蜥蜴源黏质沙雷氏菌的分离鉴定与药敏试验

为弄清西北农林科技大学博览园1只观赏蜥蜴突发全身皮肤化脓溃烂、尾巴坏死脱落的病原,采集患病蜥蜴的坏死病灶及血液病料进行细菌分离纯化、生理生化试验、动物致病性试验、16S rRNA基因测序鉴定。结果显示,从病料中分离并纯化出1株菌株,该分离菌株的生理生化特性与黏质沙雷氏菌相符,且该菌对实验小鼠有致病性,其16S rRNA基因序列与NCBI中黏质沙雷氏菌的参考序列同源性为98%。结果表明,所分离到的菌株为黏质沙雷氏菌。药敏试验结果显示,分离菌株对诺氟沙星、丁胺卡那、头孢曲松、氧氟沙星、头孢噻肟等5种抗菌药物高度敏感,对复方新诺明中度敏感,对环丙沙星、头孢噻吩、庆大霉素、头孢氨苄、苯唑西林、多黏菌素B、林可霉素、四环素、氨苄西林等9种抗菌药物耐药。研究结果为筛选有效治疗药物提供了参考依据。

猪细小病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的PPV VP2基因标准品;特异性试验结果显示,该方法检测猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均低于2%,重复性良好。用该方法检测102份临床样本,检出阳性样本16份,阳性检出率为15.69%,将检测出的阳性样本进行PCR扩增并测序,证实检测样品中确实存在PPV。该方法敏感性高、特异性强,适用于PPV的定量检测及猪细小病毒病的流行病学调查。

石炭系浅层低压砂岩油藏压裂方式优选

新疆油田J230区块石炭系油藏储层中部深度620 m,地层压力8.6 MPa,平均孔隙度7.26%,渗透率分布在0.01~96.1 mD,平均渗透率1.14 mD,属典型浅层低压砂岩储层。近几年,该区进行了水平井多段压裂和体积压裂开发试验,提高了油井初期产量。但是,体积压裂投资规模大,风险高,迫切需要评价不同压裂方式下的油井长期生产特征,为经济可行性评价提供参考。选取了一个典型的裂缝单元,运用数值模拟方法,开展相同支撑剂用量下常规多段压裂与体积压裂下的油井生产规律研究,预测了20年油井累计产量与采出程度。数值模拟研究结果表明:一定支撑剂用量下,不同渗透率储层对应最优压裂方式。当储层渗透率低于1 mD时,体积压裂效果好。当储层渗透率高于1 mD时,普通多段压裂效果好。在相同的支撑剂用量下,体积压裂相对于普通多段压裂具有更高的初产优势,但随着生产的进行,体积压裂的优势逐渐减弱。对于体积压裂,储层的改造程度和改造面积是决定油井长期生产的主控因素,不同渗透率储层存在最优的裂缝簇数。针对新疆油田J230区块石炭系油藏储层物性特征,建议以常规多段压裂为主,在极低渗透率区域辅以体积压裂。研究结果对于西部石炭系浅层低压油藏压裂方式优选有重要的指导意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的一种特异、灵敏、量化且耗时短的检测方法,通过设计1对PRRSV ORF7基因的引物,建立Eva Green染料的实时荧光定量PCR(real-time PCR)的检测方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验,并检测PRRSV疑似感染的临床病料。结果显示,所建立的real-time PCR检测方法标准曲线的线性相关系数R2=0.999,具有良好的线性关系;与传染性胃肠炎病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,特异性强;与常规RT-PCR检测方法相比,灵敏度提高100倍;重复试验表明变异系数系数在1%以下,重复性良好。对27份临床样品进行检测,结果比常规PCR多检出3份阳性。说明建立的real-time PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面均相比良好,可用于临床PRRSV的检测。

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种特异、灵敏、量化、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,设计1对PEDV N基因的特异性引物,建立Eva Green染料的实时荧光定量RT-PCR的检测方法,并对疑似PEDV感染的临床样品进行检测。结果显示,所建立的实时荧光定量RT-PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数R2=0.999;不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发生交叉反应,具有较强的特异性;灵敏度比常规RT-PCR方法高100倍;重复性试验的变异系数均小于5%,重复性良好。对43份临床样品进行检测,结果比普通PCR多检出2份阳性。结果表明,建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法在特异性、灵敏度和重复性方面都很好,可用于临床PEDV检测。

陕西省奶牛乳房炎乳中凝固酶阴性葡萄球菌的分离及耐药性分析

为了解陕西省部分地区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci,CNS)耐药性及耐药基因携带情况,采集陕西地区16个奶牛场88份临床型乳房炎奶样,分离得到29株CNS。采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测并计算分离株表型耐药率与所携带相关耐药基因的阳性率,并比较两者的相符率。结果显示,分离的29株CNS对林可霉素表现出完全耐药,对青霉素、克拉霉素、磺胺异噁唑等7种药物的耐药率在65.5%以上,对诺氟沙星、环丙沙星、多西环素等12种药物的耐药率为6.9%~55.2%。分离菌株还表现了较强的多重耐药性,其中93.1%的CNS分离菌株能耐5种以上的抗生素;分离的29株CNS耐药基因dfrG、Blaz、InuA、mecA阳性率为27.6%~55.2%,耐药基因msrB、ermC的阳性率小于20.7%,耐药表型与耐药基因型相符率为10.7%~85.7%。说明从陕西地区分离的CNS表现出不同程度的耐药性,且多为多重耐药,耐药基因与耐药表型的相符率比较低。研究结果为引起奶牛乳房炎的CNS防控提供了依据。

小反刍兽疫病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种特异、灵敏、量化且耗时短的小反刍兽疫病毒(PPRV)检测方法,通过设计一对PPRV N基因的引物,建立检测PPRV的Eva Green实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)的检测方法,对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行分析,并用建立的方法对临床疑似PPRV样品进行检测。结果显示,所建立的检测PPRV RT-qPCR方法标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.999);与羊口疮病毒(ORFV)、山羊痘病毒(GTPV)、羊流产嗜性衣原体(Goat Chlamydophila abortus)无交叉反应,特异性强;相比常规RTPCR检测方法灵敏度高出100倍;重复试验变异系数系数在1%以下,重复性良好。对16份临床样品提取的RNA检测结果显示,该方法与常规RT-PCR检测结果一致。建立的RT-qPCR检测方法可用于临床PPRV的检测。

猪圆环病毒3型陕西株Cap基因的克隆、序列分析及原核表达

为了克隆猪圆环病毒3型Cap基因并进行序列分析和原核表达,参考GenBank上已发表的PCV3(KY418606.1)Cap基因序列,合成1对上、下游引物,PCR扩增Cap基因,进行序列分析和原核表达。结果显示,成功克隆到642 bp的Cap基因,核苷酸序列分析显示,PCV3 Cap基因与国内分离株核苷酸同源性最高为95.97%,氨基酸分析显示Cap蛋白不含信号肽和跨膜区。经IPTG诱导后获得了分子质量约35 ku的Cap蛋白,该蛋白能与PCV3阳性血清结合,具备良好的抗原性。成功克隆并原核表达PCV3陕西株Cap基因,为进一步建立PCV3的快速检测方法和研制PCV3亚单位疫苗奠定了基础。

奶牛乳房炎4种常见病原菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立同时检测引起奶牛乳房炎的主要4种致病菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和肺炎克雷伯氏菌)的多重PCR检测方法,根据参考菌株合成了4种细菌的特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,多重PCR试验特异性地检测了这4种病原菌;敏感性试验显示,对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和肺炎克雷伯氏菌基因组DNA的最低检测量依次为17.11、19.16、109.6、20.89 pg/μL;临床样品检测显示,该方法对送检的35份临床奶样进行检测,阳性检出率为51.4%,比细菌分离检出率高。建立的多重PCR方法对乳房炎病原检测和临床治疗用药具有指导意义。

猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种特异、灵敏、快速及量化的猪瘟病毒(CSFV)检测方法,设计扩增CSFV E2基因的特异性引物,建立Eva Green染料的RT-qPCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性测试,并检测疑似猪瘟病毒感染的临床样品。结果显示,所建立的RT-qPCR检测方法标准曲线的线性相关系数R2=1.000,具有良好的线性关系;检测猪流行性腹泻腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无交叉反应,特异性强;相比常规RT-PCR检测方法,灵敏度高出100倍;重复试验的变异系数系数小于1.5%,重复性良好。对31份临床样品进行检测,结果比普通PCR多检出4份阳性样品。建立的RT-qPCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面均表现良好,可用于临床猪瘟病毒的检测。

基于MOOC的《水产微生物学》翻转课堂教学研究

《水产微生物学》是水产养殖专业一门关键的专业课。针对传统课堂的授课现状,笔者根据MOOC与翻转课堂自身的特点,探索将二者结合的教学模式改革,学生充分利用共享平台和网络资源进行自主学习,并与老师互动交流,课堂时间主要进行针对性的重难点解析和答疑,进一步提高学生学习的自觉能动性和教学质量,为培养创新型人才提供支持。

伪结核棒状杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。结果显示,最佳抗原包被量为OD600 nm=0.084的菌悬液100μL,10 g/L BSA封闭时间2 h,一抗血清稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶5000,血清阴阳性的OD450 nm值临界值为0.352。该方法仅对Cp阳性血清呈特异性反应,与6种常见病原阳性血清均无交叉反应,特异性较强。批内试验和批间试验的变异系数均小于9.5%,重复性较好。敏感性试验结果表明,当伪结核标准阳性血清进行1∶1280稀释时检测仍为阳性,敏感性较强。用该方法对10份经细菌分离鉴定为阳性的血清进行Cp抗体检测,结果均为阳性。用建立的方法对临床随机采集的423份血清进行检测,结果显示阳性率为35%。研究建立的抗体间接ELISA方法为Cp抗体检测及血清学调查奠定了基础。

奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验

为了对陕西省某养殖场奶牛出现乳房炎的病例进行确诊,无菌采集患病奶牛乳汁进行细菌分离、培养特性观察、生化试验、16 S rRNA基因测序、小鼠致病性试验及药敏试验。结果表明,分离到2种细菌,其培养特性和生化试验结果与肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌相吻合;16 S rRNA基因测序结果与肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌的同源性为100%;小鼠致病性试验表明2种菌株的致病性较强,感染病菌小鼠均在3 d内死亡;药敏试验表明肺炎克雷伯菌对大观霉素高度敏感,对四环素耐药;铜绿假单胞菌对诺氟沙星高度敏感,对氨苄西林耐药。该研究结果为奶牛乳房炎的治疗提供了参考。

水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展

水通道蛋白(AQP)是细胞上存在的一种膜孔道蛋白。动物、植物、微生物细胞上均有水通道蛋白的表达,其主要功能是参与机体的水与电解质代谢。近年来,针对水通道蛋白在机体所发挥的功能方面研究较多,发现水通道蛋白不仅参与机体生理方面的调控,而且在一些疾病的发生发展过程中也发挥重要的作用。综述概括了水通道蛋白在脑、肺、肾脏、肠道等组织器官的定位;重点阐述了水通道蛋白在动物脑部疾病、肺部疾病、肾脏疾病、肠道疾病发展过程中所发生的变化。旨在为患病动物出现水与电解质代谢紊乱症状时,对水通道蛋白发生的变化研究提供参考。

规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控

2020年11月10日,陕西省某4800头规模化母猪场引种200头后备母猪,2020年11月24日后备猪群出现咳嗽、呼吸困难、体温升高、采食量下降及后备母猪急性死亡等临床症状。2020年12月23日该猪场妊娠母猪群出现流产现象,分娩母猪产木乃伊胎、死胎、白胎及弱仔的比例明显升高。为解决该场的异常情况,兽医实验室通过检测诊断,确诊引起母猪发生繁殖障碍的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的类NADC30毒株。针对该检测结果制定和实施疫苗免疫、药物保健方案及其他生产防控措施。对该猪场的生产成绩进行为期4个月的追踪,通过持续检测分析来评估综合防控效果。结果表明采取疫苗紧急免疫和药物保健等综合防控措施后,该猪场母猪繁殖障碍情况逐渐缓解,猪群趋于稳定,生产成绩得以恢复。

陕西省部分猪场5种疫病抗体及病原的检测

为调查2019年陕西省规模化猪场中口蹄疫(FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病(PR)的免疫状况及病原感染情况,采用间接ELISA对送检的20233份血清样品进行抗体检测,采用PCR/RT-PCR方法对送检的1633份病料样品进行病原检测。结果表明,检测口蹄疫抗体的5154份血清样品中(4089份免疫血清,1065份未免疫血清),免疫抗体阳性率为76.69%,感染率为42.25%;检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的6259份血清样品中(5516份免疫血清,743份未免疫血清),免疫抗体阳性率为85.06%,感染率为28.26%;检测猪瘟抗体的5165份血清样品中(4881份免疫血清,284份未免疫血清),免疫抗体阳性率为88.10%,感染率为47.89%;检测伪狂犬病病毒gB抗体的3142份血清样品中(2810份免疫血清,332份未免疫血清),免疫抗体阳性率为84.23%,感染率为21.69%;检测猪圆环病毒2型抗体的513份血清样品中(420份免疫血清,93份未免疫血清),免疫抗体阳性率为95%,感染率为88.17%。检测猪瘟病毒的328份病料中,阳性率为9.45%;检测猪圆环病毒2型的218份病料中,阳性率为14.23%;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的654份病料中,阳性率为10.86%;检测伪狂犬病病毒的144份病料中,阳性率为2.78%;检测口蹄疫病毒的226份病料中,阳性率为0.44%。通过对5种常见病原和抗体的检测,为陕西省猪场常见疫病的防控提供了基础资料。

极寒地区LNG模块三级结构设计与应用

本文以某极地项目为例,介绍了极寒地区LNG模块三级结构设计与应用,对比分析了该极地项目三级结构的设计特点,并对三级结构设计流程、考虑因素进行了详细分析。以某通道平台为例,使用SACS软件,依据俄罗斯标准规范,采用基于可靠度的极限状态设计法,对其在不同工况下的强度校核方法和结果进行了介绍及分析,同时对类似项目提出设计及施工阶段的建议。

基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测。结果显示,重组N蛋白大小为50 ku,经Western blot鉴定重组N蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为1.5μg/mL,血清以1∶50稀释,酶标二抗以1∶10000稀释,临界值为0.256。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;当BCoV标准阳性血清1∶2560稀释时检测结果仍为阳性,灵敏性较好;批内和批间变异系数分别为1.83%~5.80%和2.34%~7.45%。对陕西省部分牛场收集的296份牛血清进行检测,BCoV抗体阳性率为18.24%。建立了一种快速检测BCoV抗体的间接ELISA方法,为BCoV的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。

山羊支原体山羊肺炎亚种0297基因的序列分析及原核表达

山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原为山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),该病是一种呼吸道传染病,给山羊养殖业带来了严重损失。为了能对该病进行更好的诊断和预防,从临床发生CCPP的山羊肺脏组织中提取Mccp 0297基因,并且在测定其序列的基础上,将该序列与GenBank中已收录的其他9株Mccp的0297基因序列进行比对分析,并对该序列所编码的蛋白进行结构预测及原核表达。结果表明,PCR扩增到全长为717 bp的Mccp 0297基因,其核苷酸序列与其他9株Mccp的0297基因序列的同源性在99%以上;该序列编码的P0297蛋白具有很强的亲水性并可能存在多处的抗原表位分布,原核表达大小约为43 ku的P0297蛋白。

陕西某猪场猪德尔塔冠状病毒N基因的序列分析与原核表达

为克隆猪德尔塔冠状病毒N基因并进行序列分析及原核表达,参考GenBank上登录的PDCoV(HKU15-44)N基因序列,合成1对(PDCoV)游引物,PCR扩增N基因,并进行序列分析和原核表达。结果表明,成功克隆了1026 bp的N基因,核苷酸序列分析表明,PDCoV N基因与国内分离株核苷酸同源性最高为98.76%,氨基酸分析表明N蛋白不含信号肽和跨膜区。经IPTG诱导后成功表达了分子质量约47 ku的N蛋白,该蛋白能与PDCoV阳性血清结合,具备良好的抗原性。研究结果为进一步建立PDCoV快速检测方法和研究PDCoV亚单位疫苗奠定了基础。