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野大麦肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析
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作者 袁惠君 关玉晨 +3 位作者 王春梅 冯欢 张欢欢 袁毅君 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第4期30-38,共9页
野大麦(Hordeum brevisubulatum)是重要的野生禾本科牧草,具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因,本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因(Actin,ACT)的核心片段。采用BLAST序列比对,qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特... 野大麦(Hordeum brevisubulatum)是重要的野生禾本科牧草,具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因,本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因(Actin,ACT)的核心片段。采用BLAST序列比对,qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特性进行了分析。结果表明,野大麦ACT的基因片段长518 bp,编码171个氨基酸。BLAST分析表明,野大麦的肌动蛋白基因片段与大麦(Hordeum vulgare)ACT基因核苷酸序列的一致性达97%,与ACT蛋白氨基酸序列的同源性达91%,并将其命名为HbACT。与11种相关植物进行ACT氨基酸序列比对发现,HbACT含152个保守氨基酸和19个非保守氨基酸,说明HbACT蛋白具有高度保守性。qRT-PCR分析表明,在不同盐浓度处理条件下,不同处理时间野大麦各器官的HbACT的Ct平均值为19.30,地上部的变异系数为3.5,峰度系数为0.262;地下部的变异系数为5.3,峰度系数为0.409,均属于尖峰分布,Ct值的稳定系数均小于1.7。综上所述,HbACT基因表达稳定,可作为内参基因用于研究野大麦功能基因的表达模式分析。 展开更多
关键词 野大麦 肌动蛋白基因 克隆 表达模式分析
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1株抗真菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)lut-Y1的鉴定及抑菌活性研究
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作者 袁惠君 余诗曼 +3 位作者 徐琰莹 袁毅君 冯欢 张欢欢 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2354-2364,共11页
【目的】探究1株来自枸杞果实的贝莱斯芽孢杆菌lut-Y1的生长特性及抑菌活性,为微生态制剂的开发和应用提供参考。【方法】通过形态观察和16S rDNA基因测序分析对该菌株进行鉴定;测定该菌株生长曲线及最适pH、碳源、氮源及盐耐受度;采用... 【目的】探究1株来自枸杞果实的贝莱斯芽孢杆菌lut-Y1的生长特性及抑菌活性,为微生态制剂的开发和应用提供参考。【方法】通过形态观察和16S rDNA基因测序分析对该菌株进行鉴定;测定该菌株生长曲线及最适pH、碳源、氮源及盐耐受度;采用平板对峙法观察该菌株对链格孢菌(Alternaria alternate)、小麦根腐离蠕孢(Bipolaris sorokiniana)和小孢壳二孢(Ascochyta leptospora)的颉颃作用,并分析该菌株发酵液对3种病原真菌的抑菌活性。【结果】lut-Y1菌株在LB、NA和PDA培养基上均生长良好。根据形态和16S rDNA基因序列特征将lut-Y1菌株鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。在LB液体培养基中,lut-Y1菌株在0~3 h为迟滞期,3~18 h为对数期,18~62 h为稳定期,62 h后进入衰亡期;最适pH为7.0,最适碳源和氮源分别为蔗糖和蛋白胨,对NaCl的耐受量不超过2.0 g/L。lut-Y1菌株对链格孢菌有明显的颉颃作用,对小麦根腐离蠕孢和小孢壳二孢的颉颃作用较弱。对峙平板的两菌交界处,链格孢菌基内菌丝细弱、弯曲;小麦根腐离蠕孢基内菌丝细胞壁被破坏,有泡状突起。发酵液添加量为25%时生长圈直径分别缩小72.80%和83.24%。【结论】贝莱斯芽孢杆菌lut-Y1具有较好的抑菌活性,可为开发以芽孢杆菌为主要活性成分的微生态制剂提供材料。 展开更多
关键词 贝莱斯芽孢杆菌 鉴定 生物学特性 颉颃作用 抑菌效果
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马铃薯营养特性及其功能性产品开发研究进展
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作者 邱心洋 袁惠君 +3 位作者 李梅 程建新 田世龙 李志忠 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第1期272-278,共7页
马铃薯是世界第四大粮食作物,具有产量高、对环境适应能力强、种质资源丰富的特点。同时,马铃薯所含优质营养成分较高,其功能特性对人体健康也极其重要,因此,马铃薯受到了食品加工行业的广泛关注,深入研究马铃薯中的营养成分对食品工业... 马铃薯是世界第四大粮食作物,具有产量高、对环境适应能力强、种质资源丰富的特点。同时,马铃薯所含优质营养成分较高,其功能特性对人体健康也极其重要,因此,马铃薯受到了食品加工行业的广泛关注,深入研究马铃薯中的营养成分对食品工业、食品开发等行业均具有良好的意义。在此基础上,为了提高马铃薯在功能性食品开发方面的利用价值,本研究首先从马铃薯淀粉、蛋白、矿物质和膳食纤维等营养成分出发,概述其营养特性及在马铃薯中所占含量,深入分析了马铃薯的降血糖、抗菌和抗癌等生理功能,并进一步总结了马铃薯制品和马铃薯特色产品等功能性马铃薯食品的研究现状,讨论了目前马铃薯食品加工行业存在的问题并提出了相应的建议,旨在为功能性马铃薯食品的开发和产业化提供参考。 展开更多
关键词 马铃薯 营养成分 功能特性 功能性马铃薯食品 食品加工
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高通量测序标准物质的研究进展
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作者 刘杨 苏照中 +2 位作者 曾凡俊 袁惠君 张永卓 《计量学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期128-134,共7页
高通量测序技术的出现使基因序列得到了广泛研究。由于遗传物质的复杂性以及在样品准备、测序和分析过程中引入的技术错误和不同测序平台之间的系统偏差,导致高通量测序结果在准确性和各平台一致性方面受到影响。而在测序流程中使用标... 高通量测序技术的出现使基因序列得到了广泛研究。由于遗传物质的复杂性以及在样品准备、测序和分析过程中引入的技术错误和不同测序平台之间的系统偏差,导致高通量测序结果在准确性和各平台一致性方面受到影响。而在测序流程中使用标准物质可以很好地解决这些问题。高通量测序标准物质通常是具有良好特征的遗传物质或合成的添加对照物和模拟的电子数据集,高通量测序标准物质的应用将有助于校准高通量测序的测量结果和评估仪器性能,对确保测序结果的准确性、一致性至关重要。 展开更多
关键词 生物计量 高通量测序 标准物质 质量控制
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扁果枸杞转录因子基因LbWIN1的克隆及响应非生物胁迫的表达分析 被引量:1
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作者 袁惠君 苏照中 +4 位作者 王春梅 张瑞艳 关玉晨 李学勇 鲍婧婷 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1449-1460,共12页
蜡质诱导因子1(wax inducer 1/SHN1,WIN1/SHN1)与植物的抗逆性密切相关。为研究WIN1在耐旱经济灌木扁果枸杞(Lycium barbarum ssp.Bianguo)中的功能及其应用前景,本研究用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从扁果枸杞中克隆了LbWIN1,构... 蜡质诱导因子1(wax inducer 1/SHN1,WIN1/SHN1)与植物的抗逆性密切相关。为研究WIN1在耐旱经济灌木扁果枸杞(Lycium barbarum ssp.Bianguo)中的功能及其应用前景,本研究用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从扁果枸杞中克隆了LbWIN1,构建了LbWIN1融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体并表达在拟南芥(Arabidopsis thaliana)原生质体中进行亚细胞定位,用实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析LbWIN1的表达特征。结果表明,LbWIN1基因长1103 bp,含600 bp的开放阅读框,编码199个氨基酸,含有1个高度保守的AP2结构域。系统进化树分析发现,LbWIN1蛋白与茄科番茄(Solanum lycopersicum)SlWIN1和辣椒(Capsicum chinense)CcWIN1的同源性高达99%。亚细胞定位分析证明LbWIN1蛋白定位于细胞核。LbWIN1基因在叶、茎、根中均表达,其表达量受NaCl、渗透胁迫和外源脱落酸(ABA)诱导,表明LbWIN1参与旱生植物响应盐和干旱等非生物胁迫。 展开更多
关键词 蜡质诱导因子1 克隆 亚细胞定位 表达模式 非生物胁迫 灌木
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扁果枸杞表皮蜡质转运相关基因LbABCG11的克隆及其表达特征分析
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作者 袁惠君 张瑞艳 +4 位作者 关玉晨 余诗曼 徐琰莹 马倩国 鲍婧婷 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期45-54,共10页
为研究ATP结合转运蛋白G亚家族蛋白11(ABCG11)在旱生经济灌木扁果枸杞中的功能,以扁果枸杞为试验材料,利用逆转录(RT-PCR)技术和RACE法克隆了扁果枸杞LbABCG11基因的cDNA序列,通过生物信息学分析该序列特征,并用实时荧光定量PCR法(qRT-P... 为研究ATP结合转运蛋白G亚家族蛋白11(ABCG11)在旱生经济灌木扁果枸杞中的功能,以扁果枸杞为试验材料,利用逆转录(RT-PCR)技术和RACE法克隆了扁果枸杞LbABCG11基因的cDNA序列,通过生物信息学分析该序列特征,并用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)研究了LbABCG11在盐处理、渗透胁迫和脱落酸(ABA)处理下不同器官的转录水平。结果表明,LbABCG11基因全长为2971 bp,开放阅读框长2130 bp,编码710个氨基酸,有6个跨膜区,预测蛋白质分子质量为79.39 ku,理论等电点8.42,脂肪指数为89.63,不稳定系数为35.52,平均亲水性为0.070,其编码蛋白质分子式为C _(3590) H_( 5577) N _(935) O _(1027) S_( 35),属于性质稳定的碱性疏水蛋白,含有核苷酸结合域(NBD)以及跨膜结构域(TMD),并以NBD-TMD的形式排列,是一种WBC型(WBC)半分子转运蛋白。该蛋白质二级结构主要由α-螺旋及无规则卷曲组成,分别占45.21%和33.66%,与三级结构预测结果相符。系统进化树分析发现,LbABCG11蛋白与茄科番茄SlABCG11和辣椒CbABCG11的亲缘关系较近,与拟南芥AtABCG11、藜麦CqABCG11同源性较低。LbABCG11基因在叶、茎、根中均表达,其表达量受NaCl、渗透胁迫和ABA诱导,表明LbABCG11参与旱生植物盐和干旱等多种胁迫的调控。 展开更多
关键词 扁果枸杞 蜡质转运 LbABCG11 基因克隆 生物信息学 表达模式
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基于级联森林模型的液压泵信息融合状态诊断
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作者 原慧军 王雨川 《机床与液压》 北大核心 2023年第24期66-70,共5页
为了提高对液压泵复杂条件下的故障诊断能力,综合运用传感器数据融合与级联森林模型来实现液压泵的健康评价。运用特征级与决策级融合技术来实现对柱塞泵各传感器信息的快速融合,以随机森林模型对初步特征重要性实施评价并从中选择具备... 为了提高对液压泵复杂条件下的故障诊断能力,综合运用传感器数据融合与级联森林模型来实现液压泵的健康评价。运用特征级与决策级融合技术来实现对柱塞泵各传感器信息的快速融合,以随机森林模型对初步特征重要性实施评价并从中选择具备高重要度的初始特征参数,通过级联森林模型对液压泵健康检测结果实施分类。结果表明:以多传感器信息融合方法构建的级联森林模型进行预测时可以实现对液压泵健康状态的准确诊断,只设置5%训练集时,液压泵健康诊断结果达到99.5%精确率;当采用单一温度特征无法同时满足精确率与召回率条件时,组合模式的各类预测精确率与召回率相对其他模式达到了更高的预测精度与召回率,其中,温度融合流量组合形式具备更大优势。 展开更多
关键词 液压泵 多传感器融合 级联森林模型 健康诊断
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富锌马铃薯锌分布特征及加工方式对锌含量的影响
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作者 邱心洋 刘雨鑫 +4 位作者 袁惠君 李梅 程建新 田世龙 李志忠 《中国马铃薯》 2023年第3期258-264,共7页
马铃薯主粮化战略的提出标志着马铃薯已经成为中国第四大主粮,研究不同功能的马铃薯对于马铃薯产品加工具有重要意义。研究的目的是探究总锌和有机锌在两个富锌马铃薯品种‘陇薯7号’‘陇薯14号’和普通品种‘青薯9号’不同部位的分布... 马铃薯主粮化战略的提出标志着马铃薯已经成为中国第四大主粮,研究不同功能的马铃薯对于马铃薯产品加工具有重要意义。研究的目的是探究总锌和有机锌在两个富锌马铃薯品种‘陇薯7号’‘陇薯14号’和普通品种‘青薯9号’不同部位的分布和熟化方式对总锌含量的影响。在3种供试马铃薯品种中,‘陇薯7号’内髓部和外髓部作为主要可食部分总锌含量最高,达18.7μg/g DW,比‘青薯9号’高20.4%;其内髓部有机锌含量达10.7μg/g DW,比‘青薯9号’和‘陇薯14号’分别高4.8%和57.8%。5种熟化方式中,烤制对富锌马铃薯可食部位的锌含量影响最小,蒸制、水煮、煎制、油炸均使3个马铃薯品种可食部位锌含量大幅损失,损失量排序为水煮>蒸制>煎制>油炸。研究结果表明,‘陇薯7号’内髓部总锌含量以及有机锌含量丰富,可用作富锌马铃薯产品生产的原料,在对富锌马铃薯的加工过程中为降低锌含量的损失应尽可能选择烤制处理。 展开更多
关键词 富锌马铃薯 锌含量分布 熟制工艺 补锌
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急性肾损伤伴草酸盐沉积1例
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作者 袁惠君 王玲 《徐州医科大学学报》 CAS 2023年第4期310-312,共3页
48岁女性患者,因“乏力、纳差1周,少尿2 d”入院,饮酒后出现血尿、蛋白尿、白细胞尿、少尿、肾功能不全,行肾活检病理示急性肾小管-间质损伤、草酸盐肾病,经糖皮质激素免疫抑制、临时血液透析、补液水化及对症治疗后,尿量恢复,血尿、蛋... 48岁女性患者,因“乏力、纳差1周,少尿2 d”入院,饮酒后出现血尿、蛋白尿、白细胞尿、少尿、肾功能不全,行肾活检病理示急性肾小管-间质损伤、草酸盐肾病,经糖皮质激素免疫抑制、临时血液透析、补液水化及对症治疗后,尿量恢复,血尿、蛋白尿转阴,肾功能恢复正常。 展开更多
关键词 急性肾损伤 肾活检 草酸钙晶体 草酸盐肾病
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响应面法优化黄芪总黄酮提取工艺及初步纯化 被引量:10
10
作者 袁惠君 李欣 +1 位作者 贾鸿震 袁毅君 《草业科学》 CAS CSCD 2019年第6期1683-1691,共9页
黄芪总黄酮具有抗氧化、增强机体免疫等功能,常作为免疫增强剂添加在食品和饲料中。通过单因素试验研究乙醇体积分数、料液比和提取时间对黄芪总黄酮提取量的影响,进一步用Box-Behnken法优化黄芪总黄酮最佳提取工艺,并利用大孔吸附树脂... 黄芪总黄酮具有抗氧化、增强机体免疫等功能,常作为免疫增强剂添加在食品和饲料中。通过单因素试验研究乙醇体积分数、料液比和提取时间对黄芪总黄酮提取量的影响,进一步用Box-Behnken法优化黄芪总黄酮最佳提取工艺,并利用大孔吸附树脂-聚酰胺联用技术对其进行富集纯化。结果表明:在乙醇体积分数70%,料液比1∶17,提取时间70min的条件下提取效果最佳,总黄酮提取量为2.78mg·g^-1,相对标准偏差为1.41%。经HPD722大孔吸附树脂-聚酰胺联用富集纯化后,黄芪总黄酮提取量为310.63mg·g^-1,增加112倍,其中毛蕊异黄酮含量由0.13mg·g^-1增至42.56mg·g^-1,增加327倍;芒柄花素含量由0.06mg·g^-1增至7.89mg·g^-1,增加132倍。 展开更多
关键词 黄芪 黄酮 单因素试验 Box-Behnken法 大孔吸附树脂-聚酰胺联用
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扁果枸杞角质层蜡质合成相关基因LbCER1的克隆及其表达特征分析 被引量:3
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作者 袁惠君 马倩国 +4 位作者 高泽 李学勇 鲍婧婷 王春梅 李虎军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期15-22,共8页
为研究旱生植物中醛脱羰基酶基因(ECERIFERUM1,CER1)在响应渗透胁迫过程中的分子特性,用逆转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)和RACE法克隆了耐盐耐旱的扁果枸杞CER1基因的cDNA序列,对该序列进行了生物信息学分析,并用实时荧光... 为研究旱生植物中醛脱羰基酶基因(ECERIFERUM1,CER1)在响应渗透胁迫过程中的分子特性,用逆转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)和RACE法克隆了耐盐耐旱的扁果枸杞CER1基因的cDNA序列,对该序列进行了生物信息学分析,并用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法检测在渗透胁迫处理后扁果枸杞CER1在各器官中的转录水平。结果表明,扁果枸杞CER1的cDNA序列长2 168 bp,开放阅读框为1 881 bp,命名为LbCER1,编码626个氨基酸,有4个跨膜区、1个脂肪酸羟化酶结构域和1个位于C-末端的Wax2结构域。该蛋白的理论分子质量为72.47 ku,等电点为7.40,脂肪指数为91.28,不稳定系数为27.88,平均亲水性为-0.070,是一种耐高温、性质稳定的偏碱性亲水蛋白。LbCER1蛋白定位在内质网膜上,二级结构主要由α-螺旋和环组成,分别占44.09%和45.21%,与三级结构预测结果相符。LbCER1与茄科植物亲缘关系近,同源性达100%。LbCER1基因在叶、茎、根中均表达。与对照相比,160 mmol/L山梨醇渗透胁迫处理下,6 h时LbCER1基因在叶中的相对表达量最高,增加1.8倍,茎中的相对表达量增加21%,12 h时降低14%,根中渗透胁迫处理6,12 h时,LbCER1的相对表达量分别增加1.1倍和32%;80 mmol/L山梨醇渗透胁迫下,仅叶在处理6 h时LbCER1表达量增加66%,茎和根中表达量降低或差异不显著,表明LbCER1可能与扁果枸杞响应渗透胁迫有关。 展开更多
关键词 扁果枸杞 LbCER1基因 克隆 基因表达
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扁果枸杞表皮蜡质合成相关基因LbCER1的RNAi载体构建 被引量:1
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作者 袁惠君 高泽 +2 位作者 王绢绢 鲍婧婷 冯再平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期14-18,共5页
为鉴定醛脱羰基酶(ECERIFERUM1,CER1)基因在旱生植物表皮蜡质烷烃合成过程中的功能,培育适宜干制加工品种,选定扁果枸杞(Lycium barbarum ssp. Bianguo) Lb CER1基因1 469~1 840 bp区段为最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)靶序列,克... 为鉴定醛脱羰基酶(ECERIFERUM1,CER1)基因在旱生植物表皮蜡质烷烃合成过程中的功能,培育适宜干制加工品种,选定扁果枸杞(Lycium barbarum ssp. Bianguo) Lb CER1基因1 469~1 840 bp区段为最佳RNA干扰(RNA interference,RNAi)靶序列,克隆该区段并将其插入p KANNIBAL载体,构建具有发卡状反向重复序列的RNAi中间载体p KANNIBAL-Lb CER1(+)-PDK intron-Lb CER1(-),并将发卡状反向重复序列转入RNAi表达载体p ART27,再用冻融法将p ART27-Lb CER1 (+)-PDK intron-Lb CER1 (-)载体转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101,并用限制性内切酶双酶切法和PCR法检测转化的农杆菌菌株。结果表明,RNAi的中间载体和表达载体均结构正确,并且RNAi表达载体p ART27-Lb CER1(+)-PDK intron-Lb CER1(-)成功转化根癌农杆菌GV3101,说明该构建方法正确,将为进一步筛选Lb CER1-RNAi植株,获得适宜干制加工的宁夏枸杞新品种奠定基础。 展开更多
关键词 扁果枸杞 RNA干扰 载体构建 醛脱羰基酶 表皮蜡质合成
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扁果枸杞肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析 被引量:1
13
作者 袁惠君 李学勇 +2 位作者 高泽 王春梅 李虎军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期48-53,共6页
为克隆扁果枸杞(Lycium barbarum Bianguo)肌动蛋白基因作为基因表达模式分析的内参基因,根据几种茄科植物肌动蛋白氨基酸序列保守区设计引物,以扁果枸杞3周龄叶总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增肌动蛋白基因片段并连接到p MD18-T载体... 为克隆扁果枸杞(Lycium barbarum Bianguo)肌动蛋白基因作为基因表达模式分析的内参基因,根据几种茄科植物肌动蛋白氨基酸序列保守区设计引物,以扁果枸杞3周龄叶总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增肌动蛋白基因片段并连接到p MD18-T载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果表明,该基因片段长598 bp,编码198个氨基酸,与枸杞(Lycium chinense)核苷酸序列的相似度和同源性分别达97%和100%,说明是肌动蛋白基因片段,命名为Lb ACT。荧光定量PCR分析表明,盐处理下Lb ACT基因在各器官中的Ct值稳定,可作为内参基因用于研究扁果枸杞功能基因的表达模式分析。 展开更多
关键词 扁果枸杞 肌动蛋白 基因克隆 序列分析 RT-PCR
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微RNA-543对过氧化氢诱导的人静脉内皮细胞氧化应激的影响 被引量:1
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作者 袁会军 芦军 +1 位作者 崔志强 韩鹏 《新乡医学院学报》 CAS 2021年第3期233-239,共7页
目的探讨微RNA-543(miR-543)对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的影响。方法将对数生长期的HUVECs随机分为对照组及100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2组。对照组细胞于达尔伯克改良伊格尔培养基中常规培... 目的探讨微RNA-543(miR-543)对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的影响。方法将对数生长期的HUVECs随机分为对照组及100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2组。对照组细胞于达尔伯克改良伊格尔培养基中常规培养;100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2组细胞分别加入终浓度100、200、300、400μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养;各组细胞培养3 h时采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性。另设inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组。inhibitor+H 2O 2组HUVECs转染miR-543 inhibitor后,再用300μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养3 h;inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs转染inhibitor-NC后,再用300μmol·L^(-1)H 2O 2诱导培养3 h。取对照组、300μmol·L^(-1)H 2O 2组、inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs,采用MTT法检测细胞活性,实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中miR-543水平,酶标仪法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平,Western blot法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、血栓调节蛋白(TM)、组织因子途径抑制因子(TFPI)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的相对表达量;双荧光素酶报告基因法检测HUVECs中荧光素酶活性。结果与对照组比较,300μmol·L^(-1)H 2O 2组、inhibitor+H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs细胞活性显著降低,miR-543相对表达量显著增高,SOD和GSH-Px活性、NO水平以及TM、TFPI、eNOS蛋白相对表达量显著降低,MDA水平及IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与300μmol·L^(-1)H 2O 2组和inhibitor-NC+H 2O 2组比较,inhibitor+H 2O 2组HUVECs细胞活性显著升高,miR-543相对表达量显著降低,SOD和GSH-Px活性、NO水平以及TM、TFPI、eNOS蛋白相对表达量显著升高,MDA水平及IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。300μmol·L^(-1)H 2O 2组与inhibitor-NC+H 2O 2组HUVECs细胞活性和miR-543相对表达量、SOD和GSH-Px活性、NO、MDA水平及TM、TFPI、eNOS、IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR组荧光素酶活性显著低于miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR mut组(P<0.05);miR-543 mimic+pGL3-eNOS 3′-UTR组荧光素酶活性显著低于miR-543 mimic+pGL3-eNOS 3′-UTR mut组(P<0.05)。miR-543 mimic组miR-543表达高于对照组和mimic-NC组(P<0.05);miR-543 mimic组TFPI和eNOS相对表达量显著低于对照组和mimic-NC组(P<0.05);对照组与mimic-NC组miR-543、TFPI和eNOS相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制miR-543表达能够抵抗H 2O 2诱导的HUVECs损伤,提高细胞活性、抑制氧化应激和炎症因子水平,提高抗血栓能力。 展开更多
关键词 微RNA-543 内皮细胞损伤 氧化应激 炎症因子 血栓形成相关因子
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基于有限元的固液两相射流冲刷磨损率数值研究 被引量:2
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作者 原慧军 张利军 《真空科学与技术学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期82-85,共4页
利用数值模拟方法研究了不锈钢受到固液两相射流冲蚀作用后发生的磨损过程,对不同粒径的试样进行了磨损率测试。结果表明:流体在喷嘴出口部位的速度约等于10 m/s,当流体与面板发生撞击后便会流向下游,在射流喷嘴口附件存在一个明显的压... 利用数值模拟方法研究了不锈钢受到固液两相射流冲蚀作用后发生的磨损过程,对不同粒径的试样进行了磨损率测试。结果表明:流体在喷嘴出口部位的速度约等于10 m/s,当流体与面板发生撞击后便会流向下游,在射流喷嘴口附件存在一个明显的压力较高的滞止区域。下游区域磨损率明显高于上游区域,并且与圆心距离越远的地方冲刷磨损率也越大,之后逐渐降低。当流体与冲蚀壁面接触之后便会流向下游区域,对下游区域造成较大的冲蚀作用,使下游产生较大的冲刷磨损率。越靠近下游区域,冲蚀磨损率表现为先增大后降低的现象,越靠近上游磨损率越小。平均冲刷磨损率和射流速度呈指数关系。 展开更多
关键词 固液两相 射流 磨损 数值计算
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表现型为视神经萎缩的NDUFV1基因新移码突变
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作者 张智科 袁慧君 张水馨 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期789-792,共4页
目的对一个视神经萎缩的儿童进行致病基因研究,并分析其对蛋白结构的影响。方法收集该患儿及家属病历资料,进行视力、视野、眼底、OCT、VEP等眼科检查,及神经科查体、头颅MRI等全身检查,并随访1年。采集患儿及家长外周血,提取DNA进行全... 目的对一个视神经萎缩的儿童进行致病基因研究,并分析其对蛋白结构的影响。方法收集该患儿及家属病历资料,进行视力、视野、眼底、OCT、VEP等眼科检查,及神经科查体、头颅MRI等全身检查,并随访1年。采集患儿及家长外周血,提取DNA进行全外显子的二代基因测序,并对突变基因进行致病性分析和蛋白结构分析。结果患儿表现为双眼视力下降、视神经萎缩,VEP呈低振幅,无明显感觉及、肌张力异常,头颅MRI未发现明显脑白质病变。DNA测序显示编码线粒体复合物Ⅰ(complex Ⅰ)的核基因NDUFV1基因外显子1中出现杂合的移码突变c.5354delTG,缬氨酸变为丙氨酸,引起新读码框在20位置过早形成终止编码(p Val18AlafsX20);内含子8中存在杂合的点突变(c.1162+4A>C)。蛋白结构分析显示complex Ⅰ的NDUFV1亚单元重要结构缺失。结论在儿童视神经萎缩且无脑白质异常的病例中,发现新的NDUFV1基因突变,有助于拓宽对NDUFV1基因表现型和基因型关系的认识。 展开更多
关键词 NDUFV1 呼吸酶链复合物Ⅰ 视神经萎缩 二代基因测序
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Chk1在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义 被引量:2
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作者 袁会军 刘斌 +3 位作者 于文庆 苏勤军 杨艳丽 李海莹 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第3期456-459,共4页
目的:检测乳腺癌组织中Chk1(checkpoint kinase1,Chk1)的表达水平,探索其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2012年01月至2017年01月在我院病理科存档的乳腺癌组织蜡块115例,应用免疫组织化学法检测其中Chk1蛋白的表达水平。采... 目的:检测乳腺癌组织中Chk1(checkpoint kinase1,Chk1)的表达水平,探索其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2012年01月至2017年01月在我院病理科存档的乳腺癌组织蜡块115例,应用免疫组织化学法检测其中Chk1蛋白的表达水平。采用卡方检验分析Chk1蛋白的表达情况与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析患者生存数据。结果:Chk1蛋白在乳腺癌组织中广泛表达,阳性率为73%;Chk1蛋白的表达水平与患者的年龄、肿瘤的临床分期及p53的表达水平有关(P<0.05);Chk1蛋白的表达与患者5年总生存期(overall survival,OS)有统计学意义(P<0.05);与5年无进展生存期(progress free survival,PFS)、3年OS和PFS无统计学意义(P>0.05)。结论:Chk1在乳腺癌组织中的表达与患者预后相关,表达阴性的患者可能获得时间较长的PFS和OS,表明Chk1有望成为乳腺癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 乳腺癌 CHK1 免疫组化 预后
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家庭动态因素和大学生个性特征对职业探索的影响研究 被引量:3
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作者 李丹萍 张雅明 +3 位作者 王晓娅 袁慧军 陈哲思 黎鸿雁 《河北农业大学学报(社会科学版)》 2019年第3期72-78,共7页
采用stumpf职业探索问卷(CES)、家庭互动情景和个性特征量表对2 929名在校大学生开展调查。多元回归分析结果表明:(1)大学生职业探索水平多集中在中高度,其中环境探索水平低于自我探索水平。(2)大三学生自我探索水平更高,差异显著(P≤0.... 采用stumpf职业探索问卷(CES)、家庭互动情景和个性特征量表对2 929名在校大学生开展调查。多元回归分析结果表明:(1)大学生职业探索水平多集中在中高度,其中环境探索水平低于自我探索水平。(2)大三学生自我探索水平更高,差异显著(P≤0.05);县乡农村生源自我探索水平更高,差异显著(P≤0.05)。(3)父母职业支持和职业冷淡、家庭压力感和正面感对环境探索有极其显著的促进作用;父母职业支持、家庭正面感和压力感对自我探索产生显著促进作用。(4)主动性、乐观性、自我灵活性、自控力、活力感对自我探索和环境探索都有积极促进作用。结论:父母职业支持、高质量的亲子关系、父母的多元化影响以及积极的人格特质对大学生职业探索均有积极影响。 展开更多
关键词 家庭互动情景 个性特征 大学生 职业探索
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UPLC同时测定清热止咳颗粒中7种黄酮类成分含量 被引量:1
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作者 李鸷 余淑美 +4 位作者 余代鑫 于娟 袁慧君 林少华 徐伟 《药学研究》 CAS 2020年第5期272-277,共6页
目的建立同时测定清热止咳颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷含量的方法。方法采用超高效液相色谱法(UPLC),采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动... 目的建立同时测定清热止咳颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷含量的方法。方法采用超高效液相色谱法(UPLC),采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速0.3 m L·min^-1,检测波长280 nm,柱温30℃。结果芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷分别在0.324~6.480(r=0.999 9),1.337~26.75(r=0.999 7),0.687~13.80(r=0.999 6),1.347~26.95(r=0.999 8),2.770~55.40(r=0.999 2),0.330~6.600(r=0.999 8),0.242~4.840(r=0.999 6)μg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系;并且芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷平均加样回收率分别为99.41%、101.80%、99.42%、98.47%、101.71%、102.27%和97.64%,RSD范围分别是2.32%、1.69%、2.38%、2.45%、1.24%、1.77%和1.91%。结论建立的超高效液相色谱方法操作简便、稳定、准确且可行,可用于清热止咳颗粒的质量控制。 展开更多
关键词 清热止咳颗粒 超高效液相色谱法 芸香柚皮苷 柚皮苷 橙皮苷 新橙皮苷 黄芩苷 木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷 汉黄芩苷
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Mitochondrial DNA A1555G mutation screening using a testing kit method and its significance in preventing aminoglycoside-related hearing loss 被引量:7
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作者 LIU Xin DAI Pu +10 位作者 HUANG Deliang yuan huijun LI Weiming YU Fei ZHANG Xin KANG Dongyang CAO Juyang YANG Weiyan HAN Dongyi JIN Zhengce GUAN Minxin 《Journal of Otology》 2006年第1期61-64,共4页
To report a new screening method for mitochondrial DNA 1555A→G mutation and the results of genotype analysis in 19 maternal inherited deafness pedigrees. Method Five hundred and forty-six non-syndromic neuro-sensory ... To report a new screening method for mitochondrial DNA 1555A→G mutation and the results of genotype analysis in 19 maternal inherited deafness pedigrees. Method Five hundred and forty-six non-syndromic neuro-sensory hearing loss patients were tested for 1555A→G mutation using a new compact testing kit, which allows clear distinction between wild type and 1555 A→G mutated mtDNAs. Results Nineteen subjects among the 546 patients (3.48%) were found to carry mtDNA A1555G mutation. The results were confirmed by sequencing in an ABI 3100 Avant sequencer. Conclusions Maternal inherited deafness families are a frequently seen in outpatient group. The detection of mtDNA 1555 A→G mutation with a low cost, ready to use detection kit is needed and suitable in China for large scale screening and preventive testing before usage of aminoglycoside antibiotics. 展开更多
关键词 ototoxic deafness maternal pedigree gene mutation prevention
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