纳米载体介导的PiggyBac转座子制备CAR-NK细胞

目的:探索新型阳离子聚合物纳米载体mPEG-P(Asp-AED-g-HFB)(PAEF)和PiggyBac转座子介导嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰自然杀伤(natural killer,NK)细胞的基因转染方法,为肿瘤细胞免疫治疗制剂研发提供新策略。方法:制备PAEF/DNA(转座酶+转座子)复合物,通过Nano-ZSE动态光散射系统(Malvern Instruments)测量PAEF/DNA复合物的粒径分布和表面电位;DNA凝胶电泳验证PAEF的DNA包封率、释放性和稳定性,结合粒径电位选择进入细胞合适的N/P值;CCK-8细胞毒性实验分析不同N/P值条件下PAEF/DNA复合物的细胞毒性;荧光显微镜及流式细胞术检测细胞转染效率,评估PAEF基因转染载体的可行性。结果:PAEF可包裹DNA形成粒径100~150 nm的纳米复合物,后者易于介导DNA进入细胞;当N/P值为20时,PAEF即可实现DNA的完全包裹;在还原剂二硫苏糖醇(dithiothreotol,DTT)存在下,PAEF对DNA有良好的释放能力;N/P值为80时,PAEF/DNA复合物转染组的NK-92细胞存活率显著高于脂质体转染组[(72.50±3.9)%vs(64.03±1.8)%,P<0.05];荧光显微镜下观察发现,PAEF/DNA组荧光多、荧光强度大;流式细胞术显示最高转染效率为83.4%。结论:纳米载体PAEF通过静电吸附作用能够很好地包裹DNA,且生物相容性好,基因转导效率较高,成功制备的CAR-NK细胞为过继免疫治疗提供良好的实验基础。

浅析法海寺《帝释梵天礼佛图》中的女神服饰纹样

法海寺壁画是明代寺观壁画的代表,其繁缛华丽的服饰纹样具有十分显著的时代特征和研究价值,壁画中的女神服饰纹样融合了明代宫廷服饰纹样的元素,是当时社会生活的映射。文章以法海寺壁画《帝释梵天礼佛图》中女神着装及纹样分析为依据,总结出了法海寺女神服饰纹样当中最具代表性的纹样类别,分析其造型特点及美学价值,更好的传承壁画服饰艺术所蕴含的文化内涵,为探究法海寺壁画中的服饰纹样提供研究依据。

Road to Exchanges and Mutual Learning

The Silk Road shares much with silk.Sometimes it is like flowing silk threads.Some lines are clear,and some are intermittent.And sometimes it is like a large silk net covering a vast land with gorgeous patterns.

靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的嵌合抗原受体修饰T细胞对肝癌细胞SMMC-7721的特异杀伤作用

目的观察靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体修饰T细胞(EGFRvⅢ/2CAR-T)对肝癌细胞SMMC-7721的特异杀伤作用。方法二代EGFRvⅢCAR表达框(EGFRvⅢ/2CAR,1374bp)克隆入PiggyBac转座子载体PB513B-1的XbaⅠ和BamHⅠ位点,转座子载体(PB-EGFRvⅢ/2CAR)和转座酶双质粒电穿孔(1×20ms,840V)转导人外周血T细胞,流式细胞术检测EGFRvⅢ/2CAR表达。Westernblot法检测SMMC-7721中EGFRvⅢ表达。EGFRvⅢ/2CAR-T细胞和SMMC-7721细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测特异杀伤作用、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测干扰素(IFN)-γ分泌水平。结果重组载体PB-EGFRvⅢ/2CAR经XbaⅠ和BamHⅠ酶切、电泳分析及DNA测序证明基因片段连接无误、核酸序列正确。流式细胞术检测结果转座子/转座酶双质粒电穿孔外周血T细胞EGFRvⅢ/2CAR表达率为55.5%。Westernblot显示SMMC-7721在相对分子质量145000处EGFRvⅢ表达。EGFRvⅢ/2CAR-T和SMMC-7721共培养24h,LDH释放试验证明肿瘤特异性杀伤,与效靶比呈正比(E∶T为1∶1、5∶1、10∶1、15∶1、20∶1);ELISA检测到IFN-γ分泌量为(1060.1±89.0)pg/ml,明显高于对照组(P=0.000)。结论靶向EGFRvⅢ的二代CAR-T细胞能够特异杀伤EGFRvⅢ+的肝癌细胞SMMC-7721。