全基因组测序分析山东省胶东地区禽源弯曲菌基因组特征和耐药性

为了解山东省胶东地区禽源弯曲菌的耐药特征、毒力特征及分型遗传进化关系,对2021-2022年来自胶东地区26个养禽场的31株弯曲菌,采用肉汤稀释法进行抗生素敏感性检测,然后基于全基因组测序结果分析其耐药基因、毒力基因、多位点序列分型,并进行全基因组单核苷酸多态性(wgSNPs)遗传进化分析。结果显示:31株弯曲菌对四环素的耐药率为96.77%,对环丙沙星、萘啶酸的耐药率均为93.55%;31株菌呈现出6种耐药谱,15株菌耐3类及以上药物。基于全基因组测序结果,31株弯曲菌分为20个序列型(ST),其中结肠弯曲菌优势克隆群为CC828,空肠弯曲菌呈现多样性分布;携带喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等多种类型耐药基因,携带已知功能的6类42种毒力基因。经wgSNPs遗传进化分析,结肠弯曲菌优势克隆群CC828分布在3个小分支中,空肠弯曲菌分布在7个小分支中,分布分散。结果表明:胶东地区禽源弯曲菌耐药严重,耐药谱较广,携带的耐药基因与耐药表型有一定关系;携带毒力基因数量较多,结肠弯曲菌有优势克隆群,空肠弯曲菌ST型呈多样性,分离菌株具有较高的遗传多样性。本研究为降低禽源弯曲菌向人类传播的概率,实现“同一健康”提供了技术支撑。

沙门菌分子分型技术研究进展

与传统分型技术相比,分子分型技术以其高分辨率、高重复性、标准化等优点,已成为沙门菌致病性、遗传关联性、溯源和传播路径等研究领域的重要工具。目前,沙门菌分子分型技术主要包括三大类,其中基于限制性内切酶的分子分型方法以脉冲场凝胶电泳和扩增片段多态性为主,基于PCR扩增的分子分型方法以肠杆菌基因间重复共有序列PCR和多位点可变串联重复序列为主,基于测序的分子分型方法以多位点序列分型、规律的成簇间隔短回文重复序列和全基因组测序为主。这三大类分子分型技术均具有灵敏度高、重复性好、结果准确等优点,有助于揭示不同沙门菌间的宿主传播关系、地域传播关系。但这些方法也都存在不同程度的应用局限性,在实际应用中可根据实验室条件及研究需求选择其中一种或联合使用多种分型技术,从而达到对沙门菌精准分型的目的。本文对限制性内切酶、PCR扩增以及测序这三大类沙门菌分子分型方法的国内外相关研究成果进行总结归纳,以期为食品中沙门菌监测、风险评估以及溯源和预警提供参考。

产气荚膜梭菌α-毒素基因数字PCR方法的建立及其在标准物质研制方面的应用

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L,退火温度为60℃。利用建立的ddPCR方法检测单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌的DNA,结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。合成产气荚膜梭菌α-毒素基因,制成DNA标准品,选取3个稀释梯度的标准品进行重复试验,组内和组间变异系数均小于5%,证明该方法具有较好的重复性。采用7个稀释梯度的标准品进行重复检测,计算出该方法的检测限为12.39 copies/μL,定量限为33.97 copies/μL。通过对68份临床样品进行检测,证实该方法可用于临床,且用于检测质粒DNA时无明显的基质效应。应用ddPCR方法对标准品进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室进行定值,最终获得了国家市场监督管理总局颁发的标准物质证书(GBW(E)091237)。α-毒素基因ddPCR方法的建立和DNA标准物的研制,为产气荚膜梭菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。

生鲜乳中16种致病微生物多重荧光定量PCR集成检测技术的建立与初步应用

为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏感性等,建立了稳定的4组多重集成荧光定量PCR反应体系,并利用人工污染的生鲜乳样品对所建立的方法和传统培养法进行了验证比较。结果显示:各对引物探针对目标菌株均能有效识别并扩增,每组体系中引物探针未发现交叉反应,对其余3组体系的12株非目标菌均未有特异性反应;组内和组间变异系数均低于3%;该方法对布鲁氏菌的最低检出限为10^(2) CFU/mL,对阪崎肠杆菌、志贺菌、沙门菌等7种致病微生物的最低检出限为10^(3) CFU/mL,对蜡样芽胞杆菌、弯曲杆菌、结核分枝杆菌等8种致病微生物的最低检出限为10^(4) CFU/mL;所建方法和传统培养法对人工污染不同致病菌的各25份样品检测结果基本一致。结果表明,本研究建立的多重集成荧光定量PCR方法灵敏度高,特异性及重复性好,可实现对生鲜乳样品中多种致病微生物的快速高效检测,为生鲜乳微生物性风险监测提供了技术支撑。

猪ETECK88ac、K99黏附素蛋白生物信息学分析及多表位疫苗载体构建

由猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备ETEC疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析ETEC K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种同时含有K88ac、K99基因的多表位重组疫苗载体。首先应用ProParam、SOPMA和GOR软件分析K88ac、K99蛋白的理化特性及二级结构,应用IEDB与ABCpred软件预测二者的B细胞抗原表位,应用RANKPEP软件预测Th细胞表位,应用IEDB与NetMHC-4.0软件预测CTL细胞表位;然后将预测的B细胞、Th细胞和CTL细胞抗原表位加上接头序列,按照一定顺序进行组合,分别设计多表位连接多肽Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;最后通过分析抗原性、致敏性,筛选抗原性最强的连接多肽,并对其进行表征。结果显示:共筛选出9个抗原表位,按照不同的排列组合获得了3种连接多肽,其中连接多肽Ⅱ抗原性最强,为0.906 8;应用AllerTOP v. 2.0在线工具对连接多肽Ⅱ进行过敏性预测,发现其没有过敏性;应用ZpGJn4在线工具对连接多肽Ⅱ进行三维建模,发现其结构表位暴露性较好,易与抗体结合,在蛋白分子构象上符合表位设计要求。将该多表位肽的氨基酸序列按照乳酸菌密码子嗜好性反向翻译为核苷酸序列,随后插入pET28a载体中获得了p ET28a-KT质粒。结果表明,构建的连接多肽Ⅱ适合作为多表位疫苗的备选载体蛋白。多表位肽的设计及pET28a-KT质粒的获得为下一步构建表达ETEC多表位抗原的重组乳酸菌提供了技术支撑。

媒介地理学视角下旅游度假区的数字化地方营造——以秦皇岛阿那亚为例

随着中国旅游消费转型升级的加快,休闲度假产业快速发展,旅游度假区成为满足度假者日常生活与旅游深度体验的二元复合空间。其中,数字媒介在建构旅游度假区空间形象、开展目的地营销及形成地方认同等方面发挥了关键作用。文章在构建基于媒介地理学视角的旅游度假区数字化地方营造理论模型基础上,以秦皇岛阿那亚为例,综合运用实地调研、半结构式访谈与文本分析等方法,从表征塑造、关系建构、连接方式和权力博弈4个方面分析了旅游度假区数字化地方营造的运行逻辑与机制。研究发现,数字媒介影响下旅游度假区的地方建构日益复杂,以美学为基础的虚实空间表征更符合度假者基于数字媒介进行旅游体验的需求;数字社会关系承载了度假者与度假区的情感联结,网络虚拟社群参与建构新的在地社会关系;数字技术改变了度假区与度假者之间的互动连接方式,度假者的远程在线感知与在地体验需要进行平衡;在虚拟与现实的交互中,只有通过自上而下与自下而上相结合的方式调动多主体参与度假区地方意义建构,才能形成最终的价值认同。研究拓展了媒介地理学理论的旅游应用场景,解析旅游目的地“网红”变“长红”的内在逻辑,结果可为数字媒介时代旅游度假区科学规划、精准营销以及目的地可持续发展实践提供借鉴和参考。

基于数据挖掘分析针灸治疗混合痔术后肛门疼痛的取穴规律

目的:基于数据挖掘的方法分析针灸治疗混合痔术后肛门疼痛的取穴规律。方法:检索2003年4月20日至2020年9月24日中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库中关于针灸治疗混合痔术后疼痛的所有文献,共419篇。运用SPSS 26.0、SPSS modeler 18.0软件对针灸治疗混合痔术后疼痛的取穴规律进行统计分析。结果:针灸治疗混合痔术后疼痛腧穴使用频次,从高到低依次为承山、长强、二白、次髎、白环俞、下髎、中髎、足三里、上髎等;经脉以膀胱经、任脉、脾经、督脉为主;部位以腰骶部及下肢取穴最多;特定穴以络穴、经外奇穴最常用。结论:基于数据挖掘的方法系统分析了针灸治疗混合痔术后疼痛取穴规律,穴位以腰骶部和四肢为主,符合临床治疗规律。

DEM数据坐标转换和成果质量的检查方法

针对数字高程模型(DEM)数据三维坐标转换和转换成果质量检查的需求,本文研究了基于阿尔克·吉斯(ArcGIS)开发引擎平台的DEM数据的平面和高程坐标转换技术方法;同时根据DEM数据本身的特点,研究确定了合理的DEM数据转换成果质量检查内容和指标,解决了DEM数据转换成果质量检查标准的实际生产应用问题。本项目研究成果可保障北京市DEM数据在统一的基准下应用,推动与测绘地理信息相关的规划、建设和管理工作。

北京市基准站北斗三号卫星数据质量评估

为分析北斗三号卫星导航系统(BDS-3)各频点数据在北京范围内的数据质量差异,本文使用自研全球卫星导航系统(GNSS)数据质量分析软件,从周跳比、信噪比、数据完整率、多路径效应等指标对测站进行了统计分析,对北京连续运行参考站系统(CORS)多个测站的BDS-3各频点观测数据进行质量评估。实验结果表明:BDS-3各频点均具有良好的一致性,各频点数据完整率大致相当,新增的B2a信号信噪比明显高于B1C信号,北京地区倾斜地球同步轨道(IGSO)卫星数据完整率和多路径等指标质量优于中圆地球轨道(MEO)卫星等。

南宁地区0~15岁儿童甲状腺功能检测指标参考区间的建立

目的建立南宁地区0~15岁儿童甲状腺功能检测指标即促甲状腺激素(TSH)、游离甲状腺素(FT4)和游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的参考区间。方法选取2018年10月至2023年8月在广西中医药大学附属国际壮医医院就诊的0~15岁健康儿童1289例,采用化学发光微粒子免疫检测法测定血清TSH、FT4和FT3浓度。依据美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP28-A3c文件要求,采用非参数百分位法建立南宁地区0~15岁儿童TSH、FT4和FT3的参考区间。结果TSH(男性)参考区间为:0~<1月0.88~7.81μIU/mL,1月~15岁0.59~5.06μIU/mL。TSH(女性)参考区间为:0~<1月0.93~8.42μIU/mL,1月~15岁0.60~4.30μIU/mL。FT4(男性)参考区间为:0~<1月0.99~1.92 pg/mL,1月~15岁0.86~1.33 pg/mL。FT4(女性)参考区间为:0~<1月1.05~2.06 pg/mL,1月~15岁0.85~1.37 pg/mL。FT3参考区间为:0~<1月2.16~4.24 pmol/L,1月~<11岁2.75~4.49 pmol/L,11~15岁2.45~4.34 pmol/L。不同性别和年龄组间TSH、FT4和FT3水平存在显著性差异(P<0.05)。结论成功建立了南宁地区0~15岁儿童TSH、FT4和FT3的参考区间,不同性别和年龄组间差异显著。

NKG2A-HLA-E轴介导NK细胞应答在病毒感染性疾病中的作用及机制研究进展

自然杀伤(NK)细胞主要通过迅速释放细胞毒性介质以及细胞因子直接杀伤病毒感染的靶细胞。NK细胞表面抑制性和活化性受体的平衡以及靶细胞上相应配体的表达均参与调控NK细胞的杀伤功能。其中NK细胞2组成员A(NKG2A)是NK细胞上备受关注的抑制性受体之一,通过与其配体人类白细胞抗原E(HLA-E)的相互作用,可抑制NK细胞对自身正常组织细胞的杀伤活性。研究发现病毒感染细胞表面HLA-E表达上调,并且可与病毒蛋白来源的多肽结合形成复合物,通过与NKG2A的相互作用调控NK细胞功能,从而参与病毒感染性疾病发病过程。本文总结了NKG2A与HLA-E分子互作特点,以及NKG2A-HLA-E轴参与调控NK细胞的功能机制,有助于了解NK细胞在病毒感染性疾病中的重要作用。

基于高通量培养分析稻虾共作模式土壤的细菌群落

高通量测序技术的发展发现并鉴定了土壤微生物的未培养物种,然而,仅依赖非培养的高通量测序无法获得发挥关键功能的微生物培养物,限制了对其功能的验证及其应用,这对关键功能微生物的机理性研究和应用具有一定的局限性.本研究以稻虾共作和水稻单作两种稻作模式的土壤样品为研究对象,分别对比了传统平板涂布、96孔培养板划线分离以及将非培养和培养法相结合的———“96孔高通量培养法”3种方法的土壤细菌分类差异、菌群多样性、组成特异性以及细菌功能特征.结果表明,相对于传统涂布培养法,96孔高通量培养法所获取的细菌数量高约5倍,能鉴定到属的培养物高约4倍,预测功能鉴定提高约2倍.由此可见,“96孔高通量培养法”大大提高了对土壤细菌培养物的获取和鉴定率.本研究弥补了传统培养法的获得率低的不足,拓宽了高通量培养技术的应用领域,同时,也为进一步揭示稻虾共作模式参与土壤生态变化过程的微生物机制提供研究基础.

风电叶片用拉挤板应用现状及发展趋势

本文介绍了风电叶片用拉挤板的国内外研究发展历程及现状,共涉及五种不同材料体系的拉挤板,分别为碳纤维拉挤板、玻纤拉挤板、碳玻混拉挤板、免脱模布拉挤板及聚氨酯拉挤板。分析了拉挤板相比较于传统的真空灌注、预浸料复合材料的应用优势和面临的挑战。结合目前应用现状,针对各种材料体系的拉挤板分别提出了未来重点关注方向和发展趋势:玻纤拉挤板因其低成本的优势,在未来陆上风电叶片中仍会占据主流,并将向更高模量及更低成本的方向发展;随着海上风电的发展及碳丝国产化进程加速,碳纤维拉挤板将会有更广阔的应用前景;碳玻混拉挤板、免脱模布拉挤板及聚氨酯体系拉挤板减重或降本优势明显,但仍需进一步开展应用研究。

老年冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140与冠状动脉狭窄程度的相关性

目的:分析老年冠心病病人血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、生长分化因子-15(GDF-15)和血小板颗粒膜蛋白-140(GMP-140)与冠状动脉狭窄程度的相关性。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院2022年3月—2023年3月收治的97例老年冠心病病人为冠心病组,并选取同期60名健康体检者为对照组,检测血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平。按照冠心病病人冠状动脉狭窄程度分为轻度狭窄组、严重狭窄组,比较轻度狭窄组、严重狭窄组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平,采用Spearman相关性分析法分析血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平与冠状动脉狭窄程度的相关性,并使用受试者工作特征曲线(ROC)分析MCP-1、GDF-15、GMP-140评估冠状动脉狭窄程度的效能。结果:冠心病组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。严重狭窄组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平高于轻度狭窄组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,MCP-1、GDF-15、GMP-140联合评估冠状动脉狭窄程度的曲线下面积为0.887,敏感度、特异度分别为88.89%、88.46%。结论:冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平显著升高,且与冠状动脉狭窄程度进展密切相关,联合检测血清MCP-1、GDF-15、GMP-140可有效评估冠状动脉狭窄程度。

以肝功能衰竭分级为基准的针对性护理结合家庭赋权心理疏导对肝衰竭患者生活质量及疾病感知压力的影响

目的探讨以肝功能衰竭分级为基准的针对性护理结合家庭赋权心理疏导对肝衰竭患者生活质量及疾病感知压力的影响。方法选取2020年1月至2022年1月我科收治的92例肝衰竭患者作为研究对象,以随机数字表法将其分为对照组和观察组,各46例。对照组实施常规护理,观察组实施以肝功能衰竭分级为基准的针对性护理结合家庭赋权心理疏导。比较两组的干预效果。结果干预后,观察组的总胆红素(TBIL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平低于对照组(P<0.05)。干预后,观察组的生活质量指数(QLI)各维度评分高于对照组(P<0.05)。干预后,观察组的轻度感知压力占比高于对照组,重度感知压力占比低于对照组(P<0.05)。结论以肝功能衰竭分级为基准的针对性护理结合家庭赋权心理疏导可促进肝衰竭患者肝功能改善,提高其生活质量,减轻疾病感知压力,值得推广。

基于“创新创业基础”课程的“专创融合”教学设计与实践

专业教育与创新创业教育融合发展是高等学校的一项重要课题.“创新创业基础”课程是高校创新创业教育体系的基础,教师可以在坚持以学生为中心的理念基础上,对项目式教学模式、游戏、作业等进行“专创融合”教学设计,使项目、游戏、作业成为创新创业教学内容的载体.实践表明,“专创融合”教学设计不仅为学生创造了专业实践机会,也提升了课程项目的质量,促进了创新创业教育与专业教育的融合发展.

基于改进Seq2Seq模型的电力智能客服系统设计方法研究

随着电力用户规模不断增长、业务量不断扩大,传统客服模式已不能满足繁重的用户业务咨询需求,在此背景下设计一种精准的客户服务模式就显得至关重要。针对这一需求,文章首先提出了一种融合注意力机制+双向长短期记忆网络+双向门控循环单元(Attention+BiLSTM+BiGRU)的序列到序列(Seq2Seq)模型;然后通过对上下文语义信息的深层时序特征提取及赋权,有效提高了模型对话性能;最后通过算例仿真,实验结果从定性和定量的角度验证了所述方法具有回答效果更佳、问题识别能力更高的特点,对在线电力智能客服系统的设计和实现具有一定的参考价值。

弯曲杆菌16S rRNA基因质粒DNA标准物质的研制

弯曲杆菌引起的食源性胃肠道疾病是21世纪人类面临的一项严重经济和公共卫生负担。当前国内外进行的弯曲杆菌属分子生物学检测方法研究的靶基因均为16S rRNA基因。为满足检测试剂标准化需求,制备了候选弯曲杆菌16S rRNA基因质粒DNA标准物质,经均匀性和稳定性检验,证实其于-20℃保存12个月,4℃短期保存8 d,反复冻融30次后依然稳定。对候选标准物质采用微滴式数字PCR(ddPCR)方法,联合8家实验室进行联合定值,对不确定度进行量化、合成,确定了标准物质的扩展不确定度。最终确定弯曲杆菌16S rRNA质粒DNA标准物质标准值为4.95×10^(3)copies/μL,扩展不确定度(k=2)为0.47×10^(3)copies/μL。临床试用结果表明,该产品具有良好的均匀性和稳定性。该标准物质的研制,为我国弯曲杆菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。

三类禽源碳青霉烯类耐药大肠杆菌流行病学调查及全基因组测序分析

【目的】研究不同禽源碳青霉烯类耐药大肠杆菌(carbapenem-resistant Escherichia coli,CREC)的群间分布、耐药特征及菌株间亲缘关系,为阻断CREC的潜在危害提供技术支持。【方法】在胶东地区采集肉鸡、蛋鸡、水禽三类家禽泄殖腔拭子1131份,利用选择性分离培养、质谱鉴定、PCR、微量肉汤稀释法、多位点序列分型(MLST)及全基因组测序(WGS)等方法进行CREC菌株鉴定与分析。【结果】共分离出364株bla NDM基因阳性的CREC菌株,分离率为32.18%,阳性场总体占比为76.32%,肉鸡场和个体阳性率均最高,分别为93.33%和55.56%。三类禽源菌株均多重耐药,83.65%菌株对8类及以上药物同时耐药,对多数测试药物耐药率在80%以上。肉鸡多重耐药问题最严重,水禽次之,蛋鸡相对较轻。45株全基因组测序的CREC菌株携带12类52种耐药基因,4种bla NDM变异体,以bla NDM-5(77.78%)为主,三类家禽对同类耐药基因的检出率存在差异。共检出46种ST型,多样性比为44.23%。三类家禽CREC菌株间单核苷酸多态性(SNPs)差异位点为82~71307个,且携带的优势型不同。【结论】携带bla NDM的CREC在不同家禽养殖场尤其是肉鸡场广泛存在,以bla NDM-5亚型最为常见,对多种抗菌药普遍耐药,且携带大量耐药基因,以质粒传播为主。CREC菌株在三类家禽中呈多样化分布,且多数菌株间亲缘关系相差较远。提示应针对不同动物群体,加强监测和影响因素研究,以降低CREC的潜在风险。

PI3K/AKT通过激活糖酵解促进巨噬细胞M1极化

目的探讨PI3K/AKT通路在巨噬细胞糖酵解中的作用,拟从代谢重编程的角度阐明巨噬细胞M1极化的机制。方法以脂多糖(LPS)处理RAW264.7细胞建立巨噬细胞M1极化模型;使用2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解过程;使用LY294002抑制PI3K/AKT活性;Seahorse XF糖酵解速率试剂盒检测巨噬细胞糖酵解水平;q-PCR方法检测巨噬细胞M1型标记(诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素1β),葡萄糖酵解相关基因(Glut1、HK2、Idha和Aldoa);Western blot方法检测p-p38、p38、p-ERK、ERK、p-p65、p65、IκB、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和GAPDH水平。结果在LPS诱导的RAW264.7细胞M1极化模型中,p-mTOR和p-AKT水平升高,HIF-1α表达水平升高,糖酵解相关基因水平升高,细胞外酸化率升高,表明LPS诱导细胞糖酵解水平升高;2-DG抑制糖酵解,降低M1极化相关因子的mRNA水平;LY294002抑制PI3K/AKT活性,降低p-mTOR水平和HIF-1α的蛋白水平,降低糖酵解相关基因水平,进而抑制RAW264.7糖酵解水平和M1极化过程。结论在RAW264.7细胞中PI3K/AKT信号通路通过激活mTOR信号通路,激活糖酵解,从而激活巨噬细胞M1极化过程。