鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究

建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。

2020-2022年河南省猪伪狂犬病监测评估

为了解河南省猪伪狂犬病野毒感染情况,持续推进猪伪狂犬病净化工作,河南省动物疫病预防控制中心按照监测方案开展检测,并对2020-2022年数据对比分析,共采集猪血清样品34506份,采集病原学样品10589份,采用ELISA方法检测猪伪狂犬gpI(gE)血清感染抗体,采用荧光PCR方法检测病原学样品,并对检测结果进行统计分析。结果显示:2020-2022年,河南省猪PRV gE抗体的平均个体阳性率分别为20.30%、15.76%、11.01%,平均场群阳性率分别为52.77%、35.35%、27.80%。2020-2022年,种猪场、商品代场、屠宰场平均个体阳性率分别为10.62%、20.10%、16.79%,平均场群阳性率分别为31.72%、45.27%、33.19%。2020-2022年平均个体阳性率和平均场群阳性率由高到低依次为豫中、豫东、豫西、豫南和豫北,平均个体阳性率最高的为22.56%,最低为13.12%,平均场群阳性最高的52.4%,最低为31.4%。2020-2022年平均个体阳性率和场群阳性率均依次降低。可见,河南省猪伪狂犬病野毒感染抗体和病源学阳性率均逐年降低,净化效果明显。

中国制造业产业集群数字化转型模式及其驱动机制

数字技术的兴起给各行业带来新发展动能。制造业产业集群是中国制造业发展、吸纳就业的重要基础,进行数字化转型是产业集群实现优化升级、可持续发展的重要途径之一。基于生态学中的生物群落类型将制造业产业集群划分为共生型产业集群、附生型产业集群、寄生型产业集群,总结各种类型集群的数字化转型模式,其中共生型产业集群数字化转型模式为“市场需求驱动+政府支持”型、附生型产业集群数字化转型模式为“技术创新吸引+政府支持”型、寄生型产业集群数字化转型模式为核心企业领导型,并分别以河北省平乡县自行车产业集群、广州市纺织服装产业集群、河北省邢台市隆尧县食品产业集群作为实例进行分析。此外,从市场需求、政府制度、技术创新、核心企业揭示产业集群数字化转型的驱动机制,认为上述四方面分别在集群数字化转型的过程中起到推动、支持、吸引和激励作用。政府应结合自身情况,为由中小企业构成的共生型、寄生型产业集群在数字化转型方面提供指导与支持。

猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

非洲猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

建立一种特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的鉴别诊断。针对ASFV的B646L基因和HP-PRRSV的NSP2基因分别设计特异性引物/探针对,经优化反应体系、反应程序等反应条件,建立一种基于探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和重复性,对130份临床样品进行检测,并与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)进行比较分析。本研究成功建立的ASFV和HP-PRRSV二重FQ-PCR检测方法在10^(-1)~10^(5) copies/μL模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和HP-PRRSV基因出现阳性扩增,但对猪日本乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典株(VR2332株)、健康猪脾脏等7种病原核酸样品对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.53%~3.14%,重复性良好;对ASFV和HP-PRRSV的最低检测模板浓度均为10 copies/μL;利用建立的二重FQ-PCR方法对130份临床样品进行检测,检测结果与OIE检测方法(ASFV)及国标方法(HP-PRRSV)完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和HPPRRSV二重FQ-PCR检测方法,为ASFV和HP-PRRSV的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。

照顾者对中枢性性早熟患儿注射醋酸亮丙瑞林(缓释)微球后发生局部不良反应的知信行调查

目的 调查照顾者对中枢性性早熟患儿注射醋酸亮丙瑞林(缓释)微球后发生局部不良反应的知信行情况,并分析其原因。方法 采用自行设计的问卷对首都医科大学附属北京儿童医院门诊注射室的468例使用醋酸亮丙瑞林(缓释)微球的患儿照顾者进行问卷调查。结果 回收有效问卷共459份,照顾者对注射部位不良反应的了解情况、态度及护理应对总得分为(116.92±20.84)分。了解情况得分为(53.93±14.31)分,态度得分为(20.58±4.04)分,护理应对得分为(42.40±8.26)分。不同职业类型、患儿就诊类型、患儿皮肤不良反应发生次数对照顾者的了解情况得分有影响,差异有统计学意义(P<0.05);不同患儿用药时间、患儿皮肤不良反应发生次数对照顾者的态度得分、护理应对得分有影响,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素回归分析结果显示,照顾者职业类型、患儿出现皮肤不良反应次数是照顾者对患儿注射部位不良反应的了解情况得分的影响因素(P=0.047,P<0.001);患儿用药时间、出现皮肤不良反应次数是照顾者对患儿注射部位产生不良反应的态度得分(P<0.001,P=0.001)、护理应对得分(P=0.003,P=0.003)的影响因素。结论 照顾者对中枢性性早熟患儿注射醋酸亮丙瑞林(缓释)微球后发生局部不良反应有一定护理应对能力,但照顾者对相关知识了解有限,护理人员应积极通过口头宣教、科普视频等方式,提高照顾者对患儿用药期间相关护理知识的了解情况与重视程度。

薄型子宫内膜小鼠造模实验在学生视角下探究式形态学整合实验课程中的应用

在现行医学教育体系中,临床专业学生的基础医学教育和临床理论及技能培训存在脱节^([1])。传统的形态学教学中,各学科独立授课,关于同一结构的知识点零散分布,难以体现学科间的横向联系^([2])。以子宫为例,系统解剖学侧重大体结构,组织学聚焦显微结构,胚胎学详细介绍胚胎发育过程,病理学阐释病理形态。此课程模式下,对某特定的器官或系统的综合性探究少,基础知识学习与临床应用脱节明显。创新探究、学科交叉、结合临床的重要性日渐体现,创新型整合课程已陆续应用于教学实践中^([3])。形态学整合实验课程面向低年级临床专业本科生,引导学生综合多学科知识,结合文献设计小型综合实验,进而巩固所学知识点,初步尝试临床应用与科研探索。现以学生视角简述“形态学整合实验——薄型子宫内膜小鼠造模实验课程”的学习过程,提出反馈及建议。

中国共产党历史主动精神生成的三重逻辑

历史主动精神是中国共产党领导中国人民创造历史伟业进程中形成的高尚精神品格,其生成蕴含着深刻的历史逻辑、理论逻辑和实践逻辑。从历史逻辑来看,党在百年奋斗进程中,科学把握历史规律,深刻总结历史经验,尊重人民主体地位,发挥人民创造精神,勇于进行自我革命,主动跳出历史困境,为历史主动精神的生成提供了基本的前提、立场和动力;从理论逻辑来看,历史主动精神源自于马克思主义唯物史观,内蕴于中国共产党精神谱系,以大历史观为世界观与方法论;从实践逻辑来看,中国共产党以建设坚强有力的马克思主义政党为目标指向,立足于中华民族伟大复兴全局与世界百年未有之大变局,在新的赶考之路上不断凝练升华历史主动精神。

金融赋能兵团乡村振兴的路径研究

金融是现代经济运行的血液,全面推进乡村振兴离不开充足有效的金融服务。本文以兵团全面推进乡村振兴战略为背景,通过综合问卷调查、实地调研等方式,探析金融服务兵团乡村振兴的现状和困境,探讨强化金融服务兵团乡村振兴战略的路径。研究表明,在兵团全面推进乡村振兴过程中,金融服务发挥了较大“输血”“活血”功能,但仍存在乡村振兴经营主体金融供求不匹配、畜牧业金融供给匮乏、政策性农业保险覆盖不全面等难题,需从宏观、中观、微观三个层面强化赋能路径,提出通过“创氛围、抓重点、准切入”、构建“四大机制”、创新“四大模式”以强化兵团乡村振兴金融赋能效能。

临床药师药品不良反应监测参与度研究及工作模式探讨

目的探讨临床药师在医院药品不良反应(ADR)监测工作模式中的参与度及参与效果。方法从医院药物警戒系统中提取某院2018年至2020年上报的ADR,统计各年、各类ADR例数及对应的临床药师参与度,并分析其相关性。结果3年间,医院ADR(总的及严重的)上报例数及临床药师在ADR上报工作的参与度均呈逐年增长趋势;各类ADR中临床药师参与上报例数占比较大,且临床药师在总体ADR上报及不同类别ADR上报中的参与度均呈逐年增长趋势,其中2019年和2020年在新的ADR及严重ADR上报中的参与度均大于80%;该院新的ADR及严重ADR上报例数与临床药师参与度呈正相关(P<0.05或P<0.01)。结论临床药师在医院新的ADR及严重ADR监测中的参与度较高,建立相适应的临床药师ADR监测工作模式,增强监测意识,提高参与度,可促进医院ADR监测工作的高效开展。

非洲猪瘟的扩散风险点及防控对策

为有效防控非洲猪瘟疫情,降低非洲猪瘟的扩散风险,本文结合非洲猪瘟流行现状及部分国际已发疫情,对非洲猪瘟扩散风险点进行简要分析。分析认为:养殖环节风险点主要是养殖场(户)生物安全水平低及饲喂餐厨剩余物(泔水);流通环节风险点主要存在于生猪及猪肉产品长距离调运、猪肉及其产品销售;屠宰环节关键风险点是私屠滥宰。因此,应严禁泔水及猪源性蛋白饲料产品饲喂生猪,加强生猪养殖场(户)生物安全措施,完善活畜禽长途调运监管,强化生猪屠宰企业管理等。

工艺参数对注塑制品翘曲变形的影响

运用正交试验,通过Moldflow模拟分析,将模拟分析样条与实际注塑成型微样条进行对比,研究了模具温度、熔体温度、保压时间、保压压力、注射压力工艺参数对注射成型制品翘曲变形的影响。通过微型样条模具进行成型实验,用三坐标测量仪对成型制品的翘曲变形进行了测量,结果表明,保压压力和熔体温度对样条翘曲变形的影响较大,实际注塑成型样条的翘曲变形量比模拟分析的翘曲变形量大,拉伸样条模拟数值与实际的平均差值为0.205mm,实际值比模拟值增大了约50%;冲击样条的模拟数值与实际数值的平均差值为0.2405mm.

鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10~0~10~6拷贝·μL~(-1)模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL~(-1);利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。

实际生产中化制法无害化处理病死猪的病毒杀灭效果

为评估实际生产应用中化制法无害化处理病死猪尸体杀灭病毒的效果,选取3个应用化制法工艺处理病死猪尸体的规模化猪场,采集无害化处理前和处理后的样品,利用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法和病毒分离培养法,对无害化处理前后的样品进行非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒等9种病毒的核酸检测,通过处理前后病原核酸检出情况的对比,评估该工艺在实际生产应用中病毒杀灭效果。结果显示:化制法处理前病死猪尸体样品中的部分病原可在细胞培养物中检出且可增殖传代,说明存在活病毒;而处理后样品的细胞培养物中均检不出病原核酸,说明病原均被彻底杀灭。结果表明,在实际生产应用中,化制法无害化处理病死猪尸体可彻底杀灭病毒,达到了无害化处理目标。

2014年至2016年成都地区25家医院抗肿瘤药物使用分析

目的评价成都地区医院抗肿瘤药物应用的合理性。方法对成都地区25家医院2014年至2016年抗肿瘤药物的销售金额、用药频度(DDDs)、日均费用(DDC)等进行综合统计与分析。结果 3年间,抗肿瘤用药总金额分别为69 401.60万元,61 857.41万元和68 889.60万元;DDDs排序中,其他类抗肿瘤药物长期居首,且稳定增长,抗肿瘤激素类药物替代抗代谢药物排名第2;销售金额排名前15位的抗肿瘤药物中,伊马替尼销售金额逐年上升至第1位;回生因DDC较低,DDDs排名第1。结论 2014年至2016年,成都地区抗肿瘤药物整体使用情况与我国癌症发病率及当前抗肿瘤药物治疗方案的选择基本相符;药品价格仍是制约临床药物选择的重要因素,但单纯依靠降低抗肿瘤药物零售价格仍不能缓解我国癌症费用负担的增长趋势;中成药类辅助抗肿瘤药物的临床应用有待进一步规范。

猪伪狂犬病毒gB抗原侧向层析快速检测试纸条的研制

为建立一种简便、快速、特异的猪伪狂犬病毒(PRV)gB抗原检测方法,利用单克隆抗体技术和侧向层析(LFA)技术,采用柠檬酸三钠还原法,制备颗粒大小为31.5 nm胶体金,再用胶体金标记纯化的抗PRV gB单克隆抗体10D4,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处,分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体6E9,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。经测试,该试纸条最低能检测出1:640倍稀释的,TCID_(50)为1×10^(8.6)/0.1 mL的灭活PRV抗原,并与古典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)均无交叉反应,特异性良好;室温干燥密闭的条件下,该试纸条至少可保存10个月。结果表明,本研究建立的试纸条方法操作简单、快速、敏感、特异,易于判定,适合基层PRV的大面积普查和现场检测。

超声辅助注射成形碳纤维增强聚丙烯制件性能研究

利用自行研制的超声辅助注射成形系统,成形了碳纤维质量分数为20%的增强聚丙烯制件,并借助X射线衍射、扫描电镜观测以及拉伸试验等方法,研究了不同超声功率和模具温度、聚合物熔体温度及注射压力对制件内部的分子凝聚态结构与其力学性能的影响。结果表明,在较高的模具温度、较低的聚合物熔体温度及较小的注射压力下,施加功率600 W的超声振动,能够明显增大聚合物熔体的流动剪切速率,进而提高聚合物分子链和碳纤维的取向程度,促进晶核生成与晶体生长,使制件的拉伸强度得到明显提高。

口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、AsiaⅠ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测。结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在10~1～10~7拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致。结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法。

技术来源对高技术产业创新效率的影响研究

基于2007—2016年我国省际数据,采用系统GMM法建立动态面板模型,实证考量技术来源对高技术产业创新效率的影响。结果表明:就高技术产业现阶段的发展而言,购买国内技术和引进国外技术这类直接引进技术来源对其创新效率的提升有显著的促进作用,具有本土适宜性的国内技术积极作用于规模效率,先进的国外技术积极作用于纯技术效率;而自主研发引领高技术创新发展的动力还远远不足,国际贸易与外商直接投资带来的技术红利正在消失。

血栓弹力图和常规凝血检验在老年慢性肾脏病检查中的应用

目的探讨血栓弹力图与常规凝血检验联合应用在慢性肾脏病检查中的价值。方法选择2020年8月—2022年12月于安徽省宣城市人民医院住院治疗的80例老年慢性肾脏病患者的临床资料进行回顾性分析。根据肾小球滤过率(Glomerular Filtration Rate,GFR)对入选者进行分组:1~2期组(20例)、3期组(20例)、4期组(20例)、5期组(20例)。检测并比较4组常规凝血指标值和血栓弹力图各项指标值。结果1~2期组、3期组、4期组、5期组组间基础资料统计值差异均无统计学意义(P>0.05);4组间TT、APTT、PT、INR、Fib值虽有差异,但均无统计学意义(P>0.05);4组组间CI、MA、K、R指标值差异明显(P<0.05);慢性肾脏病患者eGFR水平和R、K、MA间有正相关关系(P<0.05)。结论与常规凝血检验比较,血栓弹力图在慢性肾病患者凝血状态监测中的应用具有更高的准确性,有望为临床制定治疗方案提供参考。