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小菜蛾保幼激素受体基因PxMet-1和PxMet-2的分子特性、表达模式与功能分析 被引量:2
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作者 彭露 杨一帆 +2 位作者 邹明民 王清 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期787-798,共12页
【目的】本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella保幼激素受体基因Met的分子特性与表达模式,分析其生殖调控作用,为筛选有效控制小菜蛾的新靶标奠定基础。【方法】根据本课题组已有的小菜蛾基因组数据库,采用PCR技术克隆小菜蛾两个Me... 【目的】本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella保幼激素受体基因Met的分子特性与表达模式,分析其生殖调控作用,为筛选有效控制小菜蛾的新靶标奠定基础。【方法】根据本课题组已有的小菜蛾基因组数据库,采用PCR技术克隆小菜蛾两个Met基因的cDNA全长序列;利用qPCR测定其在小菜蛾不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式;基于RNAi解析其在小菜蛾雌成虫生殖发育中的作用。【结果】克隆获得小菜蛾PxMet-1(GenBank登录号:MK697672)与PxMet-2(GenBank登录号:MK697673)的cDNA序列,开放阅读框(ORF)全长分别为1 575和2 100 bp,预计分别编码524和699个氨基酸,理论分子质量分别为60.5和70.7 kD,预测等电点分别为6.73和5.50。PxMet-1和PxMet-2都具有4个保守结构域,即1个helix-loop-helix结构域(bHLH)、2个PAS保守结构域及1个PAC保守基序。系统发育树分析表明,小菜蛾PxMet-1和PxMet-2聚为不同的两支,但两者均与鳞翅目昆虫Met聚在一起。表达模式分析表明,小菜蛾PxMet-1与PxMet-2在蛹期(化蛹后1-3 d)与雌成虫期(羽化后0-72 h)均有表达;PxMet-1的表达量在蛹期(化蛹后1-3 d)无明显差异,但均显著高于雌成虫期(羽化后0-48 h),在羽化后72 h达到高峰;而PxMet-2在雌成虫期(羽化后0-48 h)的表达量呈先上升后下降的趋势,在羽化后12 h出现表达高峰,且成虫期(羽化后0-36 h)的表达量显著高于蛹期。PxMet-1与PxMet-2在成虫脂肪体中的表达量显著高于其他组织。注射PxMet-1+PxMet-2 dsRNA 24 h后,小菜蛾PxMet-1与PxMet-2的表达量均受到显著抑制;同时干扰PxMet-1和PxMet-2后,小菜蛾成熟卵子数目显著减少,羽化后3 d内单雌产卵量显著下降。【结论】抑制Met基因表达能够显著降低小菜蛾雌虫的卵子形成与产卵量。本研究为探索保幼激素的生殖调控机理奠定了基础,在实践上有助于筛选小菜蛾种群遗传调控的潜在靶标。 展开更多
关键词 小菜蛾 保幼激素受体 Met 分子特性 表达模式 生殖调控 害虫控制
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小菜蛾保幼激素受体PxMet-1和PxMet-2的原核表达、纯化及与保幼激素的结合模式 被引量:1
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作者 彭露 秦玉冬 +3 位作者 邹明民 董诗杰 刘莉莉 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1295-1304,共10页
【目的】昆虫烯虫酯耐性(methoprene-tolerant,Met)蛋白属于bHLH/PAS转录因子家族成员,其与该家族其他成员形成的复合物可介导保幼激素(JH)的信号传导。本研究旨在克隆并表达小菜蛾Plutella xylostella JH受体Met蛋白基因PxMet-1和PxMet... 【目的】昆虫烯虫酯耐性(methoprene-tolerant,Met)蛋白属于bHLH/PAS转录因子家族成员,其与该家族其他成员形成的复合物可介导保幼激素(JH)的信号传导。本研究旨在克隆并表达小菜蛾Plutella xylostella JH受体Met蛋白基因PxMet-1和PxMet-2,纯化其蛋白,分析PxMet-1与PxMet-2与JH的结合模式,为进一步探明PxMet蛋白的功能提供依据。【方法】基于NCBI数据库,克隆验证了小菜蛾PxMet-1和PxMet-2基因的cDNA序列;把这两个基因分别与pGEX-KG载体连接构建表达载体pGEX-KG-PxMet-1和pGEX-KG-PxMet-2,导入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)使其表达;分别使用HisTrap TM HP与GSTTrap TM HP的5 mL柱对PxMet-1和PxMet-2融合蛋白进行纯化;利用分子对接预测软件分析PxMet-1和PxMet-2蛋白与JH的结合模式。【结果】克隆获得的小菜蛾PxMet-1(GenBank登录号:MK697672)和PxMet-2(GenBank登录号:MT996234)序列与已报道的序列基本一致,仅PxMet-2基因序列存在1个非同义突变,突变位点为第41位氨基酸,由甘氨酸(Gly)突变为丙氨酸(Ala)。PxMet-1与PxMet-2蛋白三维结构相似,均包含典型的螺旋-环-螺旋结构。体外原核表达获得具有His和GST双标签的可溶性PxMet融合蛋白,PxMet-1融合蛋白的最优表达条件为0.3 mmol/L的IPTG在16℃下诱导16 h,PxMet-2融合蛋白的为0.1 mmol/L的IPTG在16℃下诱导16 h。PxMet-1和PxMet-2分别经150 mmol/L咪唑和20 mmol/L还原型谷胱甘肽洗脱获得高纯度的融合蛋白。SDS-PAGE和Western blot验证PxMet-1和PxMet-2融合蛋白,分别在89.2和106 kD位置获得条带,与推测大小一致。分子对接分析结果显示,PxMet-1和PxMet-2与JH存在相互作用位点,都是在PAS-B保守结构域,和赤拟谷盗Tribolium castaneum Met的JH结合位点相同。【结论】利用pGEX-KG原核表达系统能有效地在体外表达可溶性的PxMet-1和PxMet-2蛋白,PxMet-1和PxMet-2蛋白很可能是小菜蛾JH的分子受体。本研究为进一步解析PxMet蛋白的功能,深入阐明JH调控小菜蛾发育与生殖的分子机理奠定了基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 保幼激素 烯虫酯耐性蛋白 原核表达 分子对接 生殖发育
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多次交配对小菜蛾精包形成与生殖力的影响 被引量:3
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作者 邹明民 刘莉莉 +4 位作者 董诗杰 黄梦琪 曹敏慧 尤民生 彭露 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1678-1686,共9页
【目的】小菜蛾Plutella xylostella是主要为害十字花科作物的一种世界性害虫,强大的生殖能力是其成为田间最难防治的害虫的主要原因之一。交配是营两性生殖昆虫繁衍后代必要的一个生理过程,明确小菜蛾雌雄成虫的交配行为及交配后的生... 【目的】小菜蛾Plutella xylostella是主要为害十字花科作物的一种世界性害虫,强大的生殖能力是其成为田间最难防治的害虫的主要原因之一。交配是营两性生殖昆虫繁衍后代必要的一个生理过程,明确小菜蛾雌雄成虫的交配行为及交配后的生理响应,对于小菜蛾种群监测和综合防治具有重要意义。【方法】解剖观察小菜蛾成虫生殖腺及精包形成;利用行为学与生物学实验,测定和分析小菜蛾成虫交配与再交配能力、精包形成与消化,以及交配次数对精包形成以及雌虫生殖力的影响。【结果】小菜蛾雄成虫在交配过程中精液以精包的形式传递给雌成虫,在交配囊中精包呈白色、不透明、气球状结构,交配结束后精包可被充分消化和吸收。成虫交配能力观测结果显示,小菜蛾雌雄成虫均具有多次交配行为。首次交配后,雄成虫表现出短暂的再交配延迟,20 min内其交配成功率为54.6%,显著低于首次交配。虽然交配次数不会影响雄成虫的交配时长,但雄成虫交配史对其自身的精包大小以及雌成虫的生殖力均具有显著的抑制作用。雌成虫表现出明显的再交配抑制性,交配过的雌成虫在12 h内的交配率显著低于未交配雌成虫的,这可能取决于首次交配后精包的消化和吸收速率。雌成虫多次交配后,其产卵量和卵孵化率与单次交配的相比没有显著差异。【结论】多次交配会使小菜蛾雄成虫再交配延迟,雌成虫再交配受到抑制;多次交配产生的雄成虫精包显著减小,雌成虫产卵量与卵孵化率并没有从多次交配中获得收益。本研究为解析小菜蛾雌雄成虫生殖调控机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 交配行为 精包 生殖力 生理响应
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Identification of chorion genes and RNA interference-mediated functional characterization of chorion-1 in Plutella xylostella
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作者 DONG Shi-jie LIU Bo +7 位作者 zou ming-min LIU Li-li CAO Min-hui HUANG Meng-qi LIU Yan Liette VASSEUR YOU Min-sheng PENG Lu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第11期3278-3292,共15页
Choriogenesis is the last step of insect oogenesis,a process by which the chorion polypeptides are produced by the follicular cells and deposited on the surface of oocytes in order to provide a highly specialized prot... Choriogenesis is the last step of insect oogenesis,a process by which the chorion polypeptides are produced by the follicular cells and deposited on the surface of oocytes in order to provide a highly specialized protective barrier to the embryo.The essential features of chorion genes have yet to be clearly understood in the diamondback moth,Plutella xylostella,a worldwide Lepidoptera pest attacking cruciferous crops and wild plants.In this study,complete sequences for 15 putative chorion genes were identified,and grouped into A and B classes.Phylogenetic analysis revealed that both classes were highly conserved and within each,branches are also species-specific.Chorion genes from each class were located in pairs on scaffolds of the P.xylostella genome,some of which shared the common promoter regulatory region.All chorion genes were highly specifically expressed in the P.xylostella adult females,mostly in the ovary with full yolk,which is a crucial period to build the shells of the eggs.RNAi-based knockdown of chorion-1,which is located on the Px_scaffold 6 alone,although had no effect on yolk deposition,resulted in smaller eggs and sharply reduced hatchability.Additionally,inhibition of PxCho-1 expression caused a less dense arrangement of the columnar layers,reduced exochorion roughness and shorter microvilli.Our study provides the foundation for exploring molecular mechanisms of female reproduction in P.xylostella,and for making use of chorion genes as the potential genetic-based molecular target to better control this economically important pest. 展开更多
关键词 Plutella xylostella chorion genes RNAI OOGENESIS pest control
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