表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价

为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。

某660 MW超临界锅炉深度调峰过程中分隔屏超温计算分析及改造方案研究

针对660 MW超临界褐煤锅炉分隔屏实炉数据分析发现,在175 MW负荷下,分隔屏的超温报警主要发生在屏3、屏4靠近炉内的管子。为解决分隔屏超温报警问题,采用流动网络系统法,结合质量、能量和动量守恒方程建立了分隔屏水动力计算数学模型,提出添加节流圈以及升级管子材料两种改造方案。对分隔屏进行回路及管段划分,采用175 MW负荷实炉测量数据反推计算得到炉内实际热偏差,对低、中、高负荷下添加节流圈与升级材料为Super304H的分隔屏出口汽温进行计算。计算结果表明:添加节流圈后分隔屏出口汽温偏差变小,且屏3、屏4出口汽温降低至材料TP347H报警温度以下;升级材料为Super304H后分隔屏出口汽温均小于材料的报警温度,分隔屏可安全运行。对添加节流圈以及将材料升级为Super304H两种方案进行壁温计算及强度校核,结果显示两种改造方案在各个负荷下,壁温以及强度均是安全的。为给锅炉运行留出更大的安全裕度,建议在分隔屏最后一片屏上添加节流圈的同时将材料由TP347H升级为Super304H。

表观遗传修饰对ABO基因表达影响的研究进展

ABO血型的精准鉴定对临床安全输血至关重要。血清学和基因分型技术的应用使疑难血型鉴定问题得到一定程度的解决,但临床仍有表型与基因型不匹配的问题存在,影响血型鉴定和有效输血。表观遗传修饰是调控基因表达的重要方式,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控。ABO基因的表达受到表观遗传机制的调控,因此表观遗传修饰对ABO基因表达的影响可能是这部分血型难以鉴定的分子机制之一。DNA甲基化水平对ABO基因表达影响的研究较多,但有关其他表观遗传修饰机制的研究较少,尤其是多种类型的非编码RNA被发现,它们对ABO基因表达的调控机制需要更多的研究进行探讨。

稀土Y对铜线材抗氧化行为的影响机理研究

目的针对纯铜线材的抗氧化性能不足问题,通过稀土微合金化制备了含微量Y元素的铜线材,研究稀土Y含量对铜线材抗氧化性能的影响。方法采用扫描电子显微镜(SEM)、EDS能谱仪和X射线衍射仪等表征手段,分析了氧化膜脱落后基体表面形貌以及稀土Y元素在氧化过程中的存在形式与氧化膜的生长过程,揭示了添加稀土元素Y提高纯铜抗氧化性能的作用机理。结果稀土Y的引入提高了纯铜线材的抗氧化性能,在600℃、10 h条件下,Cu-0.03Y线材相对于Cu线材氧化增重率由0.55%降低至0.2%,降幅达63%。稀土元素Y的添加使铜线材的(100)晶面占比减少,(111)晶面占比增多,基体表面易被活化的(100)原子面占比降低,铜线材的抗氧化性能提高。在Cu-0.1Y线材中稀土元素浓度较高时发生偏聚,稀土元素与氧的亲和力大于铜与氧的亲和力,偏聚处形成不连续的稀土氧化物,使氧离子与铜离子的接触反应面积增大,相比Cu-0.03Y线材抗氧化性能降低。结论氧化过程中稀土离子的扩散速率慢、半径大,对铜离子的向外扩散起到阻碍作用,降低了铜离子的扩散速度,提高了铜线材的抗氧化性能。

猪流行性腹泻病毒PEDV SD株的分离及体外3D肠道类器官感染模型建立

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是一种主要感染仔猪小肠的肠道冠状病毒。本研究旨在建立一种用于PEDV体外研究的仔猪小肠类器官模型。首先从PEDV发病猪场的临床仔猪腹泻样品中分离PEDV并进行全基因组测序,结果显示成功分离1株PEDV,命名为PEDV SD株。另外采用肠道类器官的培养技术,从10日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝组织,经过体外培养7 d左右分化成具有肠道隐窝结构的猪小肠类器官,并能进行连续传代。然后将分离的PEDV SD株感染传代培养的猪小肠道类器官,通过间接免疫荧光试验显示PEDV可以很好地感染猪小肠道类器官,表明成功建立了PEDV感染肠道类器官的模型。猪小肠类器官感染模型可以在体外很好地重现PEDV感染肠道细胞的复杂结构的过程,为深入研究PEDV的致病机制提供一种新的可再生的体外研究模型。

基于数值模拟的通海阀铜合金铸件工艺优化

针对某船舶通海阀在铸造过程中易产生缩孔、缩松等缺陷问题,以Cu-7Ni-7Al-4Fe-2Mn合金通海阀铸件为研究对象,使用三维制图软件UG构建了铸件3D模型,并结合通海阀铸件的结构特性,设计了底注式浇注系统。利用数值模拟软件模拟了铸件的砂型铸造过程,分析了可能出现缩孔、缩松缺陷的位置,优化了通海阀铸件的浇注系统。研究了浇注温度、浇注时间、铸型预热温度等参数对铸件缩孔、缩松率的影响规律,结合正交试验方法优化出匹配的铸造工艺参数。研究结果表明,工艺参数对通海阀铸件缩孔率的影响程度从大到小依次是浇注时间、铸型预热温度、浇注温度。优化后的工艺参数分别为浇注温度1 200℃,浇注时间30 s,铸型预热温度35℃。通过在铸造缺陷较多的部位增大冒口尺寸,有效减少了缩孔、缩松铸造缺陷的产生。

盆腔肿块检查过程中应用腹部超声诊断的价值分析

目的探讨采用腹部超声检查方法实施盆腔肿块检查的临床价值。方法随机选取2021年2月—2023年5月金乡县人民医院80例疑似盆腔肿块患者为研究对象。所有研究对象均进行腹部超声检查、阴道超声检查以及腹部超声检查+阴道超声检查,以病理诊断作为金标准,比较腹部超声检查、阴道超声检查单独和联合诊断效能。结果腹部超声+阴道超声诊断特异度为96.67%,诊断灵敏度为96.00%,诊断准确度为96.25%。阴道超声诊断效能和腹部超声诊断效能结果比较,差异无统计学意义(P均>0.05);但腹部超声+阴道超声联合诊断敏灵敏度和准确度高于单独诊断,差异有统计学意义(χ^(2)=17.292,27.733,P均<0.05)。结论临床盆腔肿块患者的诊断采用腹部超声检查的价值明显,但此种方法存在一定的误诊率以及漏诊率。因此实际应用中,提倡腹部超声和阴道超声联合应用完成诊断,可显著提升盆腔肿块患者的诊断效能。

我国西部地区社区教育高质量发展路径研究——基于对西部12省(市区)社区教育调研分析

社区教育是我国教育事业的重要组成部分,在构建全民终身学习体系、建设学习型社会、推进社区治理中发挥重要作用。在新时代推进西部大开发形成新格局、建设高质量教育体系战略背景下,必须加快推动西部地区社区教育快速健康发展。经过多年的探索,西部地区社区教育在办学网络体系、师资队伍、办学机制等方面都取得了明显进展;目前依然存在管理体制不完善、机构设置不健全、经费保障不充足、教学服务能力较弱、区域发展不均衡等诸多问题;必须加强多元协同治理,完善五级网络办学体系,拓宽经费投入渠道,加强工作队伍建设,推进数字化应用。

原位环刀采样技术的工程实践与意义

准确获取岩土物理力学参数指标及分布是勘察工作的主要任务。通过分析传统采样方法的环节和操作技术,发现其在采取、封装、运输、制作环节对样品存在严重扰动,使用原位环刀采样器采样可以很好的解决以上问题。通过试验和工程应用表明:①原位环刀采样器采取的岩土样,室内测试的物理力学指标较传统方法更接近真值;②原位环刀采样器可广泛应用于颗粒粒径小于5mm的地层中进行采样;③原位环刀采样器实现岩土测试试件的采制一次性完成;④原位环刀采样器采取的标准试样,消除了石蜡、胶带、铝皮等一次性材料的使用,降低室内固体垃圾产量超过60%;⑤降低现场工作操作难度,提高对样品的密封性能及避免结构被扰动。

有机茶园病虫害防治原则及防治技术

近年来,有机农业在全球范围内迅速发展。发展有机茶生产是我国茶产业优质发展的需求,也符合我国现阶段提出的绿色农业发展理念。经过30多年的发展,有机茶产业在我国已初具规模,有机茶逐渐得到国内外消费者的认可。茶树病虫害防治是有机茶生产过程中最为重要的环节之一,对投入品的选择有严格的要求。本文总结和分析了有机茶生产原则、有机茶园病虫害防治理念、有机茶园主要病虫害种类及特点以及防治技术,以期为有机茶园病虫害防治提供参考。

猪源盖塔病毒抗体间接ELISA检测方法的初步建立及其优化

为了建立猪源盖塔病毒(GETV)血清学ELISA抗体检测方法,本实验首先在PK-15细胞上增殖猪源盖塔病毒(GETV-SD1),并对病毒进行灭活处理和超离纯化,将纯化的灭活GETV作为包被抗原,经过包被条件的优化,初步建立了GETV特异性抗体检测的间接ELISA方法。结果显示:GETV粒子的最佳包被浓度为200 ng/孔,最佳包被条件为4℃孵育过夜,最佳封闭条件4℃封闭2 h,血清最佳孵育条件为37℃孵育2 h,血清最佳稀释比1∶200,临界值为0.181;特异性检测试验结果表明,该检测方法具有GETV特异性;所建立的方法也具有较好的重复性,批内、批间重复率变异系数均小于10%;通过稀释阳性血清表明该方法具有较好的敏感性。本研究建立的猪源盖塔病毒抗体的间接ELISA检测方法为GETV抗体的有效监测奠定了坚实的基础。

宿主天然免疫因子在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染中的作用机制研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的急性接触性传染病,给养猪业造成的经济损失巨大。PRRSV感染机体之后,宿主体内的免疫系统识别PRRSV,多种天然免疫因子会与PRRSV蛋白相互作用以对病毒感染产生影响。本文主要综述了宿主体内天然免疫抑制因子影响PRRSV感染的相关机制,为解析PRRSV的致病机制以及研发PRRS防控技术提供理论依据。

非洲猪瘟病毒p17蛋白的哺乳动物细胞表达及鉴定

研究旨在利用哺乳动物细胞悬浮培养系统表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p17蛋白,纯化并免疫小鼠,制备针对ASFV p17蛋白的特异性多克隆抗体。根据GenBank中公布的ASFV SY18毒株p17蛋白编码基因序列,设计特异性引物扩增p17基因片段,构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-p17-strep。将其瞬时转染293i细胞,并利用下游strep标签进行蛋白纯化。纯化后的重组p17蛋白配合MnJ(β)胶体锰佐剂免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。利用Western blot、间接免疫荧光试验鉴定该多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示:本试验成功构建pCDNA3.1-p17-strep真核表达质粒,转染293i细胞后纯化获得重组p17蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体与真核表达的p17蛋白及表达ASFV p17蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒均有良好的特异性免疫反应。本试验为深入探讨ASFV p17蛋白的生物学功能奠定了基础。

正常范围的N末端B型利钠肽原对心功能不全患者预后的影响

目的:探讨心功能不全患者中N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)正常的人群的临床特征,并观察其临床预后。方法:连续纳入2019年1月至2021年10月郑州大学第一附属医院收治的心功能不全患者,根据其住院期间多次测得NT-proBNP结果均低于年龄及肾功能分层切点,筛选出NT-proBNP正常组,并随机挑选同期1个月内收治的NT-proBNP升高的心力衰竭患者作为对照,分析NT-proBNP正常组与NT-proBNP升高组的临床特征,并比较两组患者出院6个月内再住院率。结果:本研究共纳入198例心功能不全患者,其中NT-proBNP正常组患者86例(43.4%),NT-proBNP升高组患者112例(56.6%)。与NT-proBNP升高组相比,NT-proBNP正常组患者体重指数(BMI)较高,血红蛋白、血钠、估算肾小球滤过率(eGFR)值高,左心室射血分数(LVEF)高,合并高脂血症的比例高,服用钙拮抗剂的比例高;而左心室舒张末期内径、左心房内径值小,合并心房颤动、肾功能不全、心脏瓣膜病的比例低,服用利尿剂、盐皮质激素受体拮抗剂(MRA)的比例低(P均<0.05)。在校正了BMI、高血压、利尿剂及MRA服用情况后,eGFR、LVEF、心房颤动、心脏瓣膜病仍是影响NT-proBNP升高的独立相关因素(P均<0.05)。NT-proBNP正常组的心功能不全患者,住院天数比NT-proBNP升高组短,出院6个月内心力衰竭再住院率比NT-proBNP升高组低(P均<0.001)。结论:eGFR、LVEF、心房颤动、心脏瓣膜病是影响NT-proBNP升高的独立相关因素。与NT-proBNP升高的心力衰竭患者相比,NT-proBNP正常的心功能不全患者再住院的风险低,预后较好。

适应火箭高密度发射的小型发射台快速检修技术研究

小型固定式发射台作为重要的地面设备,在每次火箭发射后需开展不同程度的检修维护工作。在火箭高密度发射的新形势下,传统的检修方式由于周期长已无法满足火箭系统对其保障性的要求。为此,通过改进设计、优化流程等方式,极大地缩短发射台检修时间。在不降低设备可靠性前提下,提高发射台的保障性和维修性,发射台快速检修技术已投入使用,经历了多次发射任务的检验,可以满足高密度发射需求。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究

利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3'非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒转录调控序列顺式作用元件的鉴定及其在基因转录表达中的机制解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的转录调控序列(TRS)在sg mRNA的合成中起着至关重要的作用。为了深入了解TRS在病毒亚基因组转录和翻译过程中的作用,本研究通过对高致病性PRRSV细胞传代致弱株HuN4-F112的转录调控序列进行鉴定,并构建了一系列针对TRS6突变以及将TRS6替换为其他Body TRS的全长感染性克隆。结果表明,同时突变TRS6核心寡核苷酸3'端两个碱基或同时缺失5'端和3'端侧翼序列的全长突变体克隆均不能拯救出病毒,而单独缺失TRS65'端或3'端侧翼序列的全长突变体克隆可以拯救出病毒,但侧翼序列缺失后拯救出的病毒相较于原始亲本病毒的滴度有所下降;将HuN4-F112-EGFP的TRS6替换为TRS2、3、7均可以拯救出病毒,并有相似的生长特性,但含有TRS2的重组病毒滴度相对较低,而将TRS6替换为TRS4或TRS5后,无法拯救出病毒。本研究鉴定了HuN4-F112的一系列Body TRS在基因组中的相对位置,同时也证明了ORF1b和ORF2a基因区中4种不同的Body TRS都可以引导基因稳定高效的表达,该研究为今后以PRRSV疫苗株为活病毒载体进行多价重组疫苗的研发奠定了基础。

猪源盖塔病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征,设计特异性引物和探针,条件优化后建立检测GETV感染的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10^(2)~1×10^(7)copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为1.61;该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID50/mL,远远低于普通PCR的检测限3.16×10^(3)TCID50/mL;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV,为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。

猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用

实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12)。应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测。Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用。本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持。

超临界CFB锅炉深度调峰跨临界过程中水冷壁动态特性的试验研究

为了保证超临界循环流化床(CFB)锅炉具有良好的宽负荷运行特性及深度调峰的能力,对跨临界压力变化时工质与水冷壁间的动态特性进行试验研究。采用Φ25.0 mm×3.5 mm的垂直上升光管,在压力20.0~23.0 MPa,质量流速400~800 kg/(m^(2)·s)试验工况范围内开展了近临界稳态传热试验和跨临界压力阶跃动态特性试验。结果表明:近临界压力下,增大质量流速、减小内壁热负荷、降低压力都能使传热恶化发生时的干度减小,对应的流体焓值增大,使传热恶化推迟发生;跨临界压力阶跃变化时,受热管内流体可能发生传热恶化导致壁温飞升,但随着质量流速的增大温度又回落到正常值;壁温飞升点与内壁面的传热随时间依次经历传热恶化阶段,过冷沸腾传热强化阶段和单液相换热阶段;各参数对跨临界压力阶跃变化时传热恶化的影响与对近临界稳态试验的传热恶化的影响相同,质量流速减小和内壁热负荷增大会使传热恶化发生的位置提前,同时壁温飞升的数值更大。