差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 肾移植受者COVID-19会导致急性肾功能损害,且感染前肾功能较差的患者在感染后移植肾功能受损程度更为严重。当移植肾受者COVID-19痊愈1个月后,肾功能大多可恢复至感染前的水平。

基于时空维度耦合的地质灾害发育程度评价研究

在现有地质灾害综合评价指标体系中,地质灾害发育程度评价因子只包括反映空间维度的点数量、点密度、体积数、体积密度等,不包括反映时间维度的评价因子。文章引入反映时间维度的受灾年份因子充实之。通过对地质灾害体积取中位数对数法、对受灾年份采用概率密度法进行处理和采用熵权法确定评价因子权重来建立时空耦合评价模型;采用斜率法将评价结果划分为高、较高、中、低四级,以反映已发生灾害的发育状况。选取2011—2020年已发生的地质灾害点,评价区域为除香港特别行政区、澳门特别行政区、台湾地区以外的全国31个省份,按此方法对以县域为单元的地质灾害发育程度进行评价与区划。结果表明:地质灾害高发育区共323个县,涉及19个省(自治区、直辖市),主要分布在东南、西南、西北等地。较高发育区共566个县,涉及25个省(自治区、直辖市),主要分布在西南、中南、东南等地。中发育区623个县,涉及30个省(自治区、直辖市),主要包括西北、华北等地。低发育区共1336个县,涉及30个省(自治区、直辖市),主要包括华北、东北、华东等地。本次评价结果与国家防灾部署、灾害发育分布具有较高的吻合度。野外实地调研证明,引入受灾年份后的评价结果较引入前更符合实际情况。

基于电流相似度与高频能量的串联故障电弧检测方法

故障电弧是引起电气火灾的重要原因,针对非线性负载工况下故障电弧保护算法的误动作和拒动作问题,提出一种基于电流相似度与高频能量的串联故障电弧检测方法。参照标准搭建故障电弧实验平台并进行实验,从时域、频域角度分析电弧电流特征。采用小波函数预处理电流信号,选取电流低、高频特征量。设定故障电弧特征量阈值,以此为基础提出故障电弧识别算法。实验结果表明,该算法能够准确识别多种负载条件下的故障电弧,且未发生误动作和拒动作。

粮食仓储企业安全风险评估方法研究及应用

粮食仓储企业的安全风险评估对发现事故隐患、保障企业安全发展具有重要作用。根据现场调研和文献分析,粮食仓储企业容易发生粮食坍塌、粉尘爆炸、火灾、机械伤害、中毒窒息和车辆伤害等类型的事故,分析各类事故的特点及主要原因,在此基础上建立了粮食仓储企业安全风险评估指标体系,该体系由6个一级指标和21个二级指标组成。在对比分析的基础上,选择层次分析法确定了粮食仓储企业安全风险评估指标的权重。使用改进的模糊综合评价法开展安全风险评估,确定风险等级。在某粮食仓储企业进行了安全风险评估方法的实际应用,获得了客观、有实用价值的评估结果。提出的安全风险评估指标体系和评估方法,能准确掌握粮食仓储企业的综合安全风险状况及重点安全风险,可以科学指导并改善粮食仓储企业的安全工作。

陷落柱渗流突水机理及强度主控因素模拟

为了研究陷落柱影响区域内巷道渗流突水机制及其主控因素,采用Darcy、Brinkman、N-S方程对含水层、陷落柱、突水巷道内流场进行联动系统刻画,选取不同参数、不同边界等变量,分析影响陷落柱渗流突水强度的主要因素。结果表明:定压、定流量条件下,含水层渗透率增大会引起含水层和陷落柱交界处区域流速增大,但定流量条件下增幅较小,且会降低巷道突水流速;陷落柱渗透率的增大对突水压力和突水流速作用显著,定压条件下,随着陷落柱渗透率的增大,巷道突水流速骤增;含水层压力增高,陷落柱区域和巷道区域流速明显增大;在定流量边界下,随着陷落柱渗透率的增大,巷道突水流速仅发生微小波动;将研究结论与现有相关成果进行了对比验证分析,获得了与本文较一致的研究规律。总体分析,陷落柱影响区域巷道突水机理是含水层水压高、足量补水、陷落柱破碎区域渗透率较大且联通了含水层和巷道;其中,含水层压力、陷落柱渗透率是陷落柱渗流突水强度的主控因素。

基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立

为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10%,重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3%,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。

地方财政农业支出对区域农业经济的影响研究--基于LMDI分解法的广西实证检验

财政农业支出是全面推进乡村振兴战略的重要驱动力,也是农业经济快速发展的重要保障。本文采用2008—2020年广西年度数据,引入对数平均迪氏指数法(LMDI分解法),实证检验了广西财政农业支出对农业经济增长的规模效应、结构效应和效率效应,结果表明,财政农业支出对农业经济增长具有显著的促进作用,其中,规模效应的正向作用较为显著,结构效应和效率效应并不理想,有待进一步优化财政农业支出结构和资金效率。据此,提出保持财政农业支出规模适度、促进财政农业支出结构优化、引导财政农业支出效率提升等对策建议,以期提高地方财政农业资金的使用效率、推动地方农业经济高质量发展。

非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2×Flag-p30。利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了抗ASFV p30蛋白的单克隆抗体。SDS-PAGE分析发现,在16℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导6 h后,该p30重组蛋白主要表达在包涵体中且表达量中等,蛋白分子量约为48 kDa。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白印迹法(Western blot)和间接免疫荧光法(IFA)检测获得的单克隆抗体3C2和4A3。结果显示,两株单克隆抗体均具有良好的免疫特性,且3C2株具有Western blot效价。本研究中p30原核重组蛋白及其单克隆抗体的制备为进一步探究p30磷酸化修饰及功能解析奠定基础,并为ASFV特异性诊断技术提供了必要的生物材料。

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备

本研究旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)S273R蛋白的特异性单克隆抗体。本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示:基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了4株可稳定分泌抗ASFV S273R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过免疫印迹(Western blot)和免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)测定了其免疫特性。4株单克隆抗体亚类均为IgG1型,轻链均为κ链。本研究获得的非洲猪瘟病毒S373R蛋白单克隆抗体可为进一步研究ASFV pS273R的生物学功能及基因缺失毒株的鉴别诊断和疫苗开发提供技术储备。

非均质岩石损伤效应下沿空留巷煤柱宽度研究

目前对沿空留巷煤柱宽度留设的研究集中在煤柱强度、煤柱载荷与煤柱稳定性方面,很少考虑岩石非均质性及损伤效应对煤柱留设宽度的影响。以乌兰木伦煤矿四盘区12煤沿空留巷为工程背景,在考虑岩石非均质性-损伤效应基础上,综合运用理论分析、数值计算、现场实测等方法,研究了煤柱留设宽度。研究结果表明:岩石非均质性-损伤效应模型可较好地反映岩石破裂特征,即在弹性阶段仅有少量颗粒发生破坏,在塑性阶段裂隙开始发育并出现贯通现象,在破坏阶段形成沿对角线方向的宏观剪切裂纹;随着煤柱宽度增大,巷道整体变形量先减小后增大,在煤柱宽度为6 m时发生突变,煤柱周围损伤区域范围及损伤程度不断减小;采动侧巷帮变形量大于非采动侧,但随煤柱宽度改变的变化量较非采动侧小,采空区侧围岩损伤分布大于实体煤侧;根据理论分析、数值计算确定沿空留巷煤柱宽度为5 m并应用于工程现场,工作面前方巷道整体变形量不大,工作面后方60 m后顶板覆岩移动变形基本稳定,验证了沿空留巷煤柱宽度留设的合理性。