西洋参花多糖闪式提取工艺优化及抗氧化活性研究

目的:研究西洋参花多糖闪式提取的最佳工艺条件及抗氧化活性。方法:以西洋参花为原料,考察提取电压、液料比、提取时间对西洋参花多糖得率的影响,采用响应面法优化西洋参花多糖闪式提取工艺。通过测定西洋参花多糖对DPPH自由基和羟基自由基的清除作用及总还原力,考察西洋参花多糖的抗氧化活性。结果:通过实验得到西洋参花多糖的最佳提取工艺条件为:提取电压:130 V,液料比:30:1 mL/g,提取时间:100 s。在此条件下,西洋参花多糖得率为11.12%±0.23%,与模型预测值相当;西洋参花多糖体外抗氧化显示其对DPPH自由基和羟基自由基清除率的IC_(50)值分别为1.34、1.42 mg/mL,且具有一定还原力。表明西洋参花具有较强的抗氧化活性,且随着多糖浓度的增加,抗氧化活性不断增强。结论:本实验得到的提取工艺条件具有可行性,可用于西洋参花多糖的提取。西洋参花多糖具有较好的抗氧化活性。本研究可为西洋参花的开发利用提供理论依据。

山药总蛋白对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的保护作用及机制研究

探究山药总蛋白对高浓度D-葡萄糖(High concentrations of D-glucose,HG)诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及其机制。利用50 mmol/L HG建立HUVECs损伤模型。将HUVECs随机分为对照组、模型组、山药总蛋白低剂量组(0.5 mg/mL)以及山药总蛋白高剂量组(1 mg/mL),评估山药总蛋白对HG处理的HUVECs的细胞活力、细胞形态及血管生成能力的影响;检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活力;以及培养基上清液中一氧化氮(Nitric oxide,NO)、8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy deoxyguanosine,8-OHdG)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的水平;测定B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(Cleaved caspase-1)和IL-1β蛋白的表达水平。结果显示,山药总蛋白能显著提高HG处理后的HUVECs的细胞活力(P<0.01),改善细胞凋亡形态,并显著升高SOD和CAT的活力(P<0.05或P<0.01)以及凋亡相关蛋白(Bcl-2/Bax)的比值、血管形成能力、NO分泌量。此外,山药总蛋白还显著降低了HUVECs的ROS、MDA、8-OHdG、IL-1β和IL-6的水平(P<0.05或P<0.01)及炎症相关蛋白(Txnip、NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β)的表达水平(P<0.05或P<0.01),并且上述指标的变化均呈现明显的浓度依赖性。本研究结果表明,山药总蛋白可能通过抑制Txnip/NLRP3信号通路从而保护HUVECs拮抗HG诱导的氧化应激,恢复HUVECs内的氧化平衡,进一步减轻细胞的炎症反应。

基于多学科团队模式的营养结合情感支持对喉癌患者营养状况、心理状况及并发症的影响

目的探讨基于多学科团队(MDT)模式的营养结合情感支持对喉癌患者营养状况、心理状况及并发症的影响。方法选取2021年2月至2023年2月于空军军医大学第二附属医院耳鼻咽颈外科行喉切除术的喉癌患者80例作为研究对象,按照随机数字表法将其分成两组,各40例。对照组给予常规护理,观察组在对照组基础上给予基于MDT模式的营养结合情感支持护理。比较两组干预前后营养状况、心理状况及并发症情况。结果干预后,两组血红蛋白、血清白蛋白及总蛋白水平均高于干预前,且观察组高于对照组(P<0.05)。干预后,两组焦虑自评量表、抑郁自评量表评分均低于干预前,且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组术后并发症总发生率低于对照组(P<0.05)。结论基于MDT模式的营养结合情感支持应用于喉癌患者,能有效改善其营养和心理状况,并降低并发症发生率。

人参治疗阿尔茨海默病药理作用及机制研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,因大脑逐渐退化而引起记忆、日常功能减退和行为障碍问题,俗称“老年痴呆”。痴呆症患者有多种类型,阿尔茨海默病占比最大,目前尚无逆转其病程的特效药物。近年来,对这种疾病的发病机制及药物尤其是中药及复方治疗方面,逐步取得了实质性进展,利用动物与细胞模型,诸多研究学者已经从不同角度证实了人参药材提取物、有效部位、单体化合物及复方人参制剂治疗AD具有显著的疗效。就近年来国内外关于人参对AD的治疗新进展研究文献进行梳理归纳,为将其开发成治疗阿尔茨海默病和各种类型记忆障碍的健康产品提供参考和科学依据。

响应面法优化西洋参果多糖的提取工艺及其体外抗氧化活性

目的:对西洋参果实中的多糖进行提取,结合响应面法对提取工艺进行优化,并对西洋参果多糖是否具有体外抗氧化活性进行研究。方法:本研究以新鲜的西洋参果实为原料,采用了水提醇沉法提取其中的多糖。用单因素实验以及响应面法对提取工艺进行了优化。从DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原能力三个方面进行果多糖的体外抗氧化活性研究。结果:最佳工艺参数为:提取时间为2.5 h,乙醇浓度为80%,料液比为1:16 g/mL,此时的多糖得率为29.47%±0.65%,与模型预测值相当。在以下三方面考察了西洋参果多糖的体外抗氧化活性:多糖浓度为3.4 mg/mL时,其DPPH自由基清除率达75.14%±0.65%,IC_(50)值为0.71 mg/mL;多糖浓度为3.4 mg/mL时,其羟基自由基的清除率可达71.82%±1.43%,IC_(50)值为0.87 mg/mL;多糖的浓度为1.0 mg/mL时,其总还原力达到了0.730,并且其体外抗氧化能力随西洋参果多糖浓度的增加而增强。结论:抗氧化活性的实验结果说明了西洋参果多糖具有较好的抗氧化活性。本研究可以为西洋参果多糖进一步开发利用奠定理论基础,确保中药资源能够被充分利用。

HPLC结合化学计量法对西洋参不同部位中人参皂苷的差异分析

目的对西洋参不同部位中10种人参皂苷含量测定,结合化学模式识别,比较西洋参不同部位中人参皂苷存有的差异。方法使用HPLC法对含有的人参皂苷进行测定,对结果做热图分析、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析。结果测得10种人参皂苷含量的和:西洋参花>西洋参叶>西洋参须根>西洋参果肉>西洋参芦头>西洋参侧根>西洋参主根>西洋参茎>西洋参籽,西洋参各部位主要含有达玛烷型人参皂苷,其中又以原人参二醇型皂苷为主;齐墩果酸型人参皂苷Ro在西洋参的地下部位含量较高,在芦头中含量最高;奥克梯隆型人参皂苷F11在西洋参地上部位的花、叶、果肉中含量较高;造成西洋参不同部位差异的差异性标记物为人参皂苷Rb3、F11、Re,西洋参茎中未检测到人参皂苷Rc,西洋参果肉中未检测到人参皂苷Ro、Rb1,西洋参茎中未检测到人参皂苷Rg1、Ro、Rb1、Rc;人参皂苷Re、Rb3、F11在西洋参叶和西洋参花中含量较高。结论西洋参的各个部位之间有一定的差异,尤其是地上部位和地下部位,一些非药用部位含有的人参皂苷也很多,例如西洋参花、叶、果肉,可以为其在临床研究和人参皂苷的制备上提供依据,保证中药资源的充分利用。

机器人辅助经口腔切除下咽部肿瘤的手术配合

通过回顾性分析2021年于空军军医大学第二附属医院行机器人辅助经口腔切除下咽部肿瘤手术的1例患者的临床手术配合资料,总结了手术配合重点和难点。机器人辅助经口腔切除下咽部肿瘤手术的护理配合打破了传统护理模式,可减少患者术中体位损伤和术后并发症的发生,改善患者术后恢复效果,有利于患者早日康复。

基于转录组学的梅花鹿茸皮组织修复机制研究

为研究不同生长时期梅花鹿东北亚种Cervus nippon hortulorum鹿茸茸皮差异基因表达变化,以期为鹿茸生长机制及组织修复的临床治疗提供理论依据,本研究采用Illumina测序技术和生物信息学方法对快速生长期和骨化期鹿茸生长中心茸皮进行转录组测序和差异基因表达分析。从快速生长期和骨化期茸皮中分别获得45422254条和44530430条clean reads,测序质量值分别为98.50和98.39;通过Trinity组装,分别获得44352条和43194条组装序列,平均长度分别为977nt和1135nt。通过数据库比对和差异基因表达分析筛选出生长因子7种、转录因子25种和胶原分子6种。在快速生长期鉴定出多种参与组织修复的重要生长因子和转录因子,包括Pdgfa、Tgfβ3、Egfl7、Vegfb、Sox4、Sox12、Scx、E4f1、Tcf4和Elf4等。

人参多糖通过抑制ROS水平和凋亡保护H_2O_2诱导的心肌细胞氧化应激损伤

为探讨人参多糖缓解心肌氧化损伤的功效,利用过氧化氢(H_2O_2)诱导的H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌氧化损伤模型,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡,Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白.结果表明:与对照组(Con)比较,H_2O_2能够使细胞存活率显著下降(P<0.001);与H_2O_2诱导组(模型组,Mod)比较,6.25μg/mL人参多糖预防治疗24h将细胞存活率由(57.47±5.08)%提高到(85.65±4.28)%(P<0.001),说明人参多糖能够对抗H_2O_2诱导的细胞毒性作用.流式细胞术DCFH-DA染色结果显示:与Con组比较,H_2O_2显著升高细胞ROS水平;而人参多糖预防治疗24h后细胞ROS水平降低,提示人参多糖能够抑制H_2O_2诱导的H9c2细胞活性氧水平升高,并通过降低MDA含量及提高SOD活性缓解氧化应激损伤.同时,人参多糖可通过增加H_2O_2诱导损伤引起的Bcl-2/Bax比值,降低凋亡相关蛋白表达来缓解氧化应激导致的细胞凋亡.总之,人参多糖通过抑制ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤,为阐述人参保护心脏功效机制及产品研发提供了实验依据.

复方人参健体方的处方优化及其抗疲劳活性和急性毒性研究

目的:优化复方人参健体方4种组方药材(人参、山药、枸杞子、益智仁)的配比,并考察其抗疲劳活性及急性毒性。方法:通过水提取、浓缩、减压干燥制备复方人参健体方水提物。采用单因素试验,以小鼠负重游泳时间为指标,考察人参、山药、枸杞子、益智仁的处方量等4个因素的影响。在单因素试验的基础上,以小鼠负重游泳时间和运动后血清尿素氮含量、肝糖原含量和血乳酸曲线下面积的综合评分为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优化处方配比。将小鼠分为空白对照组(水)、阳性对照组(人参红景天胶囊,0.135 g/kg)和复方低、中、高剂量组[最优配比复方人参健体方提取物(以下简称"优化复方")4.08、8.16、12.24g/kg,以生药量计],灌胃给药或水20 m L/kg,每日1次,连续30 d。以给药后小鼠的负重游泳时间和运动后血清尿素氮含量、肝糖原含量和血乳酸曲线下面积的综合评分验证优化复方的抗疲劳活性;同时,以复方中剂量组小鼠的测定数据计算综合评分,比较其与理论预测值的差距。对小鼠灌胃优化复方(总剂量为16.00 g/kg,以提取物计),连续14 d观察并记录小鼠的一般状态、体质量变化、中毒特征以及死亡情况等,并测定半数致死量(LD50)和最大耐受剂量(MTD)。结果:复方人参健体方的最优处方配比为人参1.5 g、山药10 g、枸杞子10 g、益智仁3 g。抗疲劳活性验证试验显示,优化复方较空白对照组可显著延长小鼠负重游泳时间,降低血清尿素氮含量和血乳酸含量及曲线下面积(低剂量组除外),提高肝糖原含量(P<0.05或P<0.01);且复方中剂量组的综合评分平均值为96.95分,与理论预测值97.01分仅相差0.06%。急性毒性实验显示,小鼠均未见死亡现象发生,优化复方的经口MTD均大于15 g/kg,属无毒级。结论:优化的复方人参健体方对小鼠具有显著的抗疲劳活性,且未见明显毒副作用。

基于指纹图谱结合化学计量法对不同干燥方式下西洋参皂苷类成分的分析

采用HPLC法对12批不同批次西洋参饮片6种皂苷类成分进行测定,运用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)"进行评价,并结合聚类分析和主成分分析等化学计量法对4种不同干燥方式下(普通晾干组、60℃初始烘干组、30℃初始烘干组、冻干组)的西洋参饮片进行比较和区分。建立了西洋参皂苷类成分HPLC指纹图谱,相似度均达0.940以上,指认了6个共有峰(Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd)构成西洋参饮片的特征峰。聚类分析和主成分分析结果相似,30℃初始烘干组、冻干组比较明显的分为两类,但是60℃初始烘干组和普通晾干组区分不是特别明显。该法所建立的西洋参皂苷类成分指纹图谱特征性强、方法简便,结合6种皂苷类成分含量测定可更好控制其质量,对西洋参饮片的鉴定、质量控制具有指导意义和参考价值。

人参二醇通过调节PI3K/Akt/GSK3β信号通路诱导血小板聚集参与止血过程

目的目的研究人参二醇(PD)的止血作用并探讨其作用机制。方法在体内研究中,采用小鼠断尾和肝划痕方法,观察PD对小鼠断尾出血时间和肝划痕出血时间的影响,应用血常规分析仪检测血常规;在体外研究中,采用血凝分析仪检测凝血四项;应用血小板聚集仪检测血小板聚集度;应用流式细胞仪检测人洗涤血小板中P-选择素(CD62P)和糖蛋白IIb/IIIa(PAC-1)表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测人血小板的相关蛋白表达。结果与空白对照组比较,PD能明显降低小鼠断尾和肝划痕的出血时间;显著增加大鼠血浆中红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、血小板数量(PLT)、血小板压积(PCT)和大型血小板比率(P-LCR);PD能显著缩短大鼠血清的活化部分凝血活酶时间(APTT)和增加纤维蛋白原的含量(FIB);在血小板聚集的结果中,大鼠和人的血小板聚集率随着PD浓度的增加而显著增加,当PD浓度为140μM时,最大聚集率分别为51.40%和33.40%。PD激活血小板,促进CD62P的释放和增加糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表达。同时,PD能显著增加磷酸肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase,PI3K)、蛋白酶B(Protein Kinase B,Akt)和糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK3β)磷酸化水平。结论PD具有止血作用,作用机制是通过激活内源性凝血途径和血小板的PI3K/Akt/GSK3β信号通路促进血小板聚集,形成血栓,参与止血过程。

指纹图谱及多成分定量结合化学模式识别法评价不同规格西洋参质量

目的 根据HPLC指纹图谱和多种人参皂苷类成分的含量测定,并结合化学模式识别法,比较不同产地、不同年限、不同种植方式的西洋参质量,为其进一步开发利用提供依据。方法 HPLC法得到20批不同规格的西洋参色谱图,用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)进行评价,对其中的11种人参皂苷测定含量,并运用聚类分析和主成分分析对其进行区分比较。结果 选取了28个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,20批西洋参药材的指纹图谱相似度均大于0.90,通过与对照品比对指认出其中的11种人参皂苷类成分(Rg1、Re、Rg2、Ro、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Rh2),未检测到人参皂苷Rf。产地对西洋参的质量影响较大,进口西洋参中人参皂苷含量较高,在国内集安的西洋参中人参皂苷含量较高,此外西洋参生长年限越高,人参皂苷含量越高;在国内移栽种植的质量要高于直播种植。20批西洋参药材的聚类分析和主成分分析结果相似,进口西洋参和集安的西洋参较为相似,长白和抚松的西洋参较为相似,文登西洋参单独成一类;造成西洋参质量差异的主要成分是人参皂苷Rb1、Re、Rd、Ro。结论 指纹图谱与含量测定相结合,应用聚类分析及主成分分析可全面评价西洋参质量,人参皂苷类成分可以作为西洋参质量控制的指标性成分,该方法能为西洋参的质量控制及评价提供参考。

基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ序列位点特异性聚合酶链反应鉴别鹿茸及其伪品

目的:基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列建立一种新的PCR鉴定方法,以快速鉴别出梅花鹿、马鹿茸片与驯鹿茸片。方法:采集不同来源的鹿茸片共60批。通过比较梅花鹿、马鹿与驯鹿等其他伪品的COⅠ基因序列差异,根据SNP鉴别位点设计梅花鹿茸、马鹿茸同驯鹿茸的鉴别引物Cne-F、Rt-F、Co-R,并对影响聚合酶链反应(PCR)结果的主要因素变性时间、退火温度、退火时间、延伸时间等进行方法学考察和优化。结果:该实验构建的双位点特异PCR鉴别体系,基于COⅠ的鉴别位点,可通过PCR扩增获得294 bp的梅花鹿、马鹿特异片段,而产生514 bp的驯鹿特异片段,伪品及阴性对照无条带。结论:该实验建立对梅花鹿、马鹿及驯鹿等其他伪品鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠。

哈蟆油与牛蛙油蛋白质组学差异分析

目的旨在筛选哈蟆油和牛蛙油中特异性的蛋白质,发现这些差异蛋白与生长环境、冬眠及发育的关系。方法采用iTRAQ结合质谱技术建立哈蟆油和牛蛙油蛋白质组数据库,通过比较两个蛋白质组数据库,对筛选的差异蛋白进行Gene ontology功能注释和生物信息学分析。结果通过对牛蛙油与哈蟆油中蛋白质定量的数据进行差异比较,筛选到差异表达蛋白质总数为77个,其中上调蛋白质69个,下调蛋白质8个。哈蟆油中含量较高的8个差异蛋白主要参与免疫调节过程;牛蛙油中含量较高的差异蛋白主要参与生长发育、能量代谢、应激反应、骨架形成等过程。结论哈蟆油中含量较高的8个差异蛋白质可作为哈蟆油区别于牛蛙油的重要成分,同时哈蟆油的特异性膨胀度可能与含量较高的凝胶形成型黏蛋白类密切相关。

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。

人参总皂苷对D-半乳糖致PC12细胞衰老的改善作用及其机制研究

目的:研究人参总皂苷对D-半乳糖致PC12细胞衰老的改善作用及其机制。方法:将大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞用D-半乳糖处理以建立细胞衰老模型。采用CCK-8法筛选D-半乳糖的建模浓度和人参总皂苷的给药浓度。试验设正常对照组、模型组和人参总皂苷低、高浓度组,检测各组细胞衰老情况、细胞凋亡率、细胞周期和细胞中线粒体膜电位(MMP)、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)水平以及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及其相关蛋X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)]和氧化损伤相关蛋白[核因子2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)]表达水平,另设阳性药物组[5 mmol/L N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)]和阳性对照组[D-半乳糖+5 mmol/L NAC]比较氧化损伤相关蛋白水平。结果:D-半乳糖能显著抑制PC12细胞的存活率,临界浓度为20 mg/mL;人参总皂苷可显著增加D-半乳糖诱导衰老细胞的存活率,半数效应浓度为65μg/mL,故将后续试验人参总皂苷的低、高浓度设置为55、65μg/mL。与正常对照组比较,模型组衰老细胞数明显增加,细胞凋亡率和G1期细胞比例均显著增加,S期细胞比例、细胞中MMP、ATP含量和Bcl-2蛋白以及线粒体中Cyt-C蛋白表达水平均显著降低,ROS含量和Bax、Nrf2蛋白及胞浆内Cyt-C蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,人参总皂苷低、高浓度组衰老细胞数明显减少,细胞凋亡率和G1期细胞比例均显著降低,S期细胞比例、细胞中MMP、ATP(除低浓度组外)含量和Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白以及线粒体中Cyt-C蛋白表达水平均显著升高,ROS(除低浓度组外)含量和Bax蛋白及胞浆内Cyt-C蛋白表达水平均显著降低;阳性对照组细胞内Nrf2、HO-1蛋白表达水平亦显著升高(P<0.05或P<0.01),但均低于人参总皂苷组。结论:人参总皂苷可改善D-半乳糖诱导的P12细胞衰老,其机制可能与激活Nrf2抗氧化信号途径拮抗D-半乳糖诱导的氧化应激、缓解其所致的线粒体功能障碍有关。

杂原子分子筛(ⅩⅤ)——含镓ZSM-5型沸石的合成、结构及其性能的研究

以水玻璃、三氯化镓、1,6-己二胺和水为原料,合成了SiO_(2)/Ga_(2)O_(3)为60—38间的含镓ZSM-5型沸石.X-射线谱图表明含镓ZSM-5型沸石与硅铝ZSM-5型沸石相似,电子探针的分析结果表明镓原子进入了沸石骨架。

葛根-枳椇子药对发酵工艺及解酒功效评价研究

以葛根-枳椇子为主要原料,采用植物乳杆菌和副干酪乳杆菌混合发酵,目的是为了研究发酵前后药物对解酒护肝功效的影响。通过单因素试验和对黄酮含量和醉酒醒酒时间运用多指标综合加权评分法做正交试验确定最佳发酵工艺条件为pH 7,总接种量2%(质量分数),接种比例(体积比)2∶1,发酵时间36 h;建立急性酒精性肝损伤小鼠模型,通过评价小鼠血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷氨酸-丙酮酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)及肝脏组织中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平确定最佳工艺条件下混合发酵的葛根-枳椇子发酵前后的解酒功效。结果表明,植物乳杆菌和副干酪乳杆菌混合发酵的葛根-枳椇子药对的提取液可以明显提高黄酮含量,延长醉酒潜伏时间、缩短翻正反射恢复时间、降低造模小鼠血清中IL-6、TNF-α含量及AST、ALT的活力,提高抗氧化酶SOD活力且效果优于发酵前的提取液。研究证实,植物乳杆菌和副干酪乳杆菌混合发酵可以提高葛根-枳椇子药对的抗氧化活性,增强解酒效果,且效果优于未发酵的药物,都对小鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用。

基于转录组测序技术分析山药蛋白防治糖尿病性勃起功能障碍的作用机制

目的:研究山药蛋白(DOT)防治糖尿病性勃起功能障碍(DIED)的潜在作用机制。方法:采用高糖高脂饲料+腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)的方法复制DIED大鼠模型。实验设置正常对照组(生理盐水),模型组(生理盐水),DOT低、中、高剂量组(0.3、0.6、0.9 mg/kg)和西地那非组(阳性对照,4.4 mg/kg),每组9只大鼠。在糖尿病模型已建立成功、开始诱导DIED发生的阶段,各组大鼠开始灌胃相应溶液,每天1次,连续11周。测定大鼠体质量、空腹血糖(FPG)值、勃起次数、勃起率、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IR)以及阴茎海绵体组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,以评价DOT对DIED模型大鼠的干预作用。选择30 mmol/L葡萄糖诱导48 h建立高糖损伤小鼠海绵体内皮细胞(MCECs)模型,并给予125、250、500μg/mL DOT进行干预,然后检测细胞活力,以评价DOT对高糖损伤MCECs的影响。继而采用转录组测序技术分别筛选正常MCECs与高糖损伤MCECs、高糖损伤MCECs与250μg/mL DOT处理的MCECs中的差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;分析两组细胞间共同的差异表达基因,并选择6个关键基因在mRNA水平上进行验证。结果:不同剂量DOT对DIED模型大鼠体质量降低、FINS和IR升高、勃起次数减少、勃起率降低以及阴茎海绵体组织中eNOS、cGMP含量降低均有不同程度的逆转作用,其中高剂量DOT作用后DIED模型大鼠的上述指标变化均被显著逆转(P<0.05或P<0.01)。125、250、500μg/mL DOT均可显著提高高糖损伤MCECs的活力(P<0.05或P<0.01)。转录组测序结果表明,与正常MCECs比较,高糖损伤MCECs中共有48个差异表达基因;与高糖损伤MCECs比较,DOT处理的MCECs中共有779个差异表达基因;两组差异表达基因在生物学过程注释中均以细胞过程为主、在细胞组分注释中均以细胞部分为主、在分子功能注释中均以绑定分子功能为主,并主要富集在细胞外基质受体相互作用通路、错配修复通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路等。在两组差异表达基因中,共得到Aldh1a1、Abcc5、Tac1等13个共同的差异表达基因,DOT均可显著回调高糖损伤MCECs中上述共同差异表达基因的表达。经验证,DOT可以显著逆转高糖损伤MCECs中关键基因TGF-β3、Txnip、Aldh1a1、Loxl1、Mt1、Mt2的mRNA表达。结论:DOT对DIED模型大鼠的症状具有改善作用;其作用机制可能与抑制纤维化、降低氧化应激等生物学途径,从而改善海绵体内皮功能有关。