ICU护士静脉用药错误知信行问卷的汉化及信效度检验

目的汉化ICU护士静脉用药错误知信行问卷(Knowledge,Attitude,and Behavior in Medication Errors Questionnaire,KAB-MEQ)并检验信效度。方法获取原作者授权,根据Brislin经典翻译模型对原问卷进行顺译、回译、原作者审查、跨文化调适和预调查,形成中文版KAB-MEQ,采用便利抽样法对328名ICU护士进行问卷调查,评价问卷的信效度。结果中文版KAB-MEQ包含3个维度共20个条目,累计方差贡献率为73.689%。修正后验证性因子分析结果显示:χ^(2)/df=1.702、RMSEA=0.057、IFI=0.972、TLI=0.966、CFI=0.972,模型拟合良好。问卷条目水平的内容效度为0.889~1.000,问卷水平的内容效度为0.978。问卷的Cronbach′sα系数为0.925,折半信度为0.818,重测信度为0.862。结论中文版KAB-MEQ具有良好的信度和效度,可作为ICU护士静脉用药错误知信行评估工具。

血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化

【目的】了解鸡肝癌细胞(LMH)感染血清4型禽腺病毒(FAdV-4)后干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)的表达量变化,为研究FAdV-4与ISGs的相互作用提供参考依据。【方法】试验将FAdV-4感染LMH细胞,观察不同时间点细胞病变,并收集感染0、12、24、36、48、60、72、84和96 h的细胞样品,通过实时荧光定量PCR技术检测感染病毒后不同时间点IFN-α和IFN-β及ISGs基因在转录水平上表达量的动态变化规律。【结果】LMH细胞感染FAdV-448 h时出现典型的细胞病变;在感染12 h后,FAdV-4快速增殖,60 h时达到峰值;感染病毒后各时间点,与对照组相比,IFN-α基因转录水平表达量均显著下调(P<0.05);与对照组相比,在感染后12和24 h,IFN-β基因表达量显著下调(P<0.05),在36 h时迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降且趋于稳定,但仍显著高于对照组(P<0.05);ISG 12、IFIT 5及DDIT 4基因在感染前期变化不大,在感染后36 h时迅速上调,在感染后96 h达到峰值(P<0.05);ZFP 313、IFITM 3及Viperin基因在感染前期表达量变化不大,随后在36 h迅速上调表达至峰值(P<0.05),在48 h时仍维持在较高水平,之后时间点的表达量有所下降,但仍显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,CD 47、OAS和PKR基因均呈现下调表达。【结论】在FAdV-4感染LMH细胞后,IFN及多种ISGs在转录水平呈现规律性变化,与病毒在LMH细胞中复制存在一定的联系,表明这些天然免疫因子可能在抗FAdV-4反应中发挥着重要作用。

鸡圆圈病毒3型可视化LAMP检测方法的建立及应用

建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法。参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的扩增温度、引物浓度和反应时间,通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测,验证鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的特异性、敏感性、稳定性和可靠性。结果显示,鸡GyV3 LAMP检测方法的反应体系:总体积为20.0μL,包括DNA模板1.0μL,2×Master Mix 10.0μL,内引物GyV3-FIP和GyV3-BIP混合液(工作浓度16.0μmol/L)2.0μL,外引物GyV3-F3和GyV3-B3混合液(工作浓度2.0μmol/L)2.0μL,环引物GyV3-LF和GyV3-LB混合液(工作浓度8.0μmol/L)2.0μL,ddH_(2)O 3μL;鸡GyV3 LAMP检测方法的扩增程序:66℃反应20 min,80℃灭活5 min。鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL,组内和组间变异系数小于5%;与常规PCR方法检测临床样品的结果比较,两者结果符合率达100%。建立的鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,具有特异性好、敏感性高及污染小等优点,且检测结果可通过肉眼观察进行判断,适用于GyV3的临床快速筛查。

H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。

mRNA疫苗制备技术在甲型流感病毒疫苗研究中的应用

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H1N1和H3N2亚型人流感病毒(Influenza virus,IV)均属于甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)。IAV含有多种亚型,毒株变异快,因此IAV疫苗株需要根据当年的优势毒株进行相应的调整,这给疫苗的研制和生产带来巨大挑战。信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)疫苗制备工艺简单、生产时间短且容易规模化生产,在疾病预防方面具有广阔的应用前景。笔者对mRNA疫苗的种类、优化策略和IAV mRNA疫苗的研究现状进行了综述,旨在为IAV mRNA疫苗的研发提供理论参考。

鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立

旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ILTV提供更好的技术支撑。

二重荧光RT-LAMP鉴别检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体

本研究旨在建立一套通过添加荧光探针FD,反应后可使用成像仪直接观测结果的鉴别检测禽呼肠孤病毒(ARV)和鸡滑液囊支原体(MS)的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据ARV和MS的保守基因片段,设计了2套LAMP引物,并各添加1条FD荧光探针,2条FD探针分别标记CY5和6-FAM荧光基团。结果:ARV阳性对照在成像仪下发出红色荧光,MS阳性对照发出绿色荧光,双重模板经过图像融合后为黄色荧光;特异性结果显示,该二重荧光RT-LAMP检测方法仅能扩增ARV和MS两种病原,对其他常见病原如鸡毒支原体(MG)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)等无扩增反应;敏感性结果显示,该二重荧光RT-LAMP检测方法对ARV和MS的最低检测量分别为1.7×10^(2)copies和1.9×10^(2)copies;使用该方法检测40份临床样品,检出率与本实验室前期建立的二重荧光RT-PCR检测结果相同。综上,该二重荧光RT-LAMP检测方法可特异、敏感地鉴别检测ARV和MS,通过添加FD荧光探针和成像仪观测结果,为不同条件的实验室提供了新的检测手段。

循证理念在住院压力性损伤患者中的应用进展

文章总结了循证护理在压力性损伤领域的实践现状、目前的主要证据转化形式和存在的问题,并对循证护理在压力性损伤护理中的应用提出针对性建议,以期促进压力性损伤患者循证护理实践及研究的进一步开展。

成人出院准备度评估工具的应用进展

对国内外成人出院准备度评估工具的内容、信效度、应用情况进行综述,分析不足之处并提出建议,旨在为成人出院准备度评估工具的验证和开发提供参考。

微滴式数字PCR定量检测滑液囊支原体方法的建立及应用

为绝对定量滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),试验根据已发表的MS VlhA基因序列,针对其保守区域分别设计了1对特异引物和1条探针,建立了ddPCR定量检测MS的方法,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:建立的方法最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为54℃;该方法仅检测出MS毒株,不能检测出其他禽源病原,MS重组质粒标准品最低检测限为3.5拷贝/μL,3个连续稀释的MS重组质粒DNA检测的变异系数均小于5%;45份病鸡喉拭子、肺脏及关节囊样品检测结果显示,该方法的MS阳性检出率(11.1%)高于荧光定量PCR(8.9%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测MS特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量MS提供了适合的技术手段。

2020年株洲地区63例新冠肺炎患者出院后的随访研究

目的:观察疫情初期新冠肺炎患者出院后的临床特征、实验室检查及影像学指标变化。方法:选取2020年1—3月我院收治的株洲地区63例新冠肺炎患者,出院后对其进行6个月随访。观察患者的临床症状、血常规、肝肾功能、新冠病毒核酸及抗体、肺功能及肺部CT的变化。结果:部分患者出院6个月仍有胸闷、髋关节痛、腹泻等不适症状。患者出院1个月、出院6个月的白细胞计数及淋巴细胞计数与入院时比较差异有统计学意义(P<0.05);入院时与出院6个月的肝功能指标比较差异有统计学意义(P<0.05);出院1个月与6个月的FVC、FEV1、VC及DLCO比较差异有统计学意义(P<0.05)。42.9%的患者出院6个月IgG仍为阳性,58.7%的患者肺部CT仍未恢复正常。结论:疫情初期新冠肺炎患者出院后多数有影像学上的肺部改变,需要进一步随访以确定这些患者的肺功能何时可以完全恢复。白细胞介导的炎症可能与肺弥散功能恢复有关。

心包积水-肝炎综合征转归的病理学观察

为研究心包积水-肝炎综合征(HHS)的转归,试验采用血清4型禽腺病毒感染4周龄SPF鸡,建立发病率为90%、死亡率为20%的动物模型,观察SPF鸡大体病变并采集肝脏、心脏、脾脏、腺胃、胰腺、肺、肾脏、法氏囊、胸腺、脑、肌肉、小肠、肌胃、食管和气管制作组织病理学切片,检测组织样本中的病毒载量。结果显示:心包积液完全吸收,腺胃出血消失,脾脏轻微肿胀,肝脏仍存在部分黄染和肿胀,组织学检查发现肺脏已完全恢复,肝脏、法氏囊、胸腺、脾脏仍存在组织变性坏死及广泛的炎性细胞浸润;转归期后器官的病毒含量均显著降低(P<0.05)。结果表明HHS的转归为不完全痊愈,对肝脏及免疫器官的功能将造成长期影响。

禽呼肠孤病毒微滴数字PCR检测方法的建立

为了建立禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,试验根据ARV S1133毒株S1基因序列(GenBank登录号为L39002.1)的保守区设计特异性标准品引物BQ-F/BQ-R,检测引物ARV-F/ARV-R及特异性探针(ARV-Probe);以ARV S1133毒株反转录的cDNA为模板,使用引物BQ-F/BQ-R进行PCR扩增,构建标准品质粒pMD18-T-ARV;以标准品质粒pMD18-T-ARV为模板,使用引物ARV-F/ARV-R及特异性探针进行ddPCR试验,优化引物、探针反应浓度及退火温度,并考察ddPCR检测方法的敏感性、特异性及重复性。结果表明:筛选得到引物和探针的最佳反应浓度分别为1000 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为57.1℃。建立的ARV ddPCR最低能检测到的模板浓度为8 copies/μL;同时检测禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽腺病毒(FAdV)及ARV,仅ARV为阳性,其他均为阴性;重复检测试验样品及临床样品3次,变异系数均小于15%。说明ddPCR可用于ARV的临床检测中。

血清4型禽腺病毒水平感染SPF鸡的致病性研究

为研究血清4型禽腺病毒(FAdV-4)通过水平传播途径感染SPF鸡的致病性,将3周龄SPF鸡饲养于FAdV-4不同污染程度的隔离器中以建立自然感染动物模型,每天记录疾病过程并统计发病率和死亡率,剖检并检测器官病毒载量,检测环境和鸡躯体表面的FAdV-4病毒载量。结果显示:FAdV-4水平感染SPF鸡的第1~4天无明显临床症状,第5天起饮食量下降、排黄绿色粪便,第6~9天陆续有鸡死亡,第10天后鸡群逐渐康复至与对照组相同;FAdV-4具有广泛的组织嗜性,在肝脏中含量最高;环境中FAdV-4的污染程度对鸡群的发病率和死亡率均有影响,每25 cm^(2)地网的病毒载量为1.4×10^(5)copies、侧壁为2.3×10^(3)copies、料槽为1.2×10^(4)copies时将达到环境致病阈值,此时每25 cm^(2)鸡体表病毒载量为脚底1.2×10^(5)copies、头部1.1×10^(4)copies、背部3.7×10^(3)copies。本研究加深了对FAdV-4致病性的了解,为兽医工作者和养殖业人员采取有效的预防控制措施提供了参考数据。

禽源PKR基因生物信息学及组织表达分析

为了探讨禽源双链RNA依赖的蛋白质激酶(PKR)基因的分子生物学特征并了解其在鸡组织/器官中的表达分布情况,试验首先利用生物信息学在线工具对编码蛋白进行了理化性质分析及二级结构、三级结构预测;然后将禽源PKR基因插入至真核表达载体pEF1α-Myc中,将重组真核表达载体pEF1α-Myc-PKR转染至DF1细胞中,通过间接免疫荧光鉴定和Western-blot鉴定对表达的蛋白进行验证,通过激光共聚焦扫描显微镜对其进行亚细胞定位;最后采用实时荧光定量PCR检测该基因在SPF鸡不同组织/器官中的分布情况。结果表明:禽源PKR蛋白的分子式为C2744H4332N772O842S23,共编码550个氨基酸,理论分子质量为62346.63 u,等电点(pI)为8.63,不稳定系数为45.54,属于不稳定蛋白;二级结构中,α-螺旋占比为33.27%,延伸链占比为13.64%,β-转角占比为4.73%,无规则卷曲占比为48.36%;三级结构预测模型与人类PKR蛋白的相似性为47.29%。经双酶切验证成功构建了重组真核表达载体pEF1α-Myc-PKR,该载体可在DF1细胞中表达PKR蛋白,蛋白质分子量约为62 ku,具有良好的反应原性,且主要定位于细胞质中。禽源PKR基因在SPF鸡的17个受检组织/器官中均有表达,但在不同组织/器官中的表达量不同;在血液中的表达量最高,然后依次为胰腺、肠、肺脏、脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、腺胃、肌胃、皮肤、气管、脑和肾脏;在关节和肌肉中的表达量极低。说明PKR基因可能参与血液免疫反应,在先天免疫反应中扮演重要角色。

2018年广西活禽市场新城疫病毒分子流行病学分析

为跟踪调查广西活禽市场新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的流行分布和分子演化特征,2018年在广西不同城市10个活禽市场随机采集鸡、鸭、鹅和鸽子泄殖腔和咽喉拭子样品2820份,通过病毒分离与F基因扩增和测序,分析其遗传进化特征。结果显示:从4种宿主中共分离得到54份NDV,包含CLASSⅠ基因1b亚型、CLASSⅡ基因Ⅰ型和CLASSⅡ基因Ⅻ型三种基因型,且发现同一宿主存在不同基因型混合感染的情况。CLASSⅠ基因1b亚型NDV占比最大(50/54,92.5%)。遗传进化分析显示,广西分离株与同基因型参考株处于不同的小分支,存在地域差异。

禽呼肠孤病毒感染DF1细胞后干扰素刺激基因在转录水平表达量的动态变化

为了解干扰素(interferon,IFN)和干扰素刺激基因在禽呼肠孤病毒(ARV)感染DF1细胞后的表达情况,试验将ARV病毒感染DF1细胞,观察细胞病变,收集感染后0、6、12、24、36、48、72、96 h的细胞样品,抽提反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR技术检测干扰素IFN-α和IFN-β及9种禽源常见干扰素刺激基因在感染后不同时间点在转录水平表达量的动态变化规律。结果显示,在ARV感染DF1细胞后,DF1细胞出现典型的细胞病变,感染后12 h病毒开始快速增殖,在36~96 h维持在较高的水平;IFN-α和IFN-β在转录水平的表达量在感染后均表现为显著下调(P<0.05;P<0.01);IFI6、OAS、IFIT5、ISG12在转录水平表达量变化规律相似,均呈现显著上调表达(P<0.05;P<0.01),在感染后96 h达到峰值;其中IFIT5的上调幅度最大,感染后96 h的表达量是0 h的19.62倍(P<0.01);而Mx、IFITM3、PKR、Viperin、ZAP的表达量变化规律相似,均表现为显著下调表达(P<0.05;P<0.01),其中Mx、IFITM3、Viperin的下调幅度较大,PKR和ZAP下调幅度很小。说明在ARV感染DF1细胞后,干扰素及多种干扰素刺激基因在转录水平呈现规律性变化,与病毒在DF1细胞中复制存在一定的联系。结果表明,ARV感染后可以诱导多种干扰素刺激基因的表达,这些干扰素刺激基因在抵御ARV病毒的入侵,抑制ARV的复制、释放及病毒的清除中发挥着重要作用。本研究为今后深入研究ARV的致病机理和宿主的抗病毒免疫应答提供了参考。

贵州省高等职业教育集团化办学模式研究

随着高等职业教育的发展,高等职业教育的集团化办学愈来愈受到更多的地区和高等职业院校的重视,许多地区大力推行高等职业院校与政府、企业合作,创新合作模式,实现了"共建、共享、共赢"的良好效果。贵州省高等职业教育集团化办学也在逐渐兴起,虽然存在着基础条件差、组织形式涣散等诸多问题,但贵州省高等职业教育集团化办学在区域集聚效应强、重视程度高等方面也有明显优势。为进一步提升贵州省高等职业教育集团化办学水平,本文提出引入市场机制优化资源配置、发挥政府职能提升办学效率、构建企业利益保障机制促进政、企、校合作"三赢"等对策建议。

薄层二维纳米颗粒增效泡沫制备及机理分析

泡沫不稳定会缩短油田泡沫驱作业的有效期,为探究泡沫的稳定性,采用Warning-Blender方法评价了4种表面活性剂的起泡性能及稳泡性能,并考察了8种纳米颗粒的稳泡性能。结果表明:表面活性剂AES起泡效果较优;4种球状纳米颗粒未能与AES形成稳定的协同作用;4种二维纳米颗粒对泡沫的稳定作用较强,相同质量分数下粒径越小的纳米颗粒稳泡性能越好。基于二维纳米颗粒S-GO制备了一种长效泡沫体系,起泡体积为488 mL,泡沫析液半衰期为48 min。冷冻刻蚀扫描电镜考察表明,薄层二维纳米颗粒以薄膜形式覆盖在气液界面膜上,增强了气液界面膜的机械强度。

水牛γ干扰素的原核表达及其抗病毒活性

为了获得具有抗病毒活性的水牛γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)蛋白,试验采用PCR方法扩增水牛IFN-γ基因编码区序列,将其与pET-32a载体连接,构建重组表达质粒pET32a-IFN-γ,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG诱导表达目的蛋白,对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE分析、纯化、Western-blot鉴定与质谱分析,以及抗病毒活性检测。结果表明:水牛IFN-γ基因编码区序列PCR扩增产物大小约为520 bp;重组表达质粒pET32a-IFN-γ的双酶切和测序鉴定结果均正确;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白大小约为39 ku,主要以可溶性蛋白形式表达,且能与His标记小鼠源单克隆抗体发生特异性反应,其肽段氨基酸序列与目的蛋白氨基酸序列完全匹配;纯化后的重组蛋白IFN-γ能够有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变,抗病毒活性约为294.1 U/mg。说明水牛IFN-γ蛋白在大肠杆菌中成功表达,并具有一定抗病毒活性。