基于倾向评分回归调整探讨艾灸治疗常年变应性鼻炎灸感与灸效的前瞻性队列研究

目的:采用倾向评分回归调整(PSRA)均衡基线资料,比较艾灸同一穴位(上印堂)不同灸感(热敏灸态vs静息态)治疗常年变应性鼻炎(PAR)灸效差异。方法:采用前瞻性队列研究设计,纳入106例合格受试者,用艾条悬灸上印堂激发灸感,根据热敏灸感的有无,自然分组为热敏灸组(n=69)和传统灸组(n=37)。两组均在上印堂施灸,每次时间为30min,每天1次,连续四周,共计24次。结局指标为变异性鼻炎症状量表(TNSS)、伴随症状量表(TNNSS)以及生存质量调查问卷(RQLQ)。结果:使用PSM进行1:1配对,匹配容差0.02,成功匹配25对,共50例患者。两组患者基线资料均无统计学差异(P>0.05)。匹配后,治疗后热敏态组TNSS评分为4.01±1.52,低于静态组的5.42±1.10,有统计学意义(P<0.01);热敏态组TNNSS评分为1.26±0.43,低于静态组的1.52±0.50,有统计学意义(P<0.01);热敏态组RQLQ评分为37.62±6.01,低于静态组的47.22±7.76,有统计学意义(P<0.01);说明热敏灸组在改善PAR患者症状、体征和生活质量方面均有疗效优势。将倾向性评分匹配前单因素分析具有差异的结果纳入进行多因素logistic回归分析,结果显示,是否用药、病程为艾灸疗效的独立危险因素(P<0.05)。结论:艾灸热敏态穴位治疗PAR的临床疗效优于静息态组。

补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠线粒体氧化损伤和PKCε-Nampt通路的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注(I/R)大鼠线粒体氧化损伤及PKCε-Nampt通路的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组(14.3 g/kg)和依达拉奉组(3 mg/kg),除假手术组外均采用MCAO法建立脑I/R损伤模型,术后24 h各组给予相应剂量药物,给药7 d后通过神经功能评分评估神经功能缺损情况,免疫荧光检测神经元标志物MAP-2表达,观察神经元损伤情况,检测ROS、MDA水平和SOD活性评价氧化损伤情况,荧光探针JC-1检测线粒体膜电位变化,修饰酶循环法检测NAD^(+)/NADH比值,Western blot法检测PKCε、p-PKCε、Nampt蛋白表达,免疫组化法检测p-PKCε、Nampt蛋白阳性表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组脑梗死体积、神经功能评分降低(P<0.05),脑组织MAP-2荧光强度增强(P<0.05),神经元损伤减轻,脑组织ROS、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性、线粒体膜电位、NAD^(+)/NADH比值升高(P<0.05),p-PKCε、Nampt蛋白表达升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过激活PKCε-Nampt信号通路、提高线粒体功能来减轻大鼠脑I/R损伤。

基于SNP芯片分析贵州地方鸡品种(类群)的遗传多样性

【目的】了解贵州地方鸡品种遗传多样性及确定品种间的遗传关系,为贵州地方鸡品种(类群)资源的保护和创新利用提供参考依据。【方法】采集香炉山鸡(SL)、瑶山鸡(YS)、黔东南小香鸡(XX)和威宁鸡(WN)共66份血液样本,基于京芯一号鸡55K SNP芯片对4个贵州地方鸡品种(类群)进行SNP位点检测,采用Plink v1.90、VCFtools v0.1.17和Admixture v1.3分别进行遗传多样性、群体结构及亲缘关系分析。【结果】4个贵州地方鸡品种(类群)的有效群体含量(Ne)介于3.1~3.2,且期望杂合度(He)均低于观察杂合度(Ho),多态信息含量(PIC)排序为威宁鸡(0.8583)>瑶山鸡(0.8350)>黔东南小香鸡(0.8123)>香炉山鸡(0.8001),均大于0.50,呈高度多态性,遗传多样性丰富。基于状态同源(IBS)遗传距离矩阵构建的系统发育进化树显示,香炉山鸡的分支最长、威宁鸡的分支最短。主成分分析(PCA)结果表明,4个贵州地方鸡品种(类群)间的界限分明,且各品种(类群)间无相互渗透现象;在Admixture祖代分析中,祖先集群数量(K)=2时,群体分群效果最佳,说明4个贵州地方鸡品种(类群)有2个共同的祖先。4个贵州地方鸡品种(类群)间的群体分化系数(Fst)接近0.05,说明群体间并未产生明显分化。4个贵州地方鸡品种(类群)的G矩阵亲缘关系分析结果和IBS遗传距离分析结果一致,香炉山鸡群个体间的亲缘关系和遗传距离最近,而威宁鸡群个体间的亲缘关系和遗传距离最远。【结论】4个贵州地方鸡品种(类群)遗传多样性较丰富,且品种(类群)间的界限明显,无相互渗透现象,但亲缘关系中有部分品种(类群)间存在近交风险,因此今后的育种工作应进一步改良香炉山鸡和黔东南小香鸡的配种方式,并适当增加群体数量及公母比例,以避免近交衰退。

补阳还五汤增强GPX4表达抑制铁死亡减轻脑缺血再灌注损伤

目的探讨补阳还五汤减轻脑缺血再灌注损伤是否通过增强GPX4的表达抑制铁死亡的机制。方法选取健康雄性SD大鼠48只,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、补阳还五汤组(BYHWD组)、阳性对照药组(DFO组)。所有实验动物均建MCAO/R模型(假手术组仅剥离)。BYHWD组给予补阳还五汤灌胃处理,DFO组给予DFO腹腔注射处理,其余组予以生理盐水灌胃处理。再灌注72 h进行指标评定及取材。神经功能评分检测神经功能;TTC染色测定脑梗死面积;尼氏染色观察脑组织形态结构;生化试剂检测血清GSH、丙二醛(MDA)、脑组织铁含量;免疫荧光和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能损伤明显,脑梗死体积增多,脑组织病理学损伤明显,尼氏体数量减少,脑组织铁含量、血清MDA含量明显增加,血清GSH含量、脑组织GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤组大鼠神经功能明显好转,脑梗死体积降低,脑组织病理学损伤减轻,脑组织铁含量、血清MDA含量降低,血清GSH含量,脑组织GPX4的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论补阳还五汤抑制脑缺血再灌注损伤可能通过增强GPX4的表达抑制铁死亡而发挥作用。

金鱼藻茎叶腐烂分解对枯落物表面真菌的影响

真菌是植物枯落物主要分解者之一,其在枯落物分解以及生物地球化学循环中发挥着重要作用。目前关于沉水植物枯落物分解对真菌群落结构等的影响研究较为匮乏。笔者以沉水植物金鱼藻(Ceratophyllum demersum)为研究对象,采用2种不同孔径分解袋构建枯落物腐烂分解野外实验系统,定期(6、28、145 d)采集枯落物样品,采用内部转录间隔区(ITS)高通量测序技术对枯落物表面真菌群落结构及多样性进行分析,并揭示枯落物理化参数及所在水域水质参数对真菌的影响。结果表明,18个金鱼藻枯落物样品共获得2786个可操纵分类单元(OTU),包含13门42纲110目262科542属,优势门为子囊菌门(Ascomycota),相对丰度为46.31%。3个分解时间内枯落物真菌α多样性指数无显著差异(P>0.05),而真菌群落结构则随着分解时间延长呈明显变化。基于韦恩图(Venn)、层级聚类以及主坐标分析(PCoA)结果证实,同一分解时间枯落物真菌群落组成较为相似,而不同分解时间枯落物真菌群落组成发生明显改变。相似性分析(ANOSIM)以及置换多元方差分析(PERMANOVA)表明,枯落物真菌群落结构的显著性差异受分解时间的影响(P<0.05),而不受枯落物分解袋孔径差异的影响(P>0.05)。典范对应分析(CCA)以及冗余分析(RDA)揭示了真菌群落结构变化与枯落物生物量、分解速率、全氮(TN)、全磷(TP)、全碳(TC)含量、碳氮比(C/N)以及氮磷比(N/P)等参数间存在显著相关性(P<0.05)。所在水域水体TN和TP浓度、COD、pH值、DO浓度以及温度因子亦对真菌群落结构的变化产生显著影响(P<0.05)。斯皮尔曼相关性热图以及曼特尔检验进一步验证了金鱼藻枯落物真菌物种及群落组成受枯落物理化特性及其所在水域水质参数的双重影响。

杭州市拱墅区入境人员猴痘预防认知态度行为现状调查

目的了解杭州市拱墅区入境人员猴痘预防认知态度行为的现状,为降低猴痘的输入风险提供科学依据。方法本研究采用随机抽样法,于2022年11—12月选取拱墅区入境集中医学隔离观察点多16岁的人员为调查对象,自行设计《入境人员猴痘预防知识现状调查问卷》,通过“问卷星”制作电子问卷进行线上调查。对猴痘预防知识知晓率、态度、行为和获取的信息途径进行描述性分析,组间差异比较采用趋势χ^(2)和χ^(2)检验。结果有效调查入境人员293名,猴痘预防知识总体知晓率为44.71%,不同性别、年龄、婚姻状况、职业和文化程度的人猴痘预防知识认知差异均有统计学意义(P<0.05)。93.52%的人对猴痘疫情有不同程度的关注;62.80%的人对感染猴痘有不同程度的担心;仅有3.75%的人有猴痘疫苗接种史;若有相关症状,仅有59.73%的人会马上去医院发热门诊就诊;主要是通过网站/新闻APP(86.01%)、微信/微博(60.41%)获取预防知识。结论入境人员对猴痘疫情总体知晓率不高,有一定的担心和关注度;疫苗接种率较低,科学就医行为不够,应通过网络等多种途径加强猴痘预防知识的宣传,提高入境人员的防护意识,降低猴痘输入性风险。

补阳还五汤与黄芪甲苷治疗缺血性脑卒中大鼠的疗效比较研究

目的:比较补阳还五汤与黄芪甲苷治疗大鼠缺血性脑卒中的疗效。方法:将50只SD大鼠随机分组,分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、补阳还五汤组(BYHWD组)、黄芪甲苷组(AS-IV组)与血塞通组(XueSaiTong组),每组各10只。建立大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral arterial occlusion,MCAO)模型,利用Zea Longa法评估神经功能缺损程度,TTC染色检测脑梗死体积,HE染色观察神经细胞病理形态学改变,尼氏染色观察尼氏体变化,免疫组化染色、免疫荧光染色观察和比较神经元特异性核蛋白NeuN表达。结果:与MCAO组相比,BYHWD组、AS-IV组和XueSaiTong组大鼠神经功能缺损症状均减轻(P<0.05),脑梗死体积缩小(P<0.05),神经细胞形态规则,尼氏体数量增多(P<0.05),NeuN蛋白表达升高(P<0.05);与AS-IV组相比,BYHWD组神经功能缺损症状有所减轻,但差异无统计学意义(P>0.05),其余检测结果以BYHWD组疗效较好(P<0.05)。结论:补阳还五汤、黄芪甲苷二者均可起到减轻MCAO大鼠神经功能缺损的效果,发挥神经保护作用;其中补阳还五汤治疗效果更好。

青风藤活性成分对糖尿病db/db小鼠氧化应激、炎症反应及免疫功能的影响

目的:探讨青风藤活性成分对糖尿病(diabetes mellitus,DM)db/db小鼠肾脏的保护作用及其机制研究。方法:30只6周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组(等体积生理盐水),阳性组(195 mg/kg/d羟苯磺酸钙),盐酸青藤碱(Sinomenine Hydrochloride,SH)低、中、高剂量组(31.2、62.4、124.8 mg/kg/d SH)5组,同时选取6只同周龄db/m小鼠设为对照组(等体积生理盐水),每日1次,定时灌胃给药,连续6 w。于12 w末观察各组小鼠一般情况,检测尿微量白蛋白(mAlb)、血肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;试剂盒检测肾组织匀浆中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平;Luminex多因子检测技术测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的含量;ELISA法检测血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)及补体蛋白3(C3)的水平;苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肾脏组织病理形态变化;透射电镜观察肾脏超微结构的改变。结果:与模型组比较,阳性组和SH低、中、高剂量组小鼠mAlb、SCr和BUN水平均降低(P<0.05);肾组织匀浆中MDA水平降低(P<0.05),GSH水平和SOD活性均升高(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IgG、IgM、IgA和补体C3水平均降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05);镜下肾小球损伤及肾小管上皮水肿情况均有所改善,肾组织损伤减轻。结论:青风藤活性成分对DM db/db小鼠的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与改善氧化应激反应,缓解炎症反应及提高免疫功能有关。

血浆置换联合双血浆分子吸附系统对3~4级药物性肝损伤的疗效

目的评估血浆置换(PE)和双血浆分子吸附系统(DPMAS)联合治疗3~4级药物性肝损伤患者的效果。方法回顾性分析岳阳市中心医院2020年6月至2021年2月接诊的64例3~4级药物性肝损伤患者的临床资料。其中PE联合DPMAS治疗32例,单纯药物治疗32例。对比治疗前后两组临床疗效、TBil、ALT、AST、凝血功能指标(PT)的变化,并对不良临床反应的发生情况进行记录。结果PE联合DPMAS组的总有效率为87.5%(28/32),比单纯药物组的65.6%(21/32)明显提高。PE联合DPMAS组在降低胆红素和提高凝血功能(P值分别为0.017和0.025)方面有更好的表现,而两组治疗后转氨酶比较差异无统计学意义(P值分别为0.497和0.103)。两组不良事件发生率无明显差异。结论采用PE联合DPMAS治疗3~4级药物性肝损伤疗效确切,安全性高。

入口流量对螺旋溜槽首圈流场演变及矿物颗粒分布的影响

螺旋溜槽首圈流场特性及其演变对矿物颗粒运动与分离结果具有决定性影响.针对实验室ϕ300 mm螺旋溜槽,采用RNG k-ε湍流模型､VOF和Eulerian Multi-fluid VOF多相流模型,系统考察了入口流量对螺旋溜槽首圈流场演变及赤铁矿和石英颗粒分布的影响.结果表明,增加入口流量会延长外缘处流膜形态､主流及二次环流达到稳定时的历程;随着入口流量的增大,石英和赤铁矿的分层效果得到增强,赤铁矿分布范围相应变宽,而石英向外缘流膜中的迁移量增加;首圈的最大分离效率随入口流量的增大呈现先增大而后渐稳的趋势,适宜的最低入口流量为7 L/min,此时首圈的最大分离效率可达61.45%.

三种不同动灸手法激发变应性鼻炎患者热敏灸感效率与灸效相关性研究

目的:观察三种不同动灸手法下,变应性鼻炎(AR)患者热敏灸感激发效率与灸疗的差异性,探讨其相关性。方法:纳入90例AR患者,采用随机数字表法,随机分为三组,分别是回旋灸组(30例)、雀啄灸组(30例)和循经往返灸组(30例)。受试者均以印堂、神庭、迎香、肺俞等穴位为高发穴区探寻部位,分别予以回旋灸、雀啄灸、循经往返灸为探查方式,确定热敏灸穴位后进行系统治疗,每日1次,10次一疗程,共2个疗程。评价各组患者的灸感情况(灸感出现的时间、持续时间、灸感类型构成),比较各组患者治AR症状体征评分、鼻结膜炎生存(RQLQ)评分及其临床疗效。结果:雀啄灸组的灸感出现时间较回旋灸组和循经往返灸组更早(P<0.05),灸感持续时间更长(P<0.05);三组灸感类型没有差异(P>0.05);雀啄灸组RQLQ评分、AR症状体征评分更低(P<0.05),回旋灸组和循经往返灸组没有差异(P>0.05);回旋灸组愈显率为86.67%,雀啄灸组愈显率为93.33%,循经往返灸组愈显率为86.67%。雀啄灸组的愈显率高于回旋灸组、循经往返灸组(P<0.05)。结论:在以热敏灸疗法为干预措施治疗AR时,可施以雀啄灸的动灸手法以更高效地激发热敏灸感,维持更长时间的灸感及取得更好的临床疗效。

补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过PI3K/AKT通路调控自噬抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用。方法大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(Sham)、模型组(Model)、补阳还五汤组(BYHWD)、PI3K抑制剂组(LY294002)与溶媒剂组(Vehicle)。除Sham组外,其余各组均缺血2 h,再灌注72 h造模处理。Zea Longa评分评估神经缺损、TTC检测脑梗死体积、HE观察脑部缺血半暗带(ischemic penumbra,IP)损伤、免疫荧光检测LC3B、Western blot检测PI3K/AKT通路与自噬标志蛋白。结果BYHWD组与Model组相比,大鼠神经功能评分降低、脑梗死体积减小、脑部IP病理损伤减轻,PI3K与p-AKT/AKT表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ降低,p62升高(P<0.05);BYHWD的调控作用被LY294002减弱(P<0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/AKT通路抑制细胞自噬,从而减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤。

热敏灸治疗神经根型颈椎病的系统评价与meta分析

目的评价热敏灸治疗神经根型颈椎病的临床疗效与安全性。方法检索CBM、CNKI、万方、VIP、PubMed、The Cochrane Library等数据库,自建库至2020年11月30日收录的热敏灸治疗神经根型颈椎病的随机对照试验报告。根据纳入标准与排除标准筛选文献,由2名研究者进行初筛、复筛及质量评价,运用RevMan 5.2.7软件分析计算,对有效率、治愈率、VAS积分等治疗效应进行合并分析。结果纳入14篇参考文献,合计1316例患者。Meta分析显示,热敏灸的总有效率显著高于对照组[RR=0.13,95%CI(0.09,0.16)],治愈率显著高于对照组[RR=1.62,95%CI(1.40,1.87)];热敏灸在缓解VAS积分方面显著优于对照组[MD=-1.48,95%CI(-2.16,-0.80)]。2项研究提及未见明显不良反应。结论热敏灸单纯运用或与针刺、电针、手法、神经阻滞等方法联合,均能提高CSR治疗的有效率、治愈率,在缓解患者疼痛方面也优于其他单一疗法。

壁面粗糙度对螺旋溜槽中矿浆流动及颗粒分离行为的影响

随着生产过程的进行,螺旋溜槽的壁面粗糙度并非定量且变化复杂,若控制不当则会严重影响物料分离效果.借助于前期确立的流场模型和颗粒相计算模型,系统考察壁面粗糙度对?400 mm螺旋溜槽中赤铁矿-石英矿浆流动和颗粒分离行为的影响.模拟结果表明:矿浆深度、雷诺数及流速具有明显径向分布差异和波动特性.随粗糙度增大,分选流体空间在粗糙度高度达到0.1 mm及以上时严重收缩,层流分布范围扩大,过渡流范围变窄;速度与粗糙度具有明显相关性,在较高粗糙度下,主流和内环流波动增强,内环流出现明显间断;在0.1 mm以下范围内增大粗糙度高度有利于粗粒赤铁矿向内缘区域聚集,粗粒赤铁矿和细粒石英的分离效率能维持高位,继续增大粗糙度,其分离效率显著降低;提高粗糙度加剧细粒赤铁矿在中、外区域的分布,细粒赤铁矿与石英的分离效率大幅降低.颗粒分离行为变化与流场特性改变密切相关.

黄芪甲苷调控自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡

目的探讨黄芪甲苷通过调控自噬,对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响。方法将HT22细胞随机分为正常组(Control)、模型组(Model)、溶剂对照组(DMSO)、黄芪甲苷组(AS-IV)、黄芪甲苷组加正常细胞组(AS-IV+N)、黄芪甲苷加自噬抑制剂组(AS-IV+3-MA)、自噬抑制剂组(3-MA)、自噬激活剂组(Rapa)。除正常组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后复氧复糖。镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞存活率,LDH法检测细胞损伤,免疫荧光染色检测细胞凋亡。结果与正常组比较,模型组细胞胞体突触减少,细胞皱缩,细胞间连接减少;细胞存活率明显降低,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01)。与模型组比较,AS-IV组、Rapa组细胞存活率明显升高,LDH漏出率、Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01);3-MA组细胞存活率明显降低,Bax/Bcl-2明显升高(P<0.01);AS-IV+3-MA组无明显差异。结论黄芪甲苷可通过激活自噬,抑制缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡。

微信平台联合家庭参与式护理模式在慢性肾脏病患者自我管理中的应用

目的:探讨微信平台联合家庭参与式护理模式在慢性肾脏病患者自我管理中的应用效果。方法:将肾内科出院的190例非透析期慢性肾脏病(CKD)患者随机分为观察组(n=96)和对照组(n=94)。对照组出院后给予电话回访护理干预,观察组给予基于微信平台联合家庭参与的护理干预模式,比较两组患者在出院时、干预半年和1年后的自我管理评分、血压、血肌酐(Scr)及估算肾小球滤过率(eGFR)。结果:干预后观察组自我管理总分和各维度得分均高于对照组,且干预时间越长,患者的得分差异越明显(P<0.01);干预半年后,观察组血压值低于对照组(P<0.05),但两组Scr、估算eGFR比较,差异无统计学意义(P>0.05);干预1年后观察组血压值、Scr低于对照组,估算eGFR高于对照组(P<0.05)。结论:基于微信平台联合家庭参与式护理模式有助于提高CKD患者自我管理能力,有效控制血压,延缓肾功能衰竭进展。

以案例为线索的讨论式教学在MBBS留学生皮肤病见习中的应用

目的探讨以案例教学法贯穿于教学活动中同时结合讨论式教学在MBBS留学生皮肤病临床见习中的意义.方法在MBBS皮肤性病学的见习教学中,将学生随机分为2组,一组为实验组,采用案例教学法结合讨论式教学法,共42人;另一组为对照组共42人,采用传统讲授法.2组教学内容为相同老师进行教学活动.将2组教学效果进行对比性研究.结果在学期结束时,实验组与对照组考试成绩相比较虽然没有统计学意(P>0.05),但是考试高分数人数更多;在对以案例教学结合讨论式教学的实验组进行问卷调查中,学生认为这样的教学模式对训练临床思维、提升创造性思维和学习兴趣、培养学习能力和激发学习潜能方面有帮助,同时并没有增加学习压力.结论以案例为线索的讨论式教学在MBBS留学生皮肤病见习中有积极的意义,可提高MBBS留学生的学习兴趣,锻炼临床思维和临床技能,对培养MBBS留学生人才的培养有一定帮助.

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P <0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P <0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P <0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P <0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。

沉默beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响

目的探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型组(model)、beclin1基因沉默组(beclin1^-/-)、转染对照组(control)。除normal组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。利用RNAi技术,针对小鼠c DNA序列设计beclin1干扰序列,用脂质体Lipo2000包裹后转染至HT22细胞。于转染48 h后用荧光显微镜观察转染效率,Western blotting检测细胞beclin1表达情况。各组细胞均于复氧复糖24 h后采用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,免疫荧光染色检测Bax、Bcl-2表达及比值变化,Western blotting检测LC3、P62及Caspase-3表达。SPSS 19. 0统计学软件进行数据分析。结果与normal组相比,model组细胞活力及P62蛋白表达显著降低(P<0. 01),乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Caspase-3表达及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0. 01)。与model组相比,beclin1^-/-组细胞活力及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P<0. 01),LDH漏出率、Bax/Bcl-2及P62、Caspase-3表达显著升高(P<0. 01);control组与model组比较差异无显著性。结论沉默beclin1抑制细胞自噬可使缺氧缺糖/复氧复糖处理的HT22细胞损伤加重,细胞凋亡进一步增加。

神经干细胞提取与培养方法的比较研究

目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果 (1)胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。(2)采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。(3)以1.0×109·L^(-1)密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。(4)悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。(5)半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。(6)原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。(7)14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×10~9·L^(-1)1的密度接种于25 cm^2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3 d加液1~1.5m L,每6~7 d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。