Establishment and Characterization of a Fin Cell Line Derived from the Atlantic Salmon Salmo salar and Its Application to Fish Virology Study

Atlantic salmon(Salmo salar)is an important economic fish that is seriously threatened by various viruses.A cell line designated as ASF derived from the caudal fin tissue of Atlantic salmon was established and characterized in this study.ASF cells grew well in Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)containing 20%fetal bovine serum at 20℃.DNA sequencing and comparative analysis of the cytochrome B gene verified that the ASF cell line originated from Atlantic salmon.Chromosome analysis indicated that the modal chromosome number of ASF cells was 58.Viral susceptibility test showed that ASF cells were susceptive to two important fish viruses,viral hemorrhagic septicemia virus(VHSV)and red-spotted grouper nervous necrosis virus(RGNNV).Viral replication in ASF cells was further confirmed by qRT-PCR and transmission electron microscopy.Moreover,VHSV and RGNNV infections could induce the cellular responses in ASF cells,as indicated by the differential expression of cellular antiviral response-related genes,interferon-1 and Mx-1.In conclusion,the newly established ASF cell line can be applied as an in vitro tool in fish virology and immunity studies.

植物乳杆菌LP-37和氟苯尼考对许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道形态、消化酶及免疫酶活性的影响

为分析植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)LP-37和氟苯尼考对许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道形态的影响,在水温(14±1)℃条件下,将体质量为(32.23±9.38)g的许氏平鲉饲养在约5 m^(3)的循环水圆桶中45 d,分别投喂4种饲料:喷洒去离子水的基础饲料(对照组C0);前30 d投喂喷洒1×10^(7)CFU/g植物乳杆菌的饲料,后15 d投喂对照饲料(植物乳杆菌组,P1);前30 d投喂喷洒20 mg/L氟苯尼考的饲料,后15 d投喂对照饲料(氟苯尼考组,F1);前15 d投喂喷洒氟苯尼考的饲料,中间15 d投喂喷洒植物乳杆菌的饲料,最后15 d投喂对照饲料(植物乳杆菌和氟苯尼考组,G1)。在第30 d和第45 d解剖许氏平鲉的肠道,通过HE染色和Image J软件分析肠道形态结构的变化,并测定血清中α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的变化。结果显示,1×10^(7)CFU/g植物乳杆菌和20 mg/L的氟苯尼考可以改善肠道结构,显著提高肠道绒毛长度、肌层厚度、隐窝深度(P<0.05);1×10^(7)CFU/g植物乳杆菌LP-37可以显著提高许氏平鲉血清中α-淀粉酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性(P<0.05);20 mg/L的氟苯尼考可以显著提高许氏平鲉血清α-淀粉酶、胰蛋白酶活性、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶的活性,显著降低脂肪酶活性(P<0.05);组合使用1×10^(7)CFU/g植物乳杆菌LP-37和20 mg/L氟苯尼考可以显著提高许氏平鲉血清α-淀粉酶、超氧化物歧化酶的活性(P<0.05),显著降低脂肪酶、胰蛋白酶的活性(P<0.05)。综上所述,植物乳杆菌LP-37和氟苯尼考均可以改善许氏平鲉肠道结构,调节许氏平鲉消化酶和免疫酶的活性。

益生菌和中草药复方制剂对凡纳滨对虾生长、非特异性免疫、代谢能力和肠道组织结构的影响

为研究益生菌和中草药复方制剂对工厂化养殖凡纳滨对虾生长、非特异性免疫、代谢能力和肠道组织结构的影响,将初始体质量(2.0±0.2)g的2250尾凡纳滨对虾随机分为3组,每组3个平行,每个平行250尾,其中对照组无添加,试验组1添加多肽+氨基酸+枯草芽孢杆菌代谢物,试验组2添加大蒜提取物+肉桂提取物+菊苣提取物+枯草芽孢杆菌,添加量为3 g/kg基础饲料。30 d养殖周期结束后,通过分析对虾的生长指标、肌肉营养成分、血清非特异性免疫酶和代谢酶活性以及肠道组织结构的变化以分析复方制剂的应用效果。试验结果显示:两组复方制剂均可提高对虾的体质量相对增长率和体质量特定生长率(P<0.05),且试验组2效果更好;试验组1对虾肌肉粗脂肪和呈味氨基酸含量较对照组显著提高(P<0.05);试验组对虾血清中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、一氧化氮合成酶(NOS)的活性较对照组均有所增强,其中试验组2与对照组差异显著(P<0.05),但谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性较对照组有所降低;试验组对虾血清中谷氨酰胺合成酶(GS)活性较对照组有所升高,其中试验组1与对照组差异显著(P<0.05);试验组对虾的苹果酸脱氢酶(MDH)、己糖激酶(HK)活性与对照组差异不显著(P>0.05);肠道组织H.E染色结果显示,两组复方制剂均可改善对虾肠道组织结构,降低绒毛层脱落现象。试验结果表明,在工厂化养殖基础饲料中添加3 g/kg复方制剂2(大蒜提取物+肉桂提取物+菊苣提取物+枯草芽孢杆菌)可显著促进凡纳滨对虾生长,提高其非特异性免疫和代谢能力,优化肠道组织结构,综合提高对虾免疫水平。

高位池和工厂化养殖模式下斑节对虾肝胰腺和肠道微生物特征分析

为阐述在不同养殖模式下斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肝胰腺和肠道微生物的特征,基于高通量测序、Biolog ECO技术探讨了高位池和工厂化养殖模式下斑节对虾肝胰腺、肠道菌群结构特征及肠道微生物代谢活性。高通量测序结果显示,高位池养殖模式下对虾肠道菌群多样性及丰富度显著高于工厂化养殖模式,且同类样本距离较近,体现了不同模式对虾样品中物种的异质性和多样性。不同样品中的细菌门类及相对丰度结果显示,对虾肠道菌群的优势菌门包括变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、浮霉菌门(Planctomycetes)、放线菌门(Actinobacteria)等,其中比例最高的是变形菌门;在属水平上,工厂化养殖模式中相对丰度最高的是发光杆菌属(Photobacterium),高位池养殖模式中相对丰度最高的是红杆菌属(Rhodobacterium)和弧菌属(Vibrio)。基于Unifrac距离的生态聚集分析结果显示,生态聚集过程应该与环境特征和养殖策略有直接的关系。肠道微生物代谢活性总体变化趋势结果显示,随着时间的延长,72 h前微生物整体代谢活性呈现快速增加趋势,随后变缓并逐渐趋于平稳;不同养殖模式下斑节对虾肠道微生物代谢碳源种类和活性具有显著差异。

施氮量和移栽密度及其互作对雪茄烟产量及其品质的影响

为探究施氮量和移栽密度及其互作对雪茄烟产量及其品质的影响,选用雪茄烟品种CX-81为研究对象,设置3个不同施氮量水平142.5 kg/hm^(2)(N1)、172.5 kg/hm^(2)(N2)、202.5 kg/hm^(2)(N3),3个不同移栽密度水平18180株/hm^(2)(D1)、20205株/hm^(2)(D2)、22725株/hm^(2)(D3),分析这2个因素对中部叶成熟期烟叶叶绿素、经济性状、晾制后化学成分的影响,对叶绿素与雪茄烟的化学成分指标进行了相关性分析。结果表明,随着移栽密度的增加,叶绿素、总糖、还原糖、糖碱比含量逐渐减小,烟碱、总氮随施氮量的增加而增加,叶绿素、还原糖、总糖则以N2水平最高。中部叶叶绿素含量与总糖、还原糖呈极显著正相关。施氮量与密度主要对雪茄烟的烟碱、总氮、总糖、还原糖、氮碱比、糖碱比存在显著影响,但二者的互作仅对总氮、氮碱比存在显著影响。较高的施氮量能获得较大的单叶重和产量,但影响烟叶的品质。较小的移栽密度对烟叶的品质有利,但影响产量。建议在低密度(D1)种植区域选择施氮量202.5 kg/hm^(2),在中等密度(D2)与高密度种植区域(D3)均宜选择施氮量为172.5 kg/hm^(2)。

虾肝肠胞虫的检测与控制技术研究进展

虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei),又名“肠道上皮细胞孢子虫”,于2003年被Chayaburakul等[1]首次发现,2009年由Tourtip等[2]从生长缓慢的斑节对虾(Penaeusmonodon)中分离并命名,主要感染斑节对虾、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等主要养殖虾类,除了长期肆虐印度、韩国、泰国等[3-5]多个国家的对虾养殖外,对我国对虾养殖业和食品安全也造成了威胁。2013年,我国养殖凡纳滨对虾首次检出虾肝肠胞虫,随后在江苏、山东、辽宁等地[6-9]的养殖对虾中也出现了不同程度的虾肝肠胞虫感染。

一株增强中华绒螯蟹抗病力的固氮红细菌SY5的分离鉴定与表征

为丰富在中华绒螯蟹病害防控中具有潜在应用价值的微生物资源,以类胡萝卜素产生能力作为评价指标,从养殖池底泥中分离获得一株优良的好氧光合细菌SY5,在形态与生理生化鉴定以及分子鉴定的基础上对其进行药敏特性分析,并进一步评价了其对中华绒螯蟹抗弗氏柠檬酸杆菌感染的保护效果。结果表明,菌株SY5为固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans),革兰氏染色阴性,在营养琼脂平板上的菌落特征为深红色、圆形、边缘整齐、光滑、湿润,与固氮红细菌YLK20的亲缘关系最近,对阿莫西林、新霉素、庆大霉素、四环素、多黏菌素B、恩诺沙星、环丙沙星、卡那霉素、氨苄西林、罗红霉素、磷霉素、链霉素高度敏感,对多西环素中度敏感;在饲料中添加终浓度为(6.0×10^(5))-(6.0×10^(9))CFU/g时对中华绒螯蟹抗弗氏柠檬酸杆菌感染的有效保护率为60.0%-100%。这些研究结果为固氮红细菌SY5作为中华绒螯蟹养殖用饲料添加剂的后期开发奠定了基础。

不同生态因子对卤虫卵孵化水体中弧菌密度的影响

为探讨脱壳时间、盐度、pH、抑菌微生物制剂、孵化密度等生态因子对卤虫卵孵化水体中弧菌密度的影响,采用稀释涂布硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂平板法,对水体中的弧菌密度进行了检测。试验结果显示,卤虫卵孵化水体中的弧菌密度,其中脱壳处理10 min时,分别较脱壳处理5、15、20、25 min时减少了22.87%、79.56%、73.94%和65.50%;盐度为35时,水体中的弧菌密度分别较盐度为15、20、25、30时减少了69.89%、93.92%、94.97%和6.47%;pH为9.0时,水体中的弧菌密度分别较pH为7.0、7.5、8.0、8.5时减少了46.43%、39.02%、98.12%和93.12%;抑菌微生物制剂用量为1.0 mg/L时,水体中的弧菌密度分别较用量为0.2、0.4、0.6、0.8 mg/L时减少了2.83%、9.42%、13.87%和1.54%;孵化密度为0.25 g/L时,水体中的弧菌密度分别较孵化密度为0.5、1、2、4 g/L时减少了32.79%、96.42%、95.55%和99.12%。研究结果表明,脱壳时间10 min、盐度35、pH 9.0、抑菌微生物制剂用量0.2~1.0 mg/L、孵化密度0.25 g/L时有利于减少卤虫卵孵化水体中的弧菌密度。

虹鳟致病性杀鲑气单胞菌的分离鉴定及其毒力因子的检测

为研究虹鳟Oncorhynchus mykiss致病性杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida的致病机理,利用微生物学及分子生物学方法,从患皮肤溃疡病的虹鳟病灶处分离纯化获得1株优势菌株RBWF-1,通过人工感染试验证实其具有较强的致病性。结果表明:菌株RBWF-1对虹鳟的半致死浓度(LD50)为5.5×10~6CFU/m L;通过对菌株RBWF-1 16S r DNA基因序列扩增、测序及Blast对比,发现其与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种Asalmonicida subsp.masoucida菌株NBRC 13748及无色亚种A.salmonicida subsp.achromogens菌株NCIMB 1110的16S rDNA基因序列同源性最高,一致性均为99.6%;构建系统发育树显示,菌株RBWF-1与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种A.salmonicida subsp.salmonicida、杀日本鲑亚种、无色亚种和史氏亚种A.salmonicida subsp.smithia聚为一支;为进一步明确菌株的分类地位,利用Biolog微生物鉴定系统结合传统生理生化试验对菌株RBWF-1各项理化指标进行检测,经对比,与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种吻合度最高,因而判断该分离株为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种;同时,对分离菌株的气溶素、溶血素、封闭带毒素、DNA酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、S层蛋白7个毒力相关基因进行了PCR检测,检测结果均呈阳性;酶活性检测结果显示,菌株RBWF-1胞外产物具有蛋白酶、淀粉酶、脂酶、DNA酶和溶血活性。本研究结果可为中国虹鳟养殖过程中杀鲑气单胞菌的感染特征、分类鉴定和疫苗研制提供必要的数据和参考。

中草药抑制剂对中国对虾致病菌哈维氏弧菌的抑制效果

用抑菌圈法和微量二倍稀释法研究金银花、车前草等16种中草药提取液和纳米锌、纳米银对中国对虾来源病原菌——哈维氏弧菌TCBS–G的抑制效果。结果表明:纳米锌对TCBS–G产生的透明抑菌圈直径达35 mm,地锦的透明抑菌圈直径约25 mm;采用96孔板倍数稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),纳米锌、地锦的最小抑菌浓度均为12.5 mg/mL,纳米银的达6.25 mg/mL;采用MTT比色法检测不同抑制剂对哈氏弧菌生物膜形成的影响,纳米锌、纳米银对TCBS–G生物膜形成具有明显的抑制作用,药液质量浓度大于3.125 mg/mL时具有显著差异(P<0.05);黄芪、地锦药液质量浓度大于12.5 mg/mL时抑制作用显著(P<0.05)。普通药敏试验结果显示,该菌株对头孢他啶、庆大霉素、复方新诺明等药物极其敏感,抑菌圈直径达20 mm以上,对头孢氨苄、四环素等均不敏感。

不同温度下MS-222对硬头鳟幼鱼的麻醉效果

为探究不同温度下MS-222对硬头鳟(Oncorhynchus mykis)幼鱼的麻醉效果,试验中在不同温度条件下(8、12和16℃),使用不同质量浓度的MS-222对硬头鳟进行麻醉,测定对其呼吸频率、复苏时间和入麻时间的影响。研究结果表明,水温8、12和16℃时MS-222麻醉硬头鳟幼鱼的有效质量浓度分别为50～90、50～70和40～70mg/L,长时间浸浴麻醉最佳浓度分别为50、40和40。当低于有效浓度时,幼鱼呼吸频率较对照无显著差异;当达到有效浓度时,呼吸频率存在不同程度下降,且随温度升高,下降速率加快。温度越高,硬头鳟入麻时间越短,达到麻醉4期所需浓度降低,复苏时间越长。实验结果表明:MS-222对硬头鳟具有良好的麻醉作用,有效浓度随水温变化产生差异,其对硬头鳟的呼吸频率、复苏时间和入麻时间与浓度和温度密切相关,应综合考虑MS-222麻醉浓度和水温之间的交互作用,根据使用需求选择适宜的浓度。

益生菌制剂对凡纳滨对虾生长、营养代谢及抗氧化能力的影响

【目的】研究饲料中添加地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长性能、营养代谢及抗氧化能力的影响。【方法】将凡纳滨对虾幼虾随机分成3组,对照组投喂仅用蛋白液包裹的基础饲料,试验组分别投喂含活菌量达108 CFU/g的凝结芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的试验饲料,养殖周期为28 d。于试验第7,14,21和28天取样,测定血清总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO)含量及谷氨酰胺合成酶(GS)、苹果酸脱氢酶(MDH)、脂肪酶(LPS)、已糖激酶(HK)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性和总抗氧化能力(T-AOC);试验结束后测定凡纳滨对虾的生长性能和肌肉营养成分。【结果】(1)与对照组比较,2个试验组凡纳滨对虾的终末体质量显著提高(P<0.05),饲料系数显著降低(P<0.05),肌肉中粗蛋白质、肌糖原含量和呈味氨基酸总量显著提高(P<0.05);凝结芽孢杆菌组血清中TP、TC及TG含量与对照组差异显著(P<0.05),地衣芽孢杆菌组TG含量显著高于对照组(P<0.05)。(2)凝结芽孢杆菌组GS活性在试验第14天显著高于其他2个组(P<0.05);2个试验组HK活性在第21天显著高于对照组(P<0.05);凝结芽孢杆菌组MDH活性在第21天显著高于对照组(P<0.05);2个试验组LPS活性在第7天显著高于对照组(P<0.05),2个试验组之间无显著差异(P>0.05)。(3)凝结芽孢杆菌组T-AOC活性在试验第7天最高(55.21 U/mL),地衣芽孢杆菌组在第14天最高(45.08 U/mL),均显著高于对照组(P<0.05);2个试验组CAT活性在第21天最高,SOD活性在第7天最高,均显著高于对照组(P<0.05),而2个试验组之间无显著差异(P>0.05);凝结芽孢杆菌组GSH-PX活性在第28天最高(957.30 U/mL),地衣芽孢杆菌组在第21天最高(932.25 U/mL),均显著高于对照组(P<0.05);凝结芽孢杆菌组NOS活性和NO含量均在第14天最高,显著高于对照组(P<0.05);地衣芽孢杆菌组NO含量在第28天最高,显著高于对照组(P<0.05)。【结论】地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌均可作为饲料添加剂使用,提高凡纳滨对虾的生长性能,增强其营养物质代谢水平,提高其抗氧化能力。

纳米锌对杀鲑气单胞菌的灭活效果及其细胞毒性

为探究纳米锌在制备水产动物致病菌灭活疫苗应用中的可行性。本研究利用不同浓度的纳米锌水溶液在不同温度条件下对杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)进行不同时长的孵育处理。研究显示,纳米锌对杀鲑气单胞菌的灭活效果与浓度、温度及孵育时间均呈现正相关性,在高浓度与高温条件下灭活菌体所需的时间短。检测了不同灭活条件下纳米锌对杀鲑气单胞菌菌体蛋白及免疫原性的影响,SDS-PAGE结果显示不同条件下纳米锌灭活的杀鲑气单胞菌菌体蛋白组成及丰度与正常菌体没有明显差异;而扫描电镜结果显示,在37℃条件下纳米锌会造成菌体结构破损并出现细菌碎片;ELISA检测结果4℃条件下各纳米锌浓度灭活组菌体抗原性均未受到显著性影响,然而在28℃条件下,200和400mg/L纳米锌灭活组菌体抗原性显著低于对照组,而在37℃条件下除50mg/L浓度组外,其它3个浓度灭活组抗原性均显著低于对照组。比较研究了100mg/L-28℃灭活组与甲醛灭活的全菌疫苗的免疫保护效果,结果显示纳米锌与甲醛灭活菌体免疫组鱼体的免疫保护率分别为86.2%与79.3%。利用鲤上皮瘤细胞对纳米锌的细胞毒性进行了检测,结果显示400mg/L浓度以下纳米锌对细胞的贴壁、生长及代谢均无明显影响。本研究结果说明纳米锌对杀鲑气单胞菌具有明显的灭活效果,且灭活的全菌疫苗表现出良好的免疫保护效果,而其对菌体的抑杀能力及损伤程度与温度和时间密切相关,本研究为纳米锌在水产全菌灭活疫苗的制备提供了基础。

益生菌制剂和抗生素对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异性免疫及肠道微生物的影响比较

本研究旨在比较分析益生菌制剂和抗生素对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异性免疫及肠道微生物的影响。以初始平均体质量为(2.2±0.1) g的凡纳滨对虾为试验材料,随机分成3组,每组3个重复,每个重复100尾虾。对照组(C0)投喂基础饲料,试验组分别投喂添加0.5%益生菌制剂(E1)和抗生素土霉素(E2)的试验饲料,通过生物化学、高通量测序方法检测对虾血清非特异性免疫功能及肠道微生物菌群结构变化。试验周期为14天。结果显示,益生菌制剂E1组对虾血清酸性磷酸酶ACP、过氧化物酶POD活性显著提高(P<0.05),谷丙转氨酶GPT、谷草转氨酶GOT活性降低,而抗生素E2组效果反之;E2组土霉素对血清总抗氧化能力T-AOC活性产生显著增强作用,但效果短暂,随时间延长,活性发生骤降。E1组益生菌制剂显著增强对虾肠道淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性(P<0.05),而E2组土霉素降低3种消化酶活性。E1组益生菌制剂可优化肠道微生物菌群结构,变形菌门Proteobacteria、放线菌门Actinobacteria、疣微菌门Verrucomicrobia和Candidatus Saccharibacteria丰度增加,E2组放线菌门Actinobacteria、Candidatus Saccharibacteria和拟杆菌门Bacteroidetes丰度稍有增加。0.5%益生菌制剂对凡纳滨对虾非特异性免疫功能及肠道微生物均产生了积极效应,且效果优于抗生素土霉素,适合作为免疫增强剂或饲料添加剂在凡纳滨对虾养殖中应用。

亚硝态氮慢性胁迫对斑节对虾(非洲群体)行为、消化酶活力和非特异性免疫的影响

为探讨亚硝态氮(NO_(2)-N)慢性胁迫对斑节对虾(Penaeus monodon)(非洲群体,以下称金刚虾)生理特性的影响,本实验以体质量为(6.06±0.76)g的金刚虾为研究对象,测定不同NO_(2)-N浓度下金刚虾的行为、非特异性免疫以及消化功能。研究显示,NO_(2)-N浓度≤6 mg/L时,金刚虾的活力、摄食不受影响;NO_(2)-N浓度≥8 mg/L时,金刚虾摄食缓慢、游动异常、胃肠道模糊;NO_(2)-N浓度为14 mg/L时,金刚虾开始死亡。金刚虾肝胰腺中脂肪酶(Lipase)、胰蛋白酶(Trypsin)活性在NO_(2)-N浓度为6 mg/L时达到最大值,之后开始下降,当NO_(2)-N浓度升至14 mg/L时活性最低,与对照组差异显著。NO_(2)-N浓度由0上升至14 mg/L,血淋巴谷胱甘肽(GSH)含量、酸性磷酸酶(ACP)活性呈“先升高后下降”的趋势,谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)的活性则呈“先升高后下降再升高”的趋势,NO_(2)-N浓度为6 mg/L时,GHS、ACP活性达到最大值;NO_(2)-N浓度为14 mg/L时,GOT、GPT活性达到最大值,与对照组差异显著。综合以上结果,工厂化养殖金刚虾时,建议将水体中NO_(2)-N浓度控制在6 mg/L以下。

一种复方中草药免疫增强剂对牙鲆免疫力及抗病力的影响

为研究中草药复方制剂对牙鲆Paralichthys olivaceus免疫力及抗病力的影响,实验基于中草药药物功效与配伍原则,研制出一种复方中草药免疫增强剂(YLK),配方包含黄芪、茯苓、党参、蒲公英、鱼腥草、白花蛇舌草、金银花、玉竹、甘草、五味子等;将复方中草药分别以1%(W∶W)和3%(W∶W)的添加量拌入基础配合饲料中,连续投喂牙鲆30d,然后用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda攻毒,分别于攻毒后24h和72h取鱼血清进行免疫相关酶活性测定,同时在攻毒后6,12,24,48,72h取鱼脾脏进行免疫相关基因表达水平的检测,并观察记录鱼体的累计死亡情况。结果表明,在迟钝爱德华氏菌感染后24h和72h,3%中草药添加组的牙鲆血清中碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)、酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)以及溶菌酶(Lysozyme,LSZ)活性水平均显著高于仅投喂基础饲料的对照组;1%中草药添加组除ALP活性以外,其他3种酶活水平也显著高于对照组(P<0.05),2组不同中草药添加组鱼体血清酶活整体上差异不显著性;荧光定量PCR检测结果显示,各投喂组牙鲆脾脏组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、TCRα受体及C型溶菌酶基因表达量均出现不同程度的上调,而2个中草药投喂组牙鲆在感染后多个时间点的基因表达水平均高于单独投喂饲料组的牙鲆(P<0.05);添加3%中草药和1%中草药对牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染的相对保护率分别为34.2%和26.3%。研制的复方中草药制剂具有明显的免疫增强效果,能显著提高牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染能力,研究结果将为水产养殖中草药防病技术研究提供重要参考。

中国对虾来源哈维氏弧菌鉴定及生物学分析

从患病中国对虾中分离到优势菌株,对其进行生理生化特性及分子生物学分析。TCBS培养基上菌落呈现绿色(以下称为TCBS-G),通过形态学、生理生化分析,菌株TCBS-G为革兰氏阴性菌,短杆状,两端钝圆,有鞭毛;Biolog GIII分析表明,该菌株生长代谢利用情况与弧菌吻合,与哈维氏弧菌特征相似。基于16S rRNA、gyrB、HSP60基因序列分析同源性,16S rRNA未将TCBS-G有效鉴定,gyrB、HSP60基因序列与哈维氏弧菌相聚类,聚合置信度可达99%。综合生物学及分子特征,判定TCBS-G为弧菌属的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。底物平板试验结果显示TCBS-G菌株胞外产物具有淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和DNA酶活性;且能够扩增出哈氏弧菌溶血素基因的保守特异性片段。

盐度胁迫对非洲斑节对虾生理特征的影响

为探讨不同盐度梯度下非洲斑节对虾(Penaeus monodon)的盐度耐受性,本研究测定了盐度胁迫下对虾生长、渗透、抗氧化及消化指标的变化。实验设置4个盐度梯度(20,30,40,50),以30盐度组作为对照,进行为期35 d的喂养实验。实验结束时计算增重率(Weight Gain Rate,WGR)、特定生长率(Specific Growth Rate,SGR)和成活率(Survival Rate,SR),测定对虾鳃丝总ATPase、Na^(+)-K^(+)-ATPase活性,血清总抗氧化能力T-AOC、抗氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性及丙二醛MDA含量,以及肝胰腺胃蛋白酶Pepsin、脂肪酶Lipase、淀粉酶Amyase活性。结果显示,盐度胁迫对非洲斑节对虾的生长有抑制作用,存活率随盐度升高而降低;与对照组比较,WGR和SGR在50盐度组最低,呈现显著差异(P<0.05)。盐度胁迫发生时,对虾总ATPase活性升高,随着时间延长,表现出适应状态,实验第35天,各盐度组无显著差异(P>0.05);而Na^(+)-K^(+)-ATPase活性在40,50盐度组显著高于对照组(P<0.05)。实验期间SOD变化程度较小,与对照组比较差异不显著(P>0.05);CAT、T-AOC、GSH-Px活性及MDA含量差异显著(P<0.05),盐度胁迫刺激了非洲斑节对虾抗氧化应激能力。高盐度降低非洲斑节对虾Pepsin、Lipase活性,40,50盐度组尤为显著(P<0.05);实验第3天,20盐度组显著提升了对虾Amyase活性(P<0.05),降低了Pepsin、Lipase活性(P<0.05)。研究表明,盐度胁迫不利于非洲斑节对虾的生长,但可激活对虾抗氧化能力,使其酶活力得以调节来适应环境的改变,并不同程度地降低对虾的消化能力,从而抑制生长。

不同养殖密度下凡纳滨对虾工厂化养殖排放水研究

为研究不同养殖密度下微生物调控凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)工厂化养殖排放水的水质状况,设置了3种放养密度(200、400、600尾/m^2),共9口养殖池,跟踪监测了对虾从苗期到养成期不同生长阶段排放水中氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、硫化物、总磷、COD、重金属等水质指标。结果表明,在3种放苗密度下,当对虾体长<8 cm时,排放水的水质基本能达到海水养殖水排放要求的二级标准;当对虾体长≥9 cm时,排放水中无机氮的含量均不符合一级、二级标准。在采用微生物调控的凡纳滨对虾工厂化养殖条件下,放苗密度不超过600尾/m^2时,对虾生长前期养殖水质基本能达到排放要求,生长后期则需要采取一定的养殖废水处理措施,才能达到排放要求。

鲈鱼常见病害初诊检索表构建

为便于鲈鱼病害的早期发现诊断,通过对80余份文献专著中鲈鱼的主要病害进行搜集整理,得到鲈鱼不同生长阶段典型的21种病害特征,建立了一份简洁明了、方便实用的鲈鱼养殖病害初诊速查检索表.检索表采用平行式检索方式,将鲈鱼病害的典型症状互相对应编号,依次检索,实用性较强,为养殖鲈鱼病害的快速诊断提供了新方法.