家族性主动脉瘤／夹层动脉瘤合并动脉导管未闭的遗传机制

目的在16p13-12．1位点20 cm的区域内明确致病基因,了解基因型和临床表型的关系。方法采用双向DNA直接测序法筛选候选基因;运用免疫组化和蛋白免疫印迹法等了解突变基因的表达情况。运用质粒重组及体外表达方法获得野生型和突变型蛋白,使用免疫共沉淀法了解这两者的结合程度。结果在两个家系中发现编码平滑肌肌球蛋白的MYH11基因突变,所有TAAD和PDA患者均为突变基因携带者。在法国家系中发现两个突变。前者为剪切点供体杂合子突变,导致编码71个氨基酸的第32外显子完全缺失:第2个突变为第37外显子上的1个点突变,导致精氨酸变为谷氨酸。在美国家系中发现1个杂合子突变,为第28外显子上编码24个氨基酸的72个碱基缺失。在法国患者的病变动脉标本上运用蛋白免疫印迹法,发现野生型和突变型肌球蛋白蛋白共存,但有异常免疫组化表现。体外实验显示重组野生型和突变型蛋白不能正常结合。结论MYH11基因突变导致家族性TAAD合并PDA,野生型和突变型平滑肌肌球蛋白不能正常结合,推论杂合子突变导致“Dominant-negative”作用。

WNK家族基因在小鼠肾脏表达的特性分析

目的检测WNK1和WNK4基因在小鼠肾脏组织中的表达位点。方法RT-PCR方法扩增WNK1和WNK4基因片段作为探针,在小鼠多组织膜上进行Northern印迹杂交。将上述片段克隆入pGEM-T载体,测序证实后,体外转录RNA探针并在小鼠肾脏石蜡组织切片上进行原位杂交。结果WNK1基因广泛表达在小鼠各组织中,在肾脏有9.5kb强杂交信号。WNK4基因主要表达在肾脏组织中,有4.4kb杂交信号。原位杂交显示WNK1基因仅表达在肾脏远曲小管中,而WNK4除表达在肾脏远曲小管外,还表达在髓质集合管上。结论WNK1和WNK4基因均在肾脏中有表达,WNK4基因在肾脏中表达比WNK1基因更广泛。