继代培养时间对抗性黑松体胚发生的影响

以继代培养0.5、1.5 a和3.5 a的抗性黑松37#家系胚性愈伤组织为材料,观察不同培养时间胚性细胞的形态和体胚成熟的过程,并对愈伤组织的增殖率、每克愈伤形成的体胚数量及体胚萌发率和植株成活率进行测定。结果表明:在继代培养过程中,胚性胚柄细胞团(ESM)结构逐渐疏松,胚柄细胞呈现缩短、增粗的现象;培养时间对抗性黑松愈伤组织的增殖、分化、体胚萌发及植株成活率均有显著影响。3种不同培养时间愈伤组织的增殖率分别为200.37%、182.47%和111.63%,每克胚性愈伤组织形成成熟体细胞胚分别为77、31、5个,萌发率分别为84.43%、51.10%、11.13%;植株成活率分别为73.00%、50.00%、6.70%,均呈下降趋势;3种愈伤体胚成熟的时间也存在显著差异,继代培养时间越长,体胚分化成熟过程越慢,愈伤组织形成子叶胚的时间最短为46 d,最长为74 d。因此,抗性黑松胚性愈伤组织在继代培养过程中胚性逐步降低,体胚发生和植株再生能力下降,短期培养的胚性愈伤组织(0.5 a)为抗性黑松体胚发生较为理想的初始材料,且愈伤组织继代培养时间不宜超过1.5 a。

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007产嗜铁素的相关基因克隆及条件优化

为了明确吡咯伯克霍尔德氏菌Burkholderia Pyrrocinia JK-SH007是否产嗜铁素,揭示其生防机制,本文通过CAS检测该菌株产嗜铁素的能力,并对其嗜铁素合成相关基因cepR进行克隆及序列分析,同时采用单因素试验及响应面法对菌株JK-SH007产嗜铁素条件进行优化。结果表明,菌株JK-SH007具有明显的产嗜铁素能力,其嗜铁素合成相关基因cepR大小为720 bp,与B. pyrrocinia(EU034001)的亲缘关系最近,同源性为99%,两者序列相似性为97%,13个位点出现SNP;另外菌株JK-SH007cepR基因编码的氨基酸序列有3个氨基酸发生了替换,两者一致性为97%。该菌产嗜铁素最优培养时间是15 h、p H 8、转速200r/min、最佳碳源和氮源分别是甘油和氯化铵;PB试验筛选出影响该菌株产嗜铁素的关键性因素分别是p H、加碳量、加氮量;CCD试验结果显示,p H和加氮量的交互作用较明显;最终采用Design-Expert软件分析出菌株JK-SH007产嗜铁素最佳方案为碳源加入量15.00 g/L、氮源加入量10.50 g/L、温度30℃、pH7.36,优化后菌株产嗜铁素能力由18.59提升到37.86,响应面优化产嗜铁素条件的效果是显著的,嗜铁素产量得到明显提高。

中国森林保护学科和专业的发展与展望

简要回顾中国森林保护学科和专业的发展及主要成就,阐述所面临的发展机遇与挑战,展望未来的发展方向,为森林保护学科和专业的高质量发展提供重要参考。

群体感应信号物质对吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007在杨树内定殖的影响

为了明确杨树溃疡病生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的群体感应系统是否与其内生定殖相关,本文通过群体感应指示菌紫色杆菌CV026和液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术(HPLC-Q-TOF-MS)确定其群体感应信号物质种类,并利用结晶紫染色、菌体回收、GFP标记等技术,研究其群体感应信号物质对该菌株生物膜及在杨树苗内的定殖能力的影响。结果表明,菌株JK-SH007产生的群体感应信号物质为含8个碳原子酰基侧链的辛酰基-L-高丝氨酸内酯(C8-HSL)。群体感应信号物质C8-HSL的添加对该菌株生物膜及在杨树苗内的定殖能力有影响,并且呈现低浓度促进,较高浓度抑制的规律。C8-HSL的添加与菌株JK-SH007生物膜的OD值和菌体量具有显著相关性,相关系数分别为0.923和0.756。当添加1.0%C8-HSL终浓度达到5×10^-8 g/L时,菌株JK-SH007生物膜的形成量达到峰值。荧光显微镜镜检发现,当添加100μL C8-HSL时,杨树组培苗根和茎中GFP荧光标记的菌株JK-SH007的定殖数量明显较CK多。菌株JK-SH007的群体感应与其在杨树内的内生定殖能力密切相关,群体感应信号物质C8-HSL具有增强菌株JK-SH007内生定殖的能力,同时也表明该物质有利于该菌株生防效果的发挥。

荧光假单胞菌的溶磷机制及其在杨树菌根际的定殖动态

【目的】探究荧光假单胞菌菌株JW-JS1的溶磷能力及其在杨树根际和菌根际的定殖动态,揭示菌株的溶磷机制并进一步阐明溶磷细菌与外生菌根真菌的互作机制,为杨树专用复合菌剂的开发与应用提供理论依据。【方法】通过液体培养试验分析荧光假单胞菌菌株JW-JS1培养液可溶性磷含量、pH和可滴定酸含量的变化,采用高效液相色谱(HPLC)法测定有机酸种类和含量,利用抗利福平标记法筛选稳定的标记菌株,运用灌根法研究其在杨树根际和菌根际的定殖动态。【结果】1)JW-JS1菌株培养液可溶性磷含量随接种时间延长逐渐增加,培养液pH与可溶性磷含量呈极显著负相关(r=-0.889^(**)),可滴定酸含量与可溶性磷含量呈极显著正相关(r=0.958^(**));2)JW-JS1菌株分泌的总有机酸量(434.39 mg·L^(-1))明显高于CK(25.94 mg·L^(-1))(P<0.05),共检测出草酸、酒石酸、柠檬酸、顺丁烯二酸和反丁烯二酸5种有机酸,其中,草酸含量(273.69 mg·L^(-1))明显高于其他种类有机酸,约占总有机酸量的63.01%;3)筛选出含有300μg·mL^(-1)利福平抗性的标记菌株JW-JS1Rif,与原始菌株相比,其菌落形态和溶磷能力均未发生明显变化(P<0.05);4)标记菌株在杨树根际和菌根际均能长期稳定存活并保持一定的定殖数量,随接种时间延长定殖数量呈下降趋势,定殖动态基本一致,其中,接种50天后定殖数量分别为5.2×10^(4)和4.5×10^(4)cfu·g^(-1)。【结论】荧光假单胞菌菌株JW-JS1的溶磷能力与培养液pH、可滴定酸含量和有机酸密切相关,特别是菌株分泌的草酸可能在溶磷过程中发挥重要作用。荧光假单胞菌菌株JW-JS1在杨树根际和菌根际均能长期稳定存活并保持一定的定殖数量。荧光假单胞菌菌株JW-JS1与红绒盖牛肝菌Xc是构建杨树专用功能复合微生物肥料的理想材料。

处理松材线虫病疫木的木腐真菌筛选

【目的】通过室内和田间试验筛选能在有效降解松材线虫病疫木的同时,还能够抑制松材线虫在疫木内生活移动的木腐真菌,为研发松材线虫病疫木高效环保除治新途径提供依据。【方法】利用选择培养基从腐朽松木样本中初筛出19个木腐真菌。在不同种类木腐真菌平板上接入2000条松材线虫共培养,从中筛选出能抑制松材线虫生长繁殖的菌株。通过测定受木腐菌侵染的黑松试样的失重率,判定木腐真菌对松木的腐解能力。选择能有效抑制松材线虫繁殖且降解松木能力强的菌株进行田间试验。采用液体摇瓶培养菌丝接种田间疫木,处理4个月后均匀钻孔取样,分析整段疫木内松材线虫数量变化。5—6月,收集天牛蛹室周围木样(0.5~1 cm),分析蛹室周围木样内松材线虫数量,同期在钢丝网罩中定期捕捉羽化的天牛,分析羽化天牛携带线虫的数量。【结果】室内筛选出7株能抑制松材线虫繁殖且降解木材能力强的木腐真菌,其中在菌株J5-2的平板上培养8天后,每皿仅分离出(18±10)条线虫,在硫磺菌和糙皮侧耳的平板上则完全分离不到松材线虫。在供试菌株中,硫磺菌对松木的降解能力最强,侵染黑松木材4个月后,试样失重率达到22.82%,其次是菌株S4,造成木块重质损失了21.68%。田间试验表明,7种木腐真菌接种4个月后,均能使疫木内松材线虫种群数量减少,其中菌株J5-2、硫磺菌、S4可使蛹室线虫数量减少65%以上,天牛携带线虫数量低于每头200条。菌株J5-2除害效果最佳,使疫木蛹室线虫数量减少72%,每只天牛携带松材线虫仅(15±4)条,最高携带量仅为60条。经鉴定菌株J5-2为Ceriporia sp.。【结论】菌株J5-2、硫磺菌和糙皮侧耳等木腐菌对松材线虫的抑制作用明显,硫磺菌和菌株S4降解木材的能力强,菌株J5-2、硫磺菌、S4在田间处理疫木的效果最好,可使疫木中线虫数量减低65%以上。利用木腐真菌就地处理松材线虫病疫木是一种高效环保新方法。

抗松材线虫病赤松体细胞胚的发育和成熟萌发

【目的】研究脱落酸、PEG、肌醇、碳源、凝固剂及培养方式等对抗松材线虫病赤松体细胞胚发育及成熟萌发的影响。【方法】通过对抗松材线虫病赤松种质资源库的调查与分析,选用诱导和增殖状态良好的抗松材线虫病赤松无性系22#-1和13#-1为供试材料,通过不同培养条件的对比试验,筛选出最优的抗病赤松体细胞胚发育及成熟萌发条件。采用SPSS17.0等软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】添加15 mg·L^(-1)ABA和140 g·L^(-1)PEG8000的LP培养基上,正常体细胞胚数达到171个·g^(-1),高于其他处理;在渗透剂方面,肌醇的浓度为8.0g·L^(-1)时,抗病赤松的正常体细胞胚数最多,达到179个·g^(-1),胚性愈伤组织直接放置于添加了肌醇的成熟培养基中,没有在中间过渡培养基中培养,因此可以缩短2~3周培养时间,在8周前后就形成了成熟的子叶胚;在碳源方面,添加60 g·L^(-1)麦芽糖的LP培养基上,正常的体细胞胚数达到235个·g^(-1),高于其他处理;在凝固剂方面,植物凝胶浓度为3.0 g·L^(-1)时,培养基凝固,软硬适中,产生的子叶胚生长良好,而培养基中添加了聚乙二醇(PEG),凝固剂琼脂从6.0 g·L^(-1)添加至12.0 g·L^(-1)时,培养基均不能凝固,愈伤组织无法生长,也无子叶胚形成;在培养方式方面,采用液-固增殖-固成熟方式培养时,胚性愈伤组织经11~12周发育为成熟体细胞胚,其中22#-1的正常体细胞胚数最多达到239个·g^(-1),高于其他处理;在体细胞胚萌发培养基上产生的体细胞胚的萌发率和植株转化率分别为67.2%和46.5%,再生植株移栽3个月后成活率为32.7%。【结论】将抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织置于15.0 mg·L^(-1)ABA、140 g·L^(-1)PEG8000、8.0 g·L^(-1)肌醇、60 g·L^(-1)麦芽糖、3.0 g·L^(-1)植物凝胶的LP培养基上,以液-固增殖-固成熟培养方式培养,成功获得了正常的体细胞胚和再生植株,同时可缩短2~3周培养时间,加快抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生的进程。研究结果可为抗病赤松的大规模繁殖和工厂化生产提供技术支持。

松材线虫细胞色素cyp-13A11基因RNA干扰载体的构建及其功能分析

【目的】构建松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,研究cyp-13A11基因的功能,为松材线虫病的生物防治提供理论依据。【方法】本文通过设计特异性引物,扩增松材线虫cyp-13A11基因片段,构建至pEASY-T1干扰载体上并转入Trans1-T1大肠杆菌菌株。采用浸泡法对松材线虫进行RNA干扰,通过qRT-PCR检测cyp-13A11基因的表达,将干扰后的线虫分别接种至长满灰葡萄孢菌丝的培养皿中和黑松苗上,测定RNA干扰后线虫的取食、繁殖、致病力和干扰效率等指标。【结果】成功构建了带有pEASY-T1干扰载体的Trans1-T1菌株并且能够合成cyp-13A11 dsRNA,通过RNA干扰抑制了松材线虫cyp-13A11基因的表达。松材线虫RNA干扰后接种至灰葡萄孢第3天,cyp-13A11 dsRNA处理松材线虫的取食面积较小,ddH2O处理松材线虫取食面积达到了整体的2/3;接种第6天,cyp-13A11 dsRNA处理松材线虫的取食面积为整体的1/3,而ddH2O处理松材线虫已将灰葡萄孢菌丝取食殆尽。ddH2O处理松材线虫的繁殖数量比cyp-13A11 dsRNA处理高4.28倍。松材线虫接种至黑松苗第10天,ddH2O处理黑松发病率为22.2%,而cyp-13A11 dsRNA处理黑松发病率为5.6%;接种至20天,ddH2O处理的黑松发病率为44.4%,cyp-13A11 dsRNA处理的黑松发病率为33.3%;直至接种30天,ddH2O和cyp-13A11 dsRNA处理的黑松全部枯萎,发病率达到100%。【结论】成功构建了松材线虫cyp-13A11基因RNA干扰载体,cyp-13A11基因表达沉默后影响了松材线虫的取食,降低了松材线虫的繁殖能力和致病力。

松材线虫病研究进展

松材线虫病是由松材线虫Bursaphelenchus xylophilus引起的一种世界性的重大检疫性森林病害。北美洲被认为是松材线虫病的原产地,亚洲的日本、中国和韩国是松材线虫病流行危害最严重的地区,欧洲也是受到松材线虫病严重威胁的地区。松材线虫病在亚洲感染松树后病害发展速度快,危害大,防治难,造成严重的经济损失。松材线虫病在自然情况下可以感染的松属树种51种,非松属树种16种。病害流行受到寄主植物种类、松材线虫、媒介昆虫以及其他一系列环境因素的影响。病原松材线虫致松树萎蔫速度快,致病机理复杂,至今未完全搞清。目前病害防控主要依赖于病害检疫、疫情监测、疫木除治隔离、媒介昆虫防治、健康松树注药预防等。抗病育种作为一项根本性措施,已经有良好开端,但真正发挥作用尚需一些时日。

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和抗生素混合药剂对松材线虫病的防治效果

为进一步弄清细菌在松材线虫病中的作用,探明甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和抗生素联合应用防治松材线虫病的效果,从松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)携带的细菌中筛选出能显著促进松材线虫存活、繁殖和加重病害发生的菌株,通过药敏试验,在30种抗生素中筛选出对病害相关细菌有较强抑菌活性的高效抗生素,研究甲维盐(甲氨基阿维菌素苯甲酸盐)对松材线虫携带致病细菌的抑制作用,并将高效抗生素和甲维盐混合,采用浸渍法测定混合液对松材线虫的毒杀性以及采用灌根法测定混合液对6月生马尾松苗(Pinusmassoni⁃ana)松材线虫病防治效果。结果显示,相比菌株AMA3-2和AMA3-3,菌株AMA3-1对松材线虫的存活、繁殖和病害发生方面具有更好的促进作用。环丙沙星和米诺环素对AMA3-1有较好的抑菌活性,而甲维盐对AMA3-1没有抑制作用。当混合液或甲维盐质量浓度为500 mg/L时,松材线虫的致死率可达80%以上。不同浓度的高效抗生素处理下,松材线虫的校正死亡率维持在较低水平(0.74%~2.43%)。当药剂质量浓度是500 mg/L时,在混合接种松材线虫和菌株AMA3-1前2 d及当天根施混合液、甲维盐和高效抗生素对松材线虫病的防治效果分别是50%、25%;33%、17%和17%、0%。结果表明,甲维盐或其混合液对松材线虫具有较高的毒杀作用,抗生素对其无明显的毒杀作用。一定条件下,甲维盐和抗生素混合,可提高松材线虫病的防治效果。

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007吲哚-3-乙酰胺IAA合成功能及其依赖途径鉴定

【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以B.pyrrocinia JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】B.pyrrocinia JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明B.pyrrocinia JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。

无菌松材线虫对华北落叶松、油松和马尾松的致病性

为了探讨松材线虫在松材线虫病中的作用,采用质量分数30%H_(2)O_(2)对华北落叶松、油松和马尾松的成熟种子进行灭菌处理,获得无菌实生苗;于无菌条件下,采用截顶法对4月龄无菌苗进行无菌松材线虫(500条/株)接种,观察松苗萎蔫情况,并于接种25 d后对植株取样进行线虫再分离,统计不同植株体内的线虫种群数量。结果表明:30%H_(2)O_(2)处理20 min,华北落叶松、油松和马尾松成熟种子无菌萌发率平均分别为60.1%、47.5%和67.7%。无菌松材线虫接种可导致3种无菌松苗发病,其症状与松材线虫病野外症状相似;接种25 d后,华北落叶松、油松和马尾松苗的萎蔫率分别为53.3%、78.3%和89.2%,对照植株无任何发病症状。线虫再分离结果表明:3个松种萎蔫植株体内均能再分离到松材线虫,马尾松和油松苗体内松材线虫数量高于华北落叶松,马尾松、油松和华北落叶松植株内再分离线虫数量分别为(2 628±3 322)、(2 627±2 287)和(1 144±608)条/株,经LB液体培养基检验,再分离线虫中未发现有任何细菌生长。无菌化处理未使松材线虫丧失其对3种松苗的致病性,松材线虫为引起松苗萎蔫的直接因素。

松材线虫检测技术研究进展

本文回顾了松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的各类检测鉴定方法,包括基本的形态学鉴定方法、常规的分子生物学检测方法、近年来兴起的LAMP与POCD-RPA检测方法、基于蛋白质的检测方法等,并对各种检测方法进行了评价。

响应面优化贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18产芽孢培养基和培养条件

【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株YH-18是优良的抗病促生微生物,其制成的微生物菌剂具有无害、高效、环保等特点。通过优化菌株YH-18的培养基组分和培养条件,提高发酵液中的有效活菌数,以期增加发酵液中的芽孢数,延长储存时间,降低发酵成本,提高其在工业化生产发酵中的质量效益。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)菌株YH-18发酵液芽孢数为质量指标,采用单因素分析法对发酵液培养基(碳源、氮源、无机盐及其浓度)和培养条件(温度、转速、初始pH、装液量、接菌量)进行初步筛选。将初筛结果结合响应面试验设计[plackett-burman(PB)、最陡爬坡试验、box-behnken design(BBD)],筛选出对贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18产芽孢影响最为显著的因素进一步验证,建立各显著性因素的二次回归方程模型,完成对菌株YH-18培养基组分和培养条件的系统优化。对比优化前后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株C58生长的抑制效果。每隔4个月测定优化后发酵液中的活菌数和芽孢数,考察优化发酵液的货架期。【结果】单因素试验初步筛选后得到培养基组分为1.0%(质量分数,后同)玉米浆干粉、1.0%葡萄糖、0.4%碳酸钙、0.4%磷酸氢二钾、0.2%的硫酸镁,培养条件为装液量50 mL三角瓶的40%、摇床转速200 r/min、培养温度33℃、接菌量0.5%、初始pH 7.3。将单因素试验后的结果进行PB试验筛选得到玉米浆干粉质量分数、装液量和接菌量是影响发酵液芽孢数最显著的3个因素。最陡爬坡试验确定了响应面试验因素水平的中心点为0.8%玉米浆干粉、接菌量1.1%、装液量32%。BBD试验最终确定,培养基组分(质量分数)为0.83%玉米浆干粉、1.0%葡萄糖、0.4%碳酸钙、0.4%磷酸氢二钾、0.2%的硫酸镁,培养条件为装液量31.53%、摇床转速200 r/min、培养温度33℃、接菌量1.12%、初始pH 7.3时,可获得较高发酵液芽孢产量。在本优化体系下,发酵液产品的芽孢数可达3.25×109cfu/mL,较LB基础培养基芽孢数提高了9.48倍。菌株优化后发酵液产品的去菌体滤液对根癌农杆病菌菌株菌株C58的抑制能力较未优化的明显增强,能在前16 h使根癌农杆菌菌株C58基本不生长,且在48 h后仍有较好的抑制效果。在50 L发酵罐中使用优化配方发酵得到的发酵液产品储存1 a后有效活菌数和芽孢数仍然分别为初始值的87.50%和89.74%,原始发酵方法的发酵液产品在储存4个月后有效活菌数仅为初始值的0.06%。【结论】确定了贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18摇瓶发酵产芽孢的最适培养基和培养条件。优化后显著提高了发酵液芽孢数,增强了发酵液去菌体滤液的抑菌能力,延长了产品储存时间,降低了生产成本,为贝莱斯芽孢杆菌菌株YH-18未来的工业化生产和推广应用提供了重要的技术支持。

抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织的超低温保存

本实验以抗松针褐斑病湿地松胚性愈伤组织27-1为材料,运用正交实验方法探究其超低温冷冻保存方法。结果表明:预培养时间、二甲基亚砜(DMSO)浓度、蔗糖浓度、聚乙二醇(PEG) 8000浓度和解冻温度对解冻后愈伤组织的活性均有显著影响。结合解冻后愈伤组织活力及其恢复生长情况,得出效果较好的超低温保存方法为:继代培养10~12 d生长状态良好的愈伤组织,添加0.5 mol/L蔗糖的高渗培养基预培养36 h;5%DMSO,15%PEG 4000,0.5 mol/L蔗糖3种冷冻保护剂组合使用,程序降温至-80℃停留30 min后投入液氮罐中保存;32℃水浴解冻,蔗糖溶液清洗后转接至LP培养基上恢复生长。在此程序处理下,冷冻90 d的愈伤组织1个月后可恢复再生,再生率最高达100%,再生愈伤组织生长状态良好并依然保持分化成熟体胚的能力。

两株我国南北松材线虫虫株形态指标与致病力比较

【目的】松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是世界多国公认的重大外来入侵物种,可引起松树大量死亡。目前,该虫已扩散至我国辽宁省的多个区县,打破了松材线虫最适温度线。通过对不同地理来源的两株松材线虫虫株的比较研究,试图阐释松材线虫向我国北方快速扩散的原因。【方法】通过比较我国南方松材线虫虫株AMA3和北方松材线虫虫株FCBX的形态指标值、不同温度条件下在灰葡萄孢培养基上的繁殖力,进而测定两虫株对黑松的致病力以及在黑松体内的繁殖量差异,解析松材线虫在我国北方地区的适应性。【结果】虫株AMA3和FCBX在形态学特征上无显著差异,均在伞滑刃属线虫测量范围之内;在15~35℃范围内,北方虫株FCBX和南方虫株AMA3在灰葡萄孢培养基上,随着温度的升高,繁殖量逐步增加。且FCBX虫株的繁殖数量除在30℃条件下稍低外,在其他温度条件下繁殖量均高于AMA3的繁殖数量。在低温(15~20℃)条件下,FCBX虫株的繁殖数量远高于AMA3虫株,差异显著;接种AMA3和FCBX后,黑松感病程度具有差异,FCBX相对于AMA3的致病力更强。在接种35 d后,FCBX的对黑松死亡率达到80%,感病指数为85;而AMA3对黑松的死亡率为60%,感病指数为73;接种35 d后,FCBX在黑松体内的繁殖数量大于AMA3虫株,但差异不显著。【结论】与南方虫株AMA3相比,北方虫株FCBX在灰葡萄孢上的繁殖能力、黑松体内的繁殖数量、对黑松的致病力等方面更强。松材线虫已突破最适温度线,在北移过程中经过了低温驯化,在低温条件下具有更强的繁殖能力和对低温的适应性。

水杉赤枯病综合营林生态控制技术研究

【目的】水杉赤枯病为寄主主导性病害,生态调控措施是其最佳防治策略之一。营林技术是生态调控防治病害的基础性措施。探讨营林调控技术措施对水杉赤枯病防治的效果,为赤枯病的生态防治提供指导。【方法】选择上海浦东新区绿带中的水杉纯林和混交林,采用间伐抽稀、人工透光疏枝、林间清理、施肥、松土、纯林改混交林等单因子营林措施分别开展调控试验,选择水杉纯林开展多因子营林措施随机区组综合调控试验,分析营林措施对赤枯病的防治效果。【结果】间伐抽稀、及时清理病落叶和枯死树桩以及松土,可使赤枯病病情指数有不同程度下降;轻度修剪对降低发病指数有一定作用,中度修剪对病情指数基本没有作用,重度修剪后病情指数不降反升。仅施用氮肥会使发病率、病情指数上升,而施用磷钾肥则可明显降低发病率,同时施用氮磷钾肥后病情虽有下降但不明显。进行纯林混交改造对病情的降低可起到较为明显的作用。综合营林随机区组试验得到影响感病指数减退率的主次因素依次为林相改造>林间卫生>施肥>抚育,最优综合营林措施组合为林地清扫1次+轻修剪通风+松土深翻+除草+施过磷酸钙和氯化钾+纯林改混交。【结论】合理的营林措施有助于控制水杉赤枯病的发生与危害,而综合营林措施对赤枯病具有协同生态调控作用。

自拟补气通目汤治疗气血两虚型非动脉炎性前部缺血性视神经病变的临床疗效观察

目的:观察自拟补气通目汤治疗气血两虚型非动脉炎性前部缺血性视神经病变的临床疗效。方法:选取2019年6月~2021年5月苏州市中西医结合医院和苏州大学附属第二医院收治的中医辨证为“气血两虚型”的非动脉炎性前部缺血性视神经病变患者80例,采用掷硬币法分为对照组(n=40,48眼)和观察组(n=40,46眼)。对照组给予西药治疗,观察组在西药基础上给予自拟补气通目汤治疗,连续治疗3个疗程。统计两组疗效,检测两组闪光视网膜电图、国际标准视力表检测最佳矫正视力(BCVA)、平均光敏感度、平均视野缺损值及眼动脉血流动力学的变化。结果:观察组显效和有效共42例,总有效率为91.30%,高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组a波和b波的振幅、潜伏期与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05),视网膜振荡电位(OPs)总振幅较治疗前升高(P<0.05)。与对照组比较,观察组治疗后的OPs总振幅明显更高(P<0.05)。治疗后,两组BCVA、平均视野缺损值较治疗前降低,平均光敏感度较治疗前升高(P<0.05)。与对照组比较,观察组治疗后的BCVA、平均视野缺损值明显更低,平均光敏感度明显更高(P<0.05)。治疗后,两组眼动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)较治疗前降低,收缩期峰血流速度(PSV)较治疗前升高(P<0.05)。与对照组比较,观察组治疗后的眼动脉PI、RI明显更低,PSV明显更高(P<0.05)。结论:自拟补气通目汤治疗气血两虚型非动脉炎性前部缺血性视神经病变可改善眼动脉血流动力学,改善视力,提高疗效。

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量IBA和NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好;悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。

菊方翅网蝽在南京分布及其对中国的风险分析

【目的】了解菊方翅网蝽在南京的分布及危害情况,并确定其在中国的潜在适生分布区和风险大小,为菊方翅网蝽的防控提供参考。【方法】采用实地踏查的方式对南京市8个主城区的公园、广场、绿道等进行调查;采用MaxEnt生态位模型,结合地理信息系统(ArcGIS)预测菊方翅网蝽在中国的潜在适生区;采用多指标综合评价法,从传入的可能性、定殖的可能性、扩散的可能性、受害寄主的经济重要性和危险性管理难度方面,对菊方翅网蝽在中国的入侵风险进行定量和定性分析。【结果】在南京8个主城区均发现有菊方翅网蝽入侵,主要危害菊科杂草,在菊花上危害较轻;预测菊方翅网蝽在中国的潜在适生区约占中国国土面积的40%;菊方翅网蝽在外来入侵有害生物多指标综合评价体系中得分为2.05,属高度风险有害生物。【结论】菊方翅网蝽在南京市已普遍发生,中国潜在适生范围广、风险较大,应加强对该虫的监测,避免进一步扩散。