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枳PtMLP1启动子的克隆和表达分析
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作者 姚利晓 苏娟 +4 位作者 郭兴茹 李凤龙 何永睿 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2023年第24期4906-4915,共10页
【目的】基因工程是柑橘品种改良的一种重要手段。本研究基于枳根消减文库中主要乳胶蛋白基因PtMLP1片段,克隆根特异启动子序列,为研究外源基因在柑橘根组织的特异表达奠定基础。【方法】同源克隆PtMLP1及启动子序列。利用ExPASy、PSIP... 【目的】基因工程是柑橘品种改良的一种重要手段。本研究基于枳根消减文库中主要乳胶蛋白基因PtMLP1片段,克隆根特异启动子序列,为研究外源基因在柑橘根组织的特异表达奠定基础。【方法】同源克隆PtMLP1及启动子序列。利用ExPASy、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线软件对PtMLP1编码蛋白的理化特征、二级结构和三级结构进行生物信息学分析,利用PlantCARE数据库对PtMLP1启动子的顺式作用元件进行预测。实时荧光定量PCR法对PtMLP1在不同树龄枳根和叶中的表达进行分析。构建PtMLP1启动子与GUS标记基因的融合载体,利用根癌农杆菌转化法转化枳上胚轴,GUS染色观察标记基因的表达部位。【结果】枳PtMLP1含2个外显子和1个内含子,开放阅读框长471 bp。PtMLP1蛋白由156个氨基酸组成,分子量17.63 kDa,等电点5.49,含Bet v I功能域。其二级结构含3个α-螺旋和7个β-折叠,三级结构包含一个保守疏水基结合位点和一个富含甘氨酸的回环结构。5′端1666 bp的上游调控序列不仅有TATA-box、CAAT-box等启动子结构的核心元件,还具有多个根组织特异表达元件,以及TGACG-motif、P-box和ABRE等激素应答相关的顺式作用元件。3′端非翻译区具有加尾信号AATAAA。该基因在1月龄苗、6月龄苗、20年生成年枳根中的表达量分别是叶中的46.34、74.82、110.25倍。构建启动子的融合表达载体pBI121-ProPtMLP1::GUS,获得枳转基因植株。PtMLP1启动子驱动GUS在转基因枳幼苗根中特异表达,GUS在3个转基因枳株系的根中表达量分别为叶中表达量的124.78、11.53和7.76倍。【结论】获得柑橘主要乳胶蛋白PtMLP1及启动子序列,该启动子可驱动标记基因在柑橘根组织特异表达。 展开更多
关键词 主要乳胶蛋白 根特异性启动子 GUS
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柑橘溃疡病抗性相关转录因子CitMYB20的功能 被引量:3
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作者 姚利晓 范海芳 +7 位作者 张庆雯 何永睿 许兰珍 雷天刚 彭爱红 李强 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1997-2008,共12页
[目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡... [目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡病抗性品种金弹金柑(Fortunella japonica)和敏感品种枣阳小叶枳(Poncirus trifoliata)的CitMYB20基因序列和启动子序列,利用在线软件PlantCARE对启动子序列进行顺式作用元件预测.以针刺法对金弹金柑和枣阳小叶枳离体叶片接种柑橘溃疡病菌,用外源激素水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利处理金弹金柑和枣阳小叶枳的叶片,在处理的不同时期收集材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CitMYB20的表达水平.分别构建CitMYB20的过表达载体和抑制表达载体,根癌农杆菌法转化枳上胚轴,随机摘取转基因株系成熟叶片进行柑橘溃疡病离体抗性评价.[结果]金弹金柑和枣阳小叶枳中CitMYB20(GenBank登录号分别为MN689609和MN689608)序列高度保守,相似度达到99%;两者的启动子序列(GenBank登录号分别为MN689611和MN689610)虽然都具有脱落酸和茉莉酸甲酯的响应元件,但金弹金柑中还具有水杨酸响应的顺式作用元件,而枣阳小叶枳中缺少该元件.在体外接种柑橘溃疡病菌5 d时,金弹金柑成熟叶片中CitMYB20表达量显著上升,达到对照的2.5倍;而枣阳小叶枳叶片CitMYB20在整个接菌周期内表达量未发生显著变化.外源激素处理时,CitMYB20对水杨酸和茉莉酸甲酯的响应相似,即在金弹金柑中呈现出先升高后降低的趋势,而在枣阳小叶枳中表达量降低,随后又恢复正常.乙烯利处理时,CitMYB20在金弹金柑中表达量略有下降,在枣阳小叶枳中表达量先升后降.遗传转化共获得7株过表达植株和5株抑制表达植株,转基因植株与对照植株相比在形态发育上未见明显差异.CitMYB20过表达植株能够在一定程度上减弱柑橘溃疡病的症状,而抑制CitMYB20表达植株对柑橘溃疡病菌的敏感性增强.[结论]CitMYB20在柑橘溃疡病抗性品种中受柑橘溃疡病菌的诱导表达;CitMYB20是防御柑橘溃疡病菌入侵的一种正向调控转录因子,其抗柑橘溃疡病功能可能需要水杨酸和茉莉酸信号途径的作用;CitMYB20可作为柑橘抗溃疡病分子育种的候选基因. 展开更多
关键词 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 柑橘溃疡病 R2R3-MYB转录因子 过表达 RNA干扰 抗病性
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光热电站并网对新能源电网运行特性的影响研究 被引量:12
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作者 杨国清 薛雨 +1 位作者 姚李孝 时铭序 《电网与清洁能源》 北大核心 2021年第5期134-139,146,共7页
随着大规模新能源并入电网,将引起系统电压支撑能力下降,由此加重了系统的波动性和不确定性,并产生了较高的弃风、弃光率。针对新能源电网的光热电站调度优化问题,提出了以区域电网断面送出极限、新能源机组消纳量及系统电压支撑能力为... 随着大规模新能源并入电网,将引起系统电压支撑能力下降,由此加重了系统的波动性和不确定性,并产生了较高的弃风、弃光率。针对新能源电网的光热电站调度优化问题,提出了以区域电网断面送出极限、新能源机组消纳量及系统电压支撑能力为优化目标,并充分考虑丰大光大运行方式下其他新能源机组的影响因素,基于电力系统综合仿真程序(PSASP)建立了某省实际电网模型,并探讨在光热机组不同出力及接入位置组合下,新能源电网的暂态电压稳定性、断面输送极限和新能源机组消纳量等问题。 展开更多
关键词 光热电站 新能源消纳 PSASP 调度优化
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GST pull-down联合LC-MS/MS筛选柑橘抗溃疡病转录因子CsBZIP40的互作蛋白 被引量:4
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作者 窦万福 祁静静 +7 位作者 胡安华 陈善春 彭爱红 许兰珍 雷天刚 姚利晓 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2243-2255,共13页
【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论... 【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论依据。【方法】采用GST pull-down技术筛选柑橘在溃疡病菌侵染过程中CsBZIP40的互作蛋白。首先,构建带有GST标签的CsBZIP40蛋白融合表达载体,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达、纯化后获得GST-CsBZIP40融合蛋白作为诱饵蛋白;然后,将GST-CsBZIP40融合蛋白固定在谷胱甘肽亲和磁珠上,用固定在亲和磁珠的GST-CsBZIP40诱饵蛋白与接种溃疡病菌或LB培养基后柑橘叶片总蛋白进行孵育,与GST-CsBZIP40诱饵蛋白结合的蛋白复合物洗脱收集后进行SDS-PAGE凝胶电泳验证。将验证成功的样品洗脱液进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测,鉴定出未侵染和侵染状态下CsBZIP40的互作蛋白,将检测到的蛋白利用甜橙基因组数据库进行注释,筛选出在溃疡病菌侵染过程中与CsBZIP40特异结合的蛋白,并进行GO、KEGG和互作网络分析。【结果】过表达CsBZIP40的转基因植株表型正常,与对照植株无明显差异。过表达CsBZIP40的转基因植株溃疡病抗性评价中病斑面积、病情指数均显著小于野生型植株,分别为野生型的45%和54%。以该转基因植株为材料成功提取出侵染溃疡病菌后和未接种溃疡病菌状态下的柑橘叶片总蛋白。成功构建出GST-CsBZIP40诱饵蛋白表达载体,诱导表达纯化出GST-BZIP40诱饵蛋白。利用GST-CsBZIP40诱饵蛋白从侵染溃疡病菌后柑橘总蛋白和未接菌柑橘总蛋白中成功钓取蛋白,并用LC-MS/MS检测。经过比对、注释和筛选,在柑橘溃疡病菌侵染过程中与GST-BZIP40特异结合的蛋白有53个,这些蛋白参与多个分子功能和通路。在这53个蛋白中,有6个蛋白(Cs1g02310、Cs3g05280、Cs3g23950、Cs6g13880、Cs7g12130、orange1.1t04973)可能与植物抗病性密切相关。数据库中已经证明53个蛋白中44个与CsBZIP40有直接或间接的互作关系。【结论】溃疡病菌侵染过程中有53个蛋白与CsBZIP40互作,根据注释6个蛋白与植物抗病性密切相关,这些蛋白可能在提高柑橘生物胁迫抗逆性方面发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 柑橘 柑橘溃疡病 柑橘溃疡病菌 BZIP GST pull-down 互作蛋白
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柑橘溃疡病相关基因CsPGIP的克隆与表达 被引量:4
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作者 胡安华 祁静静 +9 位作者 张庆雯 陈善春 邹修平 许兰珍 彭爱红 雷天刚 姚利晓 龙琴 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期639-650,共12页
【目的】克隆CsPGIP并分析其表达特性,转化柑橘得到超表达转基因株系,并进行柑橘溃疡病抗性评价,为柑橘溃疡病分子育种提供理论依据。【方法】从晚锦橙和四季橘中克隆柑橘CsPGIP,使用MEGA6进行多序列比对并构建系统发育树;采用在线软件B... 【目的】克隆CsPGIP并分析其表达特性,转化柑橘得到超表达转基因株系,并进行柑橘溃疡病抗性评价,为柑橘溃疡病分子育种提供理论依据。【方法】从晚锦橙和四季橘中克隆柑橘CsPGIP,使用MEGA6进行多序列比对并构建系统发育树;采用在线软件BaCelLo和SignalP 4.0进行亚细胞定位和信号肽预测并用GFP瞬时表达确定CsPGIP在细胞内的定位;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)比较接种溃疡病菌前后高感品种和高抗品种中柑橘CsPGIP的表达特性,分析溃疡病菌侵染与CsPGIP表达的相关性;农杆菌介导遗传转化晚锦橙,采用GUS染色初筛、PCR鉴定和qRT-PCR相结合的方法鉴定超表达转基因株系;观察转基因和野生型株系表型变化,分析其株高、叶片表型;离体针刺法对超表达转基因株系和野生型株系进行柑橘溃疡病抗性评价,统计病斑面积和病情指数,分析CsPGIP表达对柑橘抗、感溃疡病的影响。【结果】晚锦橙和四季橘CsPGIP均编码328个氨基酸,与已报道的柑橘中的PGIP同源性高达99.39%,都包含2个PGIP基因典型的LRR结构域(LRR_1和LRR_2);构建系统进化树发现甜橙中的CsPGIP与葡萄中的PGIP(GSVIVT01033370001)遗传距离最近,相似度达到62.97%,推测CsPGIP与葡萄中的PGIP具有类似的抗病效果。亚细胞定位和信号肽预测结果表明CsPGIP属于分泌蛋白,GFP洋葱瞬时表达证明柑橘CsPGIP定位在细胞膜和细胞壁,与预测结果一致。高感品种晚锦橙和高抗品种四季橘接种溃疡病菌后CsPGIP的表达特性不同,在高感品种中表达显著下调,而高抗品种中表达显著上调且维持在较高水平,推测CsPGIP与柑橘溃疡病的抗性相关。构建CsPGIP超表达载体并转化晚锦橙,通过PCR鉴定和qRT-PCR确定其中9个(OE1、OE3、OE4、OE5、OE6、OE9、OE10、OE12和OE14)为CsPGIP超表达阳性株系。通过对转基因株系的表型观察发现OE3、OE14株系表型与野生型株系相比差异明显,植株表现为较矮小,其中OE14出现叶片卷曲、增厚的表型变化。对CsPGIP超表达转基因株系(8个株系)进行离体抗溃疡病评价,结果显示超表达转基因株系可以使柑橘溃疡病病斑面积降至野生型的24.11%—83.88%,其中OE1株系的病斑面积最小;从病情指数来看,除OE3株系外,其余株系的病情指数均比野生型显著下降(为野生型的23.12%—75.49%),其中OE1下降最显著,综上结果可知超表达CsPGIP可以有效抑制柑橘溃疡病菌的生长。【结论】CsPGIP是柑橘响应溃疡病菌侵染的重要基因,可抑制或减轻柑橘溃疡病的发病程度,在柑橘抗溃疡病机理研究方面具有较大的应用价值,也可作为柑橘抗溃疡病分子育种的一个候选基因。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 CsPGIP 超表达 溃疡病抗性
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端羟基液态丁腈橡胶对室温固化环氧树脂热学和电学性能的影响 被引量:8
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作者 王闯 孙青 +2 位作者 贾静 姚李孝 彭宗仁 《中国电机工程学报》 EI CSCD 北大核心 2020年第10期3368-3376,共9页
采用液态橡胶对环氧树脂进行增韧在电力设备和电子封装领域都有一定的应用,以往的研究对增韧后热学和电学性能的变化关注较少。该文采用端羟基液态丁腈橡胶(hydroxyl-terminated liquid nitrile rubber,HTBN)对一种室温环氧树脂进行改性... 采用液态橡胶对环氧树脂进行增韧在电力设备和电子封装领域都有一定的应用,以往的研究对增韧后热学和电学性能的变化关注较少。该文采用端羟基液态丁腈橡胶(hydroxyl-terminated liquid nitrile rubber,HTBN)对一种室温环氧树脂进行改性,并对其热学性能和电学性能进行测量和分析。HTBN加入后形成的两相界面阻碍了声子运动,使得导热率和热扩散系数下降。采用电模量的形式分析HTBN对环氧树脂松弛过程的影响机理,发现HTBN在基体中引入2个松弛过程,使介电损耗在低温和玻璃化转变温度附近区域陡然增大。低温区域主要是由HTBN分子的a转变引起,而玻璃化转变温度附近主要由界面极化引起。高温电导在电模量形式下对应的松弛峰强度随HTBN含量先减小后增大,弛豫时间符合Arrhenius方程,拟合得到的表观活化能随HTBN含量先增大后减小。该文中对环氧树脂增韧体系热学和介电性能的分析有助于此类配方体系的应用和设计。 展开更多
关键词 端羟基液态丁腈橡胶 环氧树脂 两相结构 介电性能
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基于PSOEM和神经网络的光伏电站功率预测 被引量:13
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作者 朱旭坤 姚李孝 杨国清 《电网与清洁能源》 北大核心 2021年第7期115-120,135,共7页
分析光伏发电输出功率预测的影响因素,确定了基于BP神经网络的功率预测模型,针对BP神经网络本身易陷入局部极值、收敛速度慢等问题,采用粒子群优化算法(PSO)和带扩展记忆粒子群优化算法(PSOEM)这2种群智能算法来优化BP神经网络的初始值... 分析光伏发电输出功率预测的影响因素,确定了基于BP神经网络的功率预测模型,针对BP神经网络本身易陷入局部极值、收敛速度慢等问题,采用粒子群优化算法(PSO)和带扩展记忆粒子群优化算法(PSOEM)这2种群智能算法来优化BP神经网络的初始值和阈值,分别建立了基于PSOBP神经网络和基于PSOEM-BP神经网络的光伏电站输出功率预测模型。根据某光伏电站2月1日—6月30日的光伏发电历史数据,利用所提3种模型对光伏发电系统进行了功率预测。误差对比结果表明,基于PSOEM-BP神经网络的功率预测精度明显高于基于PSO-BP神经网络的功率预测精度,故采用PSOEM优化后BP神经网络模型进行光伏功率预测,具有一定的理论和实用价值。 展开更多
关键词 BP神经网络 带扩展记忆的粒子群 粒子群 功率预测
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双馈风力发电机组经串补并网的次同步振荡分析 被引量:11
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作者 严金昊 谢佳锟 +1 位作者 姚李孝 杨国清 《电网与清洁能源》 北大核心 2021年第5期123-127,133,共6页
大规模风电采用串联补偿技术可以提高风电的利用率,但是串联补偿技术会增加风力发电机组的次同步振荡的可能。利用PSCAD建立5.0 MW的双馈风力发电机组经串补并网的模型,利用特征值法对该模型的次同步振荡的模态进行了分析,得出了影响次... 大规模风电采用串联补偿技术可以提高风电的利用率,但是串联补偿技术会增加风力发电机组的次同步振荡的可能。利用PSCAD建立5.0 MW的双馈风力发电机组经串补并网的模型,利用特征值法对该模型的次同步振荡的模态进行了分析,得出了影响次同步振荡的影响因素。最后通过时域分析法进行了验证,得到验证结果和特征值分析结果是一致的。 展开更多
关键词 双馈风力发电机 次同步振荡 特征值 时域仿真。
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基于反射系数傅里叶逆变换的电缆局部缺陷诊断方法研究 被引量:10
9
作者 高向南 姚李孝 杨国清 《电网与清洁能源》 北大核心 2021年第8期76-83,共8页
为了及时发现电缆中存在的潜伏性缺陷,研究一种基于反射系数傅里叶逆变换的电缆局部缺陷诊断方法。首先根据传输线理论建立电缆计算模型,然后采用快速傅里叶逆变换(IFFT)将电缆首端反射系数谱转换到空间域,最后利用缺陷定位诊断函数DF(x... 为了及时发现电缆中存在的潜伏性缺陷,研究一种基于反射系数傅里叶逆变换的电缆局部缺陷诊断方法。首先根据传输线理论建立电缆计算模型,然后采用快速傅里叶逆变换(IFFT)将电缆首端反射系数谱转换到空间域,最后利用缺陷定位诊断函数DF(x)实现电缆局部缺陷的定位和诊断。针对存在典型局部缺陷的10 kV交联聚乙烯(XLPE)电缆仿真分析,当选取适当的测试频率和测试点数,缺陷定位误差最低可达0.01%。定位曲线中缺陷对应的DF(x)幅值受分布参数的影响,与电容变化的程度线性相关;缺陷长度在一定范围内,DF(x)幅值与缺陷长度成正比;随着缺陷到电缆首端距离的增加,DF(x)幅值成指数衰减;此外,电缆上多处缺陷的诊断结果相互独立。结果表明,该方法具有良好的灵敏度和精确性。 展开更多
关键词 电缆缺陷 频域反射 反射系数 分布参数
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基于综合相似日和功率相关性的光伏电站预测功率修正 被引量:12
10
作者 郭辉 杨国清 +1 位作者 姚李孝 张舒捷 《电网与清洁能源》 2018年第9期52-58,共7页
提出了一种基于邻近电站和综合相似日的BP网络光伏输出功率异常数据修复方法。考虑了地理位置、温度以及1日类型等影响出力的因素,通过皮尔逊积距法选取与待修复电站功率相关度高的邻近电站,综合使用灰色关联度和曲线相似度来分析相似日... 提出了一种基于邻近电站和综合相似日的BP网络光伏输出功率异常数据修复方法。考虑了地理位置、温度以及1日类型等影响出力的因素,通过皮尔逊积距法选取与待修复电站功率相关度高的邻近电站,综合使用灰色关联度和曲线相似度来分析相似日,找出与待修复日相符的周边电站的综合相似日数据,然后建立BP网络模型,用自适应调节学习速率的方法修复不良数据。对青海地区实际光伏预测功率中的异常数据进行修复的结果表明,该方法有较高的修复精度。 展开更多
关键词 不良数据 邻近电站 综合相似日 功率相关性
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基于鸽群优化算法的含分布式电源配电网状态估计 被引量:4
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作者 白晨 姚李孝 曹雯 《西安理工大学学报》 CAS 北大核心 2018年第3期294-298,共5页
随着配电网中分布式电源比例不断增加,对配电网的运行管理模式提出了更高的要求,为了能够保证配电网运行的可靠性和经济性,针对含分布式电源配电网的特点,基于鸽群优化算法,提出这类配电网的状态估计方法。以配电网中分布式电源和负荷... 随着配电网中分布式电源比例不断增加,对配电网的运行管理模式提出了更高的要求,为了能够保证配电网运行的可靠性和经济性,针对含分布式电源配电网的特点,基于鸽群优化算法,提出这类配电网的状态估计方法。以配电网中分布式电源和负荷的有功功率为状态变量,以状态变量与量测量差值的平方和最小作为目标函数,以潮流方程作为等式约束,以状态变量上下限值作为不等式约束,构建了含分布式电源配电网状态估计优化模型。采用鸽群优化算法和遗传算法分别求解了所构优化模型的最优解,算例表明,依据磁场、太阳和地标模拟鸽群自主归巢行为的鸽群优化算法,能获得比遗传算法估计精度更高的状态估计结果,可为含分布式电源配电网状态估计提供一个新途径。 展开更多
关键词 含分布式电源配电网 状态估计 鸽群优化算法
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基于委托-代理模型的绿色电力市场激励机制 被引量:3
12
作者 于广亮 郑楠 +5 位作者 刘娟楠 王金峰 吴春阳 任慧敏 姚李孝 黄巧玲 《电网与清洁能源》 2018年第2期157-160,共4页
根据发电企业参与绿色电力市场的成本和收益,搭建了政府和发电企业之间的"委托-代理"博弈模型,通过将博弈模型分别在自愿认购市场和配额考核市场下进行求解,研究了在不同绿色电力市场下,政府对发电企业采用的不同激励机制。
关键词 绿色电力证书 委托-代理模型 自愿市场 配额考核交易市场
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考虑低压释放特性的双机综合负荷模型参数识别策略研究 被引量:1
13
作者 王逸 姚李孝 +2 位作者 赵兵 贺庆 马士聪 《山东电力技术》 2018年第4期1-6,共6页
首先介绍了考虑低压释放特性的综合负荷模型,然后从电动机聚类和实际负荷类型两方面分析了双机和单机模型各自的适用情况。通过对双机模型轨迹灵敏度分析,得出大电动机和小电动机参数不能一起辨识。从电动机稳定性和低压释放特性分析,... 首先介绍了考虑低压释放特性的综合负荷模型,然后从电动机聚类和实际负荷类型两方面分析了双机和单机模型各自的适用情况。通过对双机模型轨迹灵敏度分析,得出大电动机和小电动机参数不能一起辨识。从电动机稳定性和低压释放特性分析,提出了固定大电动机参数辨识小电动机参数的辨识策略。仿真算例表明提出的双机参数辨识策略精度较高,能提高参数辨识精度。 展开更多
关键词 低压释放 综合负荷模型 轨迹灵敏度 双机模型
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CRISPR/Cas9介导柑橘CsLOB1基因启动子的多位点编辑 被引量:13
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作者 邹修平 范迪 +7 位作者 彭爱红 何永睿 许兰珍 雷天刚 姚利晓 李强 罗克明 陈善春 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期337-344,共8页
为了获得CsLOB1启动子较大片段删除的突变体,利用CRISPR/Cas9技术对CsLOB1启动子进行多位点编辑。通过在CsLOB1启动子的EBEPthA4区域及其上、下游设计不同的靶标位点,构建了2个植物表达载体pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites,分别... 为了获得CsLOB1启动子较大片段删除的突变体,利用CRISPR/Cas9技术对CsLOB1启动子进行多位点编辑。通过在CsLOB1启动子的EBEPthA4区域及其上、下游设计不同的靶标位点,构建了2个植物表达载体pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites,分别对CsLOB1启动子同时进行2个位点和3个位点的编辑。测序结果表明pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites的基因编辑效率分别为64.7%和80.0%,突变体植株在2个sgRNA之间发生了DNA片段的删除。进一步的分析发现,不同的sgRNA具有不同的突变效率,其差异是由于不同的sgRNA对CsLOB1-识别和结合能力的差异造成的。本结果表明对CsLOB1启动子进行多位点编辑可以获得删除较大DNA片段的突变体。 展开更多
关键词 柑橘 CRISPR/Cas9系统 CsLOB1 多位点 基因编辑
原文传递
microRNA参与柑橘生长发育和抗逆的研究进展 被引量:6
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作者 姚利晓 何永睿 陈善春 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期995-1008,共14页
microRNA(miRNA)是在转录后水平调控基因表达的一类非编码的小分子RNA。植物miRNA最早于2002年在拟南芥中发现,柑橘miRNA的研究始于2005年,现已发现了许多保守的miRNA和新的miRNA。对参与柑橘生长发育及对生物学胁迫和非生物学胁迫应答... microRNA(miRNA)是在转录后水平调控基因表达的一类非编码的小分子RNA。植物miRNA最早于2002年在拟南芥中发现,柑橘miRNA的研究始于2005年,现已发现了许多保守的miRNA和新的miRNA。对参与柑橘生长发育及对生物学胁迫和非生物学胁迫应答过程的miRNA进行了归纳,并对cis-miR156、cis-miR396和cis-miR3954在柑橘中的功能研究进行了总结。与模式植物和大田作物相比,柑橘miRNA的功能研究相对滞后,新发现miRNA的功能有待深入研究。最后对利用柑橘特异的病毒载体和基因定点编辑技术加快柑橘miRNA功能研究进行了展望。 展开更多
关键词 柑橘 MIRNA 生长发育 生物和非生物胁迫 柑橘病毒载体 CRISPR/Cas9
原文传递
柑橘抗溃疡病转录因子CsAP2-09互作蛋白筛选与分析 被引量:5
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作者 祁静静 窦万福 +8 位作者 张庆雯 胡安华 陈善春 雷天刚 彭爱红 许兰珍 姚利晓 何永睿 李强 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期432-444,共13页
以前期获得的柑橘抗溃疡病的正调控转录因子基因CsAP2-09超表达植株为材料,利用GST融合蛋白沉降技术(GST pull-down)联合液相色谱串联质谱(LC–MS/MS)方法筛选并鉴定CsAP2-09的互作蛋白。首先原核表达并纯化GST-CsAP2-09作为诱饵蛋白,... 以前期获得的柑橘抗溃疡病的正调控转录因子基因CsAP2-09超表达植株为材料,利用GST融合蛋白沉降技术(GST pull-down)联合液相色谱串联质谱(LC–MS/MS)方法筛选并鉴定CsAP2-09的互作蛋白。首先原核表达并纯化GST-CsAP2-09作为诱饵蛋白,然后与CsAP2-09超表达植株叶片总蛋白孵育、洗脱后进行SDS-PAGE验证,最后进行LC–MS/MS鉴定。得到17个互作蛋白,将蛋白进行注释、GO分析、KEGG分析,发现其中5个可能与植物抗病相关(如过氧化氢酶Cs3g27280)。构建这17个蛋白的互作网络,其中14个蛋白的互作关系得到已有数据的支持。对CsAP2-09与互作蛋白的共表达分析发现CsAP2-09超表达引起了16个蛋白表达上调和1个蛋白表达下调。 展开更多
关键词 柑橘 柑橘溃疡病 GST pull-down CsAP2-09 AP2/ERF 互作蛋白
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柚类种质资源表型多样性分析及综合评价 被引量:8
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作者 胡安华 窦万福 +8 位作者 祁静静 雷天刚 陈善春 邹修平 彭爱红 许兰珍 姚利晓 何永睿 李强 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期650-664,共15页
为了建立合理的柚类分类系统并为柚类育种提供参考,本研究以82份柚类种质资源为试材,采用变异系数、Shannon-Weaver多样性指数、方差、相关性、主成分、聚类、回归分析等对其26个表型性状进行多样性分析、差异分析及综合评价。结果表明:... 为了建立合理的柚类分类系统并为柚类育种提供参考,本研究以82份柚类种质资源为试材,采用变异系数、Shannon-Weaver多样性指数、方差、相关性、主成分、聚类、回归分析等对其26个表型性状进行多样性分析、差异分析及综合评价。结果表明:这82个品种的26个性状的变异系数为0.26%。其中翼叶面积和果心面积变异较大,其他性状遗传特性较稳定;单果重、果横径、果形指数、果皮厚、囊瓣数、种子数、果心长和宽、叶片长和宽、叶片面积、花瓣宽、花柄长等性状等级分布均匀,翼叶面积、花瓣数、雄蕊长分级较少且分布不均;来源于中国大陆以外品种的果皮厚、叶柄长、翼叶长,明显优于长江流域和珠江流域来源的材料,但雌蕊长则相反;选育品种的叶片长、宽和面积显著大于遗传材料和地方品种;82个品种可聚为大翼叶大果型、大翼叶小果型,小翼叶大果型,小翼叶小果型4个类群;前7个主成分累计贡献率75.57%,包含了柚类表型性状的大部分信息;26个性状F平均值0.45,其中早暹柚得分最高为0.69,红肉琯溪蜜柚最低为0.24;囊瓣数、种子数等12个性状与F值极显著相关;回归方程筛选出单果重、囊瓣数等19个性状。本研究说明柚类种质资源具有较高的表型多样性,筛选出的19个性状可作为柚类综合评价指标,为柚类育种提供科学依据。 展开更多
关键词 表型 多样性 综合评价
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柑橘CsNCED3-2的克隆及其响应溃疡病菌侵染的表达分析 被引量:1
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作者 谢宇 张庆雯 +9 位作者 祁静静 邹修平 何永睿 许兰珍 雷天刚 彭爱红 李强 姚利晓 陈善春 龙琴 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2405-2414,共10页
柑橘溃疡病是世界柑橘的一种重要病害,对柑橘产业造成严重的经济损失。对柑橘中9–顺式–环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因家族进行注释,并克隆出受柑橘溃疡病菌诱导表达的CsNCED3-2,确定了其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库共注释... 柑橘溃疡病是世界柑橘的一种重要病害,对柑橘产业造成严重的经济损失。对柑橘中9–顺式–环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因家族进行注释,并克隆出受柑橘溃疡病菌诱导表达的CsNCED3-2,确定了其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库共注释出14个NCED基因家族成员,根据系统发育树和功能结构域将其分为4个亚类;CsNCED3-2其序列全长2377 bp,开放阅读框1830 bp,编码609个氨基酸,属于RPE65超家族成员和类胡萝卜素双加氧酶家族成员,是非分泌性蛋白;在‘晚锦橙’和‘金弹’叶片注射溃疡病菌后的各个时间点,‘晚锦橙’叶片中CsNCED3-2的相对表达量总体高于‘金弹’,并且两品种的相对表达变化呈相反趋势;与茎、叶和种子相比,CsNCED3-2在两品种果皮中表达量较高;两品种的CsN CED3-2上游启动子均含有参与植物激素和逆境应答相关的顺式作用元件ABRE(脱落酸响应)、TCA-element(水杨酸响应)、MYC/MYB(干旱响应)等,但数量和类型存在差异。 展开更多
关键词 柑橘 溃疡病 NCED 基因克隆 表达量 启动子
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Cloning and Expression Analysis of Citrus Genes Cs GH3.1 and Cs GH3.6Responding to Xanthomonas axonopodis pv. citri Infection 被引量:4
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作者 CHEN Min HE Yongrui +11 位作者 XU Lanzhen PENG Aihong LEI Tiangang yao lixiao LI Qiang ZHOU Pengfei BAI Xiaojing DUAN Minjie JIANG Xueyou JIA Ruirui ZOU Xiuping CHEN Shanchun 《Horticultural Plant Journal》 SCIE 2016年第4期193-202,共10页
To study the functions of the early auxin-responsive genes Cs GH3.1 and Cs GH3.6 in citrus resistance against canker disease, we cloned Cs GH3.1and Cs GH3.6 in ‘Newhall' Navel Orange(Citrus sinensis Osbeck). They... To study the functions of the early auxin-responsive genes Cs GH3.1 and Cs GH3.6 in citrus resistance against canker disease, we cloned Cs GH3.1and Cs GH3.6 in ‘Newhall' Navel Orange(Citrus sinensis Osbeck). They are 1 797 bp and 1 887 bp and encode 598 and 629 amino acids, respectively. In vitro mature leaves from susceptible ‘Newhall' and resistant Calamondin(C. madurensis) were inoculated by a Xanthomonas axonopodis pv. citri(Xac) bacterial suspension, and expression of Cs GH3.1 and Cs GH3.6 in the two varieties were analyzed using quantitative real-time PCR(q RT-PCR). ‘Newhall' leaves were treated with different hormones for 3 days, inoculated by Xac bacterial suspension, and then the symptoms in these leaves were investigated. We used q RT-PCR to analyze the effect of different hormones on Cs GH3.1 and Cs GH3.6 expression in ‘Newhall'leaves. The expression levels of both Cs GH3.1 and Cs GH3.6 were significantly induced by Xac in ‘Newhall' leaves, compared with levels in Calamondin leaves. 1-naphthy acetic acid(NAA) increased the hypertrophy of infection sites in ‘Newhall' leaves, while naphthyl-phthalamic acid(NPA)had no visible effect on lesion development. NAA hormone greatly improved expression of Cs GH3.1 in ‘Newhall', but not Cs GH3.6. These results indicate that the auxin primary-response gene Cs GH3.1 plays an important role in citrus susceptibility to Xac. 展开更多
关键词 CITRUS citrus canker auxin signal transduction Cs GH3 1 Cs GH3 6
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