白术内酯Ⅲ调控ASCT2介导的线粒体-溶酶体互作诱导肝星状细胞衰老的抗肝纤维化机制研究

目的探究白术内酯Ⅲ诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)衰老抗肝纤维化作用及机制。方法ASCT2 siRNA及白术内酯Ⅲ(40μmol·L^(-1))分别作用于人源肝星状细胞LX2以抑制ASCT2,MTT评估细胞活力,EdU法检测细胞增殖,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;Western blot检测LX2细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的变化,激光共聚焦检测LC3自噬流和错误蛋白堆积的变化,同时观察溶酶体标记物LAMP1的荧光情况,以检测溶酶体功能和数量;试剂盒检测LX2细胞内ROS、MDA水平及SOD活力,流式细胞术分析线粒体ROS水平及膜电位。构建CCl 4诱导的小鼠肝纤维化模型,白术内酯Ⅲ20、30、40 mg·kg^(-1)治疗性给药,HE、Masson和Sirius Red染色观察肝脏组织破坏以及胶原沉积情况,Western blot检测各组小鼠P21、P16表达水平,SA-β-Gal染色以及免疫组化分析衰老细胞的情况和来源。结果抑制ASCT2后,LX2细胞活力降低、衰老增加(P<0.01),同时细胞自噬功能增强、溶酶体数量增多但功能减弱,加入氯喹(Chloroquine,CQ)清除溶酶体后,细胞活力和自噬功能增加(P<0.01)。抑制ASCT2后,LX2细胞内MDA、ROS水平上升,SOD活力下降(P<0.01),其中线粒体ROS水平上升及膜电位下降(P<0.01),加入鱼藤酮后,细胞氧化还原稳态和溶酶体数量恢复(P<0.01)。体内实验结果表明,与模型组比较,白术内酯Ⅲ改善肝组织结构破坏以及胶原沉积,诱导肝纤维化小鼠肝组织中的HSC发生衰老,抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,促进衰老指标P16、P21的表达(P<0.01)。结论白术内酯Ⅲ通过抑制ASCT2诱导线粒体ROS增多、膜电位下降,进一步促进HSC自噬功能增强、溶酶体数量增多和功能减弱,从而诱导活化型HSC发生衰老。

樟芝-太子参双向液体发酵培养基优化及效应分析

【目的】有效利用太子参根须副产物资源,提高樟芝(Antrodia camphorata)菌丝产量,促进活性成分合成。【方法】以太子参根须(粉末)作为培养基组分,Plackett-Burman试验筛选影响樟芝菌丝生长的关键成分,正交试验优化培养基组成。【结果】筛选试验结果表明,葡萄糖、酵母粉、蛋白胨及KH2PO4对樟芝菌丝生长有重要影响,正交试验优化的培养基组成为:太子参6 g·L^(−1),葡萄糖10 g·L^(−1),酵母粉4 g·L^(−1),蛋白胨6 g·L^(−1),KH_(2)PO_(4)1.5g·L^(−1)。利用优化培养基深层发酵,樟芝生物量达到4.73 g·L^(−1),与对照培养基及PDB培养基相比,胞内三萜含量分别提高2.75%和24.85%,胞外多糖分别提高161.11%和113.64%;发酵液中高密度无性孢子含量达1.8×10^(7)个·mL^(-1)。【结论】太子参适合作为樟芝双向液体发酵的药性成分,可有效促进樟芝菌丝生长、活性成分合成和无性孢子形成,是太子参根须副产物资源利用新途径。

灵芝菌株深层发酵及发酵饮料的配方优化

灵芝(Ganoderma lucidum)是一种营养和药用价值极高的真菌。为提高灵芝深层发酵效益和促进发酵液的开发利用,本研究采用可食用原料配制培养基,以菌丝生物量为评价指标,采用正交试验优化培养基组成。同时将灵芝发酵液用于饮料制备,并使用模糊数学综合评价法优化发酵饮料的配方。结果表明,蔗糖添加量为30 g·L^(-1)和玉米粉添加量为15 g·L^(-1)条件下配制的培养基效果最佳,菌丝生物量可达6.86 g·L^(-1),所得发酵液中胞外多糖含量为430.21μg·mL^(-1)、多酚含量为26.07μg·mL^(-1)、黄酮含量为8.16μg·mL^(-1)。发酵液体积分数为60%、柠檬酸添加量为0.5%、黄原胶添加量为0.30%、蔗糖添加量为6%和柠檬黄添加量为0.05%的工艺条件下制备的发酵饮料的感官评分最高。

金钩钓鱼针法治疗脑卒中后运动性失语的临床研究

目的:观察金钩钓鱼针法治疗脑卒中后运动性失语的疗效,并比较金钩钓鱼针法与常规针刺方法治疗脑卒中后运动性失语的疗效差异。方法:按随机分组方式,将纳入的103例运动性失语患者分为两组,治疗组51例,对照组52例。治疗组予金钩钓鱼针法针刺金津穴、玉液穴,对照组予常规针刺法针刺金津穴、玉液穴,每天1次,5天为1个疗程,休息1 d,共治疗3个疗程。观察两组患者干预前后在失语程度分级、语言功能评分的对比状况。结果:在总有效率指标上,对照组、治疗组分别是82.69%(43/52)、96.08%(49/51),治疗组总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。经过干预,在阅读、复述与谈话方面,与对照组相比,治疗组皆显著提升,差异具有统计学意义(P<0.05),但在理解方面,两组未表现出显著不同,差异无统计学意义(P>0.05)。就提升患者波士顿诊断性失语症检查(Boston Diagnostic Aphasia Examination,BDAE)语言分级而言,治疗组比对照组更具优势(P<0.05)。结论:金钩钓鱼针法在改善脑卒中后运动性失语患者阅读、复述与谈话方面,较常规针刺疗法更具优势。

马氏网集虫法调查福鼎生态茶园昆虫群落结构及多样性

为明确生态茶园昆虫群落结构,建立生态茶园的昆虫相数据库,在福建宁德福鼎市两处代表性生态茶园(命名为PPX、SXY)各布置3个样点,以马氏网集虫法调查分析昆虫群落结构及多样性,每个季节调查2次。结果显示:6个样点共发现18个目229个科69 588头昆虫,其中以弹尾目个体数最多,占43.70%,双翅目次之,占33.00%,各样点采集的昆虫科数量表现为PPX2>SXY2>SXY3>SXY1>PPX3>PPX1;按科数和个体数计算,各样点的昆虫食性功能类群组成大致相同,营养阶层组成结构分析表明,分解者、初级消费者及次级消费者个体数之比约301∶52∶33;春季和夏季6个样点的科丰富度较高,秋季和冬季呈下降趋势;辛普森、夏农-威纳及均匀度3种多样性指数分别为0.39~0.94、0.94~3.36、0.28~0.82;各样点昆虫科组成归群分析结果显示,PPX和SXY两试验区内的各样点各自归为一群,科组成相似度分别为72.5%和75.5%。本研究结果说明昆虫群落结构与茶园周围的植被和环境有密切的关系,昆虫群落结构可以作为生态茶园建设评估的重要指标。

拮抗炭疽病的茶树内生菌筛选、鉴定及培养条件优化

为筛选高效拮抗茶树炭疽病的内生细菌,以茶树健康叶片为材料,采用平板对峙拮抗法进行筛选,并对筛选到的菌株进行鉴定、抑菌效果评价及培养条件优化。从分离的162株内生细菌中筛选到1株对茶树胶孢炭疽菌有较好抑制效果的拮抗细菌X13。形态学、生理生化鉴定及16 S rDNA系统进化发育分析显示,分离的菌株X13为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株X13对病原菌菌丝生长抑制率为61.6%。生长曲线表明,菌株X13对数生长期为接种后2~14 h。响应面优化的培养条件为4.0%(质量百分浓度)玉米粉,1.0%(质量百分浓度)的硝酸钠,接种量3.5%(体积分数)。本研究结果可为茶树炭疽病防治及生防菌剂的开发提供重要参考。

拮抗茶树炭疽病土壤细菌的筛选与培养条件的优化

[目的]筛选与茶树炭疽病存在拮抗作用的土壤细菌,制备高效拮抗菌剂。[方法]采用平板对峙法筛选出对茶树胶孢炭疽菌具有较强拮抗作用的菌株,通过形态学观察、生理生化试验和16S rDNA分子水平进行种属鉴定,采用响应面法优化液体培养条件。[结果]筛选出的菌株Y-8为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。该菌株对病原菌菌丝生长抑制率为53.2%,具有产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶的能力。生长曲线测定发现,Y-8菌株对数生长期为接种后2~18 h。响应面法优化后的培养条件为:麸皮添加量4.5%(w/v)、(NH_(4))_(2)SO_(4)添加量1.0%(w/v)、接种量5.0%(v/v)。[结论]Y-8菌株繁殖迅速、易培养,可开发为高效且低成本的茶树炭疽病生防菌剂。

肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响

试验旨在研究不同水平的肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响,并确定肠膜蛋白在加州鲈(Micropterus salmoides)生产中的最适添加水平。试验选择480尾健康、体况相近、体重约为5g的加州鲈,按照单因素试验设计,随机分成4组个处理,每个处理组3个重复,每个重复40尾加州鲈。试验加州鲈分别饲喂含有2%、4%和6%的肠膜蛋白的基础饲料,肠膜蛋白等比例替代鱼粉。饲养期60d。试验结束,采集各组加州鲈的肠道组织,检测肠道消化酶活力。结果显示,2%、4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中脂肪酶活力显著比对照组提高(P<0.05),且4%和6%肠膜蛋白组脂肪酶活力显著高于2%肠膜蛋白组(P<0.05);4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中胰蛋白酶活力显著高于对照组(P<0.05);2%、4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中糜蛋白酶活力显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,加州鲈饲料中添加一定剂量的肠膜蛋白可以提高肠道中消化酶活力,且以4%的添加剂量为宜。

提升工程2.0培训:PEPR评价监测指标及模型的构建——以吉林省提升工程2.0培训评价为例

培训评价是教师培训的重要环节,对于培训具有很强的导向作用。当前,培训模型的构建和培训指标的确定多针对教师个体学习效果的评估,而对学校承担某一项目效果开展评估的研究成果较少,但对于提升工程2.0培训来说,“整校推进”是其培训的重要特征,因此构建“整校考核”的模型就显得尤为重要。本文结合吉林省提升工程2.0培训实践,阐述了PEPR培训指标体系确定的基本原则、指标体系的结构及其内涵,以及评价指标体系在提升工程2.0培训监测中的应用,为提升工程2.0培训监管模型的构建提供参考。

茉莉花茶窨制过程水分变化与香气品质变化的相关性分析

为探明茉莉花茶窨制过程水分迁移与香气组分变化规律,以窨花前、通花前、起花前、烘干后的茶样为材料,运用低场核磁共振技术分析水分分布情况结合顶空固相微萃取-气相色谱-质谱技术分析香气成分的组成和含量。结果表明:茉莉花茶窨制过程各个工序含水率差异极显著,除窨花前茶坯外,其他3个工序的花茶均出现结合水、弱结合水和自由水3个水分信号峰;结合水是主要的水分状态,峰面积比例呈先上升后下降趋势,且均高于窨花前;弱结合水峰面积比例呈先下降后上升趋势,均低于窨花前;自由水峰面积比例最低,在窨花前茶坯中未发现,在其他3个工序呈先下降后上升趋势。茉莉花茶窨制过程中共鉴定出75种香气成分,包括醇类、酯类、烯烃类、醛类、其他类。茶叶窨制过程吸附了茉莉花释放的香气,因此窨制完成烘干后花茶中各个类别香气成分的含量增加,其中酯类含量最高,达到9.721μg/g,醇类次之,为3.854μg/g,再者是烯烃类含量达到3.377μg/g,且种类最丰富,达到26种。与JTF(茉莉花茶香气)指数相比,XFJTF(茉莉花茶香气品质评价得分)指数呈“升-降-升”趋势,且其他3个工序的XFJTF指数值均高于窨花前,更适合评价茉莉花茶香气品质。相关性分析发现:结合水峰面积、弱结合水峰面积与醇类含量均呈正相关,自由水峰面积与酯类含量呈极显著负相关,与烯烃类含量呈极显著正相关。本研究为丰富茶叶吸香机理和调控茉莉花茶生产工艺参数提供一定理论依据。

茶树CsMYB基因启动子的克隆与功能分析

以茶树新品系"1005"嫩芽为材料,克隆得到CsMYB基因gDNA全长序列1 828 bp,通过染色体步移技术,分离得到CsMYB基因启动子片段1 038 bp,命名为proMYB。生物信息学分析表明,CsMYBgDNA由2个内含子和3个外显子组成,该启动子含有与提高基因转录水平相关的5′UTR Py-rich stretch顺式作用元件、启动子核心元件TATA-box和CAAT-box,还存在有激素响应元件、光响应元件、逆境应答元件以及大量功能未知或功能特异的顺式作用元件,说明proMYB具有诱导型启动子特性,CsMYB基因在茶树植物体中可能参与多种非生物胁迫应答和激素信号传导;通过烟草的瞬时表达结果表明,该启动子能驱动下游基因表达,具有启动子活性。

柳叶蜡梅醇提物对大黄鱼生长、肌肉品质及肠道形态的影响

目的:研究柳叶蜡梅醇提物对大黄鱼生长性能、肌肉品质和肠道形态的影响。方法:选取体质健康、平均体质量为10.31±2.88 g的大黄鱼500尾。各组分别在基础饲料中添加浓度为0、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的柳叶蜡梅醇提物,设为L-0(设为对照组)、L-0.5、L-1、L-2、L-4组。试验周期为8周。试验考察了大黄鱼的生长性能,肌肉质构、pH、系水力、肌纤维结构及肠道形态等指标。结果:在生长性能方面,与L-0相比,L-0.5、L-1、L-2、L-4组均能够显著提高大黄鱼的存活率(P<0.05);柳叶蜡梅醇提物能改善大黄鱼肌肉品质和肌纤维结构。其中L-4效果最好,与L-0相比,其肌肉硬度、胶粘性、内聚力、咀嚼性和肌纤维密度均显著提高(P<0.05),失水率、冷冻渗出率、pH下降率、肌纤维直径则显著降低(P<0.05);在肠道形态方面,与L-0相比,L-2、L-4组均显著提高了肠道绒毛长度和绒毛长度与隐窝深度之比(P<0.05),并降低了隐窝深度(P<0.05);相关性分析表明,柳叶蜡梅醇提物的浓度与大黄鱼肌纤维直径呈极显著(P<0.01)负相关关系;与鱼肠道绒毛长度呈极显著(P<0.01)正相关关系。同时,进一步分析发现大黄鱼肌纤维直径又与肌肉硬度、内聚力、胶粘性和咀嚼性呈显著(P<0.05)负相关关系;且内聚力与绒毛长度呈显著(P<0.05)正相关关系。结论:添加4%柳叶蜡梅醇提物的饲料能改善大黄鱼肌肉品质和肠道形态,其机理可能是由于柳叶蜡梅醇提物改善了大黄鱼消化道形态,促进营养物质吸收的同时,改善肌纤维形态,进而促进肌肉品质的改善。

气流因子差异化做青工艺对乌龙茶香气品质的影响

为探究气流因子在乌龙茶做青工艺中对其香气品质的影响,以鲜叶(CK)、常氧摇青叶(Ta)和乏氧摇青叶(Tb)及相应的毛茶a(Ma)和毛茶b(Mb)为试材,利用半定量反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription and Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、顶空固相微萃取法(Head-Space Solid-Phase MicroExtraction,HS-SPME)与气相色谱-飞行时间质谱联用(Gas Chromatography-Time-Of-Flight Mass Spectrometry,GC-TOF MS)等技术,通过多元统计分析等方式,对不同气流因子介导做青工艺的乌龙茶挥发性组分进行分析。结果表明:Tb中低氧胁迫响应因子Cs HIG4和CsHIG6基因的表达水平相较Ta和CK有所上调,基于毛茶中共鉴定出的205种挥发性组分,采用最小偏二乘法(Partial Least Squares,PLS)分析表明,以重要性投影指标值(Variable Important Projection,VIP)大于1.0为筛选条件,获得标志性差异挥发性成分有24个,其中吲哚的VIP值最大(4.75),α-法呢烯(3.06)、罗勒烯异构体混合物(2.77)、反式-橙花叔醇(2.75)等随后。乏氧摇青叶有5种特征差异挥发性组分,而常氧摇青叶中仅2种。毛茶感官审评结果发现,常氧摇青处理叶付制的乌龙茶香气清香持久,花香较显(香气感官得分90.67)。Ma中反式-橙花叔醇、2,3-二氢-3,5二羟基-6-甲基-4(H)-吡喃-4-酮、异植物醇、亚硫酸-2-乙基己基丁酯、6-氮杂双环[3.2.1]辛烷的含量均显著高于Mb(P<0.05),推测该5个物质可能是常氧摇青条件下形成较优品质乌龙茶的标志性代谢物,这有助于更好理解气流因子对摇青过程中香气物质代谢的影响,研究结果为探究环境因子介导下摇青工艺对乌龙茶香气品质的形成机制提供理论基础。

铁皮石斛与金钗石斛杂交及回交后代的SSR鉴定

[目的]鉴定铁皮石斛与金钗石斛杂交F1代和回交后代的真假性。[方法]以14株铁皮石斛与金钗石斛杂交F1后代及18株以铁皮石斛为母本回交后代为试验材料,从24对特异性SSR引物中筛选引物用以鉴定。[结果]从24对SSR基因组引物中,筛选出4对双亲多态性引物。用该4对石斛特异性引物可从14株杂交F1群体中鉴定出11株真杂交种,占杂交群体的78.6%;18株回交群体中,被4对引物同时鉴定出真杂种率达38.9%。[结论]利用SSR分子标记技术鉴定石斛种间杂交与回交是可行的,对提高石斛育种效率、缩短育种年限和石斛种质资源的保护与利用具有重要意义。

文心兰挥发性成分的GC-MS分析

[目的]对‘白仙女’(Oncidium‘White Fairy’)、‘百万金币’(O.sweet suger‘million dollars’)、‘野猫’(O.colmanara‘Wild Cat’)、‘红香水’(O.sharry Baby‘Sweet Fragrance’)、‘南茜’(O.‘Gower Ramsey’)、‘红梦香’(O.twink‘Red Fair’)等6种文心兰的挥发性成分进行鉴定.[方法]采用气质联用仪(GC-MS)进行挥发性成分测定,并通过峰面积归一法分析各组分含量.[结果]从‘白仙女’‘百万金币’‘野猫’‘红香水’‘南茜’和‘红梦香’中分别鉴定出33、11、12、12、15、9种挥发性物质,分别占总挥发性物质的71.7%、23.9%、26.1%、26.1%、32.6%、19.6%.6个文心兰品种挥发性物质可划分为酮类、醛类、萜烯类、醇类、烷烃类和其他等6大类香气成分.其中,‘红梦香’醛类含量最高,其他品种均以醛类和萜烯类为主.[结论]从6个文心兰品种中共检测出46种挥发性物质,各品种共有的挥发性成分仅Benzaldehyde、Cyclotetrasiloxane,octamethyl-和Cyclopentasiloxane,decamethyl-等3种;文心兰香气成分虽不尽相同,但其含量均以醛类和萜烯类占比最高.

油茶炭疽病病原菌的分离与鉴定

[目的]明确油茶炭疽病的主要病原菌种类,为其病害防治提供依据。[方法]以油茶病叶为材料,根据科赫法则,采用组织分离法进行病原菌分离,并进行形态学观察和致病性测定。在PDA培养基上挑取菌丝体并提取基因组DNA,进行ITS、ACT、CAL PCR多基因序列联合分析鉴定,通过MEGA 7.0软件构建系统发育树。[结果]从油茶病叶中分离到5株病原菌株DH1、DH2、DH3、DH4、DH5,鉴定为炭疽菌属,其中DH1、DH2、DH4、DH5为果生炭疽菌,DH3为山茶炭疽菌,形态学与分子生物学对病原菌的鉴定结果一致。[结论]引起油茶炭疽病的主要病原菌为果生炭疽菌和山茶炭疽菌。

Removal of Pollutants of Landfill Leachate by Recirculation

SAfter leached from municipal solid waste landfill was treated by recirculation, the concentration of pollutants decreases greatly, and the moisture content of the solid waste in landfill site was increased and waste stabilization rate was accelerated. Compared with traditional treatment methods, this method offers more important practical values, including short investment, enhanced treatment efficiency and facilitated operation and management. The experimental results indicated that a 99.9% removal of ammonia nitrogen and an 80.5% removal of COD were obtained, when hydraulic power surface load is 15.92 L/m^2·d, and organic surface load is 25.54 g/m^2·d.

基于“针药异效互补”理论探讨益气活血通脉法配合针刺治疗气虚血瘀型顽固性面瘫22例

目的:观察“针药异效互补”治疗气虚血瘀型顽固性面瘫的临床疗效。方法:将甘肃中医药大学附属医院针灸中心面瘫专科、神经内科的门诊及住院收治的气虚血瘀型顽固性面瘫患者66例,按1∶1∶1的比例随机分为3组。对照A组给予单纯普通针刺(阳白、攒竹、颧髎、迎香、人中、地仓、颊车、夹承浆、手三里、合谷、中脘、气海、足三里、三阴交、太溪);对照B组给予中药口服(黄芪、当归、赤芍、川芎、地龙、桃仁、红花、木瓜、伸筋草、白芷、白术、制白附子、茯苓);治疗组给予针药并用治疗(取穴及用药同对照A组和B组)。针刺治疗1 d 1次,中药组每日内服中药1剂,治疗组在饭后30 min服用中药,再进行针刺。3组均治疗10 d为1个疗程,每个疗程间休息2 d,共治疗4个疗程,分别在第2个疗程及第4个疗程后判定疗效。结果:治疗组在疗效及症状改善方面优于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:在针刺配合中药治疗气虚血瘀型顽固性面瘫过程中,针刺和中药发挥各自的治疗效应,同时达到两者异效互补之功,因此不仅能提高临床效果,而且能大大缩短其疗程,是治疗气虚血瘀型顽固性面瘫的较佳疗法组合。

不同发酵模式下白黄侧耳的农艺性状

白黄侧耳是一种世界性栽培的优质食用菌。为白黄侧耳子实体生产提供有价值参考,本研究考察白黄侧耳4种发酵模式(液体发酵、半固态发酵、固化培养基发酵和固态发酵)下的农艺性状。出菇试验结果显示,白黄侧耳固态发酵原基时间最短(26.45 d),其次是半固态发酵(28 d)和液体发酵(33.75 d),固化培养基发酵原基时间最长,为39.83 d。固态发酵子实体生长时间最短(8.5 d),液体发酵最长(26 d)。固态发酵生产周期最短(35.33 d),其次是半固态发酵(42.54 d)和液体发酵(59.67 d),固化培养基发酵周期最长(62.33 d)。固态发酵单菇重最大(3.41 g),固化培养基发酵最小(0.63 g)。半固态发酵产量最高(16.34 g/瓶),固化培养基发酵最低(1.64 g/瓶)。综上所述,白黄侧耳子实体生产上固态发酵和半固态发酵优于液体发酵和固化培养基发酵。本研究可为创新食用菌生产模式、发酵方法选择以及为白黄侧耳担孢子获取提供有价值参考。

基于UbD理论落实生物学核心素养的教学设计——以“细胞的能量‘货币’ATP”为例

UbD(understanding by design)理论是以明确的学习目标为起点,强调可视化教学评价先于教学活动确定,教学活动是在教学评价的指引下展开的一种区别于传统的教学模式。本文基于UbD理论,“细胞的能量‘货币’ATP”为例进行教学设计,旨在在课堂上落实学科核心素养。