基于风水水肿大鼠模型的麻黄拆分组分的升降浮沉药性研究

目的基于风水水肿大鼠模型探讨麻黄拆分组分(生物碱、非生物碱、多糖)的升降浮沉药性物质基础。方法将70只SD大鼠随机分为正常组、模型组、生物碱组(51.48 mg·kg^(-1))、非生物碱组(215.28 mg·kg^(-1))、多糖组(276.12 mg·kg^(-1))、麻黄组(麻黄水煎液4670 mg·kg^(-1))及通宣理肺丸组(阳性药组,4326 mg·kg^(-1))。采用尾静脉注射阿霉素结合吹风刺激的方式建立风水水肿大鼠模型,以大鼠出现四肢浮肿、恶风、弓背、毛松、喷嚏、流涕、小便减少等症状为造模成功。采用灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续给药21 d。通过氨水诱咳实验观察大鼠咳嗽状况;测定大鼠汗腺分泌功能、自主活动次数、睡眠时间;通过旷场实验评估大鼠自主活动情况;采用小动物超声心动仪检测大鼠的心功能指标:心率(HR)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(LVFS);检测大鼠胃残留率、小肠推进率;测定心、肝、脾、肺、肾各脏器系数;生化指标检测:尿液中的尿蛋白(UP)、尿微量白蛋白(MAU)水平,支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白E(IgE)水平,血清中的肌酐(CER)、尿素氮(BUN)、一氧化氮(NO)水平,血浆中胃动素(MTL)、胃泌素(GT)、生长抑素(SST)水平;采用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡及其活性氧(ROS)水平;HE染色法观察相关组织病理变化。结果(1)呼吸系统实验结果:与模型组比较,各给药组大鼠的咳嗽潜伏期显著延长(P<0.01),咳嗽次数显著减少(P<0.05,P<0.01),其中生物碱和多糖组分的效果接近麻黄;肺泡壁肿胀减轻,肺泡内炎症细胞浸润及上皮细胞脱落现象有所缓解,病理评分显著降低(P<0.05,P<0.01),其中生物碱组分改善效果最为显著;BALF中的IL-4、IgE水平显著降低(P<0.05,P<0.01),IFN-γ的水平显著升高(P<0.05,P<0.01),其中生物碱组分的改善效果最接近麻黄;肺组织细胞的凋亡率及ROS水平显著降低(P<0.01),作用效果为生物碱组分>多糖组分>非生物碱组分。(2)泌尿系统实验结果:与模型组比较,麻黄组、生物碱组、多糖组及通宣理肺丸组大鼠的足趾汗腺着色点数显著增多(P<0.05,P<0.01),麻黄组、生物碱组及通宣理肺丸组大鼠的排尿量显著增加(P<0.01);各给药组大鼠的血清CRE水平无明显变化(P>0.05),尿液中UP水平显著降低(P<0.05,P<0.01),麻黄组、生物碱组、多糖组及通宣理肺丸组大鼠的血清BUN水平及尿液MAU水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。(3)中枢系统实验结果:与模型组比较,各给药组大鼠的自主活动次数显著增加(P<0.01),麻黄组、生物碱组及通宣理肺丸组大鼠的睡眠时间显著缩短(P<0.05,P<0.01);麻黄组、生物碱组、多糖组及通宣理肺丸组大鼠的活动总距离显著延长(P<0.05,P<0.01)。生物碱组分的改善效果最为明显且接近麻黄,提示麻黄生物碱组分的药性偏升浮。(4)消化系统实验结果:与模型组比较,麻黄多糖组大鼠的胃残留率显著降低(P<0.01),小肠推进率及血浆GT水平显著升高(P<0.01);非生物碱组大鼠的血浆SST水平明显升高(P<0.05)。结果提示,麻黄多糖组分的药性偏沉降。(5)循环系统实验结果:与模型组比较,给药组大鼠的血清NO水平明显升高(P<0.05,P<0.01),生物碱组大鼠的心脏LVFS明显升高(P<0.05)。结论麻黄生物碱组分表现出升提趋上、轻浮宣散之势,药性偏“升浮”,多糖组分表现出趋下之势,药性偏“沉降”,可能是麻黄发挥“宣发肺气、发汗解表、利水消肿”功效的物质基础。

基于正常大鼠物质能量代谢的栀子不同炮制品寒热药性研究

目的通过检测栀子不同炮制品对正常大鼠物质代谢与能量代谢水平的影响,以期阐明炒制引起栀子寒热药性变化的科学内涵。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、生栀子组、炒栀子组及焦栀子组。对照组大鼠灌胃蒸馏水(1 mL·100 g^(-1)),生栀子组、炒栀子组及焦栀子组大鼠分别灌胃给予等体积的相应炮制品水提取物,连续给药9天。记录各组大鼠给药期间体质量、肛温变化。酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠肝脏组织中物质能量代谢相关指标GCK、PFK、PK、Acetyl-CoA、PDH、CS、ICD、α-KGDHC、PYGL、GSK-3、ATGL、CCR、COX、ATPs、ADK、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、ATP、ADP、NAD及NADH的含量。免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测AMPK/mTOR信号通路关键蛋白的表达。结果与对照组相比,生栀子极显著性降低大鼠体质量、肛温、PK、PDH、Acetyl-CoA、CS、ICD、PYGL、GSK-3、ATGL、CCR、ATPs、ADK、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、ATP、NAD^(+)、NADH、AMPK(P<0.01),显著性降低大鼠GCK、PFK、α-KGDHC、COX、ADP水平(P<0.05),极显著升高大鼠mTOR水平(P<0.01);炒栀子极显著性降低大鼠体质量、肛温、PK、PDH、Acetyl-CoA、CS、ICD、PYGL、ATGL、ATPs、ADK、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、ATP、NAD^(+)、NADH水平(P<0.01),显著性降低大鼠PFK、α-KGDHC、GSK-3、COX、ADP及AMPK水平(P<0.05),极显著升高大鼠mTOR水平(P<0.01);焦栀子极显著性降低大鼠肛温、PK、Acetyl-CoA、CS、ICD、PYGL、ATGL、ATPs、ADK、NAD^(+)水平(P<0.01),显著降低大鼠体质量、PDH、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、ATP及NADH(P<0.05),极显著升高大鼠mTOR水平(P<0.01)。与生栀子组相比,炒栀子极显著性升高大鼠PK、PDH、Acetyl-CoA、ICD、ADK及NADH水平(P<0.01),显著性升高大鼠PDH水平(P<0.05);焦栀子极显著性升高大鼠PK、PDH、Acetyl-CoA、CS、ICD、ADK、Na^(+)-K^(+)-ATP酶、NAD^(+)及NADH水平(P<0.01),显著性升高大鼠GSK-3、ATPs及AMPK水平(P<0.05)。与炒栀子组相比,焦栀子可极显著性升高大鼠Na^(+)-K^(+)-ATP酶及NADH水平(P<0.01)。结论生栀子组、炒栀子组及焦栀子组均能显著降低正常大鼠物质能量代谢水平,说明三者均属于寒性,这与《中国药典》记载的生栀子、炒栀子、焦栀子均属寒性一致。就大鼠物质能量代谢而言,焦栀子组高于炒栀子组,炒栀子组高于生栀子组,说明焦栀子寒性弱于炒栀子,炒栀子寒性弱于生栀子。

山茶油干预的阿尔茨海默病小鼠尿液代谢组学分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flightmassspectrometry,UPLC-Q/TOF-MS)技术,利用代谢组学方法探讨山茶油干预的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠尿液的代谢组学变化。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药组、山茶油组,除对照组外其余各组小鼠均由β-淀粉样蛋白25-35肽诱导AD,并取尿液样本。尿液沉淀蛋白后进行UPLC-Q/TOF-MS分析,获得小鼠尿液代谢物数据,使用SIMCA-P14.1软件进行主成分分析(principalcomponent analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析,使用HMBD、MassBank、MetaboAnalyst、京都基因与基因组百科全书在线数据库对生物标志物进行鉴定、通路富集分析和代谢网络的构建。结果:在PCA得分图中,山茶油组样本点远离模型组样本点区域,更接近正常对照组样本点区域。鉴定得到48个生物标志物,主要涉及的通路有牛磺酸和次牛磺酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等。结论:山茶油通过调节能量代谢、氨基酸代谢等改善了AD小鼠体内代谢,为山茶油干预AD的进一步研究提供参考。

基于风寒表证模型大鼠探究麻黄升浮药性对通宣理肺方药效发挥的影响

目的通过考察通宣理肺方及通宣理肺方减麻黄对风寒表证模型大鼠呼吸系统、中枢系统、泌尿系统、循环系统及消化系统的作用,探讨麻黄升浮药性对通宣理肺方功效发挥的影响,为临床遣方用药提供理论依据。方法将60只SD大鼠按照体重均衡原则随机分为正常组(CON)、模型组(M)、对乙酰氨基酚组(Y,0.455 g·kg^(-1))、麻黄组(MH,2.340 g·kg^(-1))、通宣理肺方组(TX,4.326 g·kg^(-1))和通宣理肺方减麻黄组(TX-MH,3.920 g·kg^(-1)),每组10只。除CON组外,其余组均用风扇吹风加寒冷刺激进行造模。造模后,大鼠出现蜷卧或团缩聚卧状态、自发活动减少、弓背耸毛、打喷嚏,体温升高为模型成功。造模成功后分别给予相应的药物(10 mL·kg^(-1)),CON组和M组大鼠均给予等体积的蒸馏水,连续给药4天。观察大鼠的基本状态,并通过氨水诱咳、酚红排泌和肺泡灌洗液炎症因子(IgE、IL-4、IFN-γ)水平,结合肺部组织病理切片及氧化应激(MDA、SOD及GSH-Px)水平的变化考察对呼吸系统的影响;通过旷场实验、大鼠睡眠时间和血清中炎症因子(IgE、IFN-γ、IL-4)指标的变化考察对中枢系统的影响;通过胃肠运动及血浆中胃动素(MTL)、生长抑素(SST)、胃泌素(GT)变化考察对消化系统的影响;通过大鼠足趾汗液分泌、大鼠尿量及血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)的变化考察对泌尿系统的影响;通过大鼠心功能和血清NO变化考察对循环系统的影响。结果通宣理肺方能够增加风寒表证大鼠体质量,降低体温;能够兴奋中枢系统,改善呼吸系统,增强泌尿-发汗系统,对循环系统、消化系统作用不明显;通宣理肺方去除麻黄后对呼吸系统和中枢系统作用明显减弱,对循环系统、消化系统基本无影响。总体而言,通宣理肺方效果优于通宣理肺方减麻黄,提示升浮药麻黄的去除使通宣理肺方“发表散寒”“宣肺止咳”的功效减弱。结论麻黄的升浮药性对通宣理肺方“发表散寒”和“宣肺止咳”药效的发挥具有重要作用。

麻黄水煎液及拆分组分对大鼠利尿作用的实验研究

目的：研究麻黄水煎液及拆分组分的利尿作用,并初步探讨其作用机制。方法：将水负荷大鼠分为空白对照组,氢氯噻嗪组（0.017 g·kg-1）,麻黄水煎液组（2.34 g·kg-1）,生物碱组（0.020 g·kg-1）,非生物碱组（0.105 g·kg-1）,醇沉组（0.132 g·kg-1）,挥发油组（0.9333×10-3m L·kg-1）,各组给予相应药物,空白对照组给予同体积生理盐水。采用大鼠代谢笼法,观察麻黄水煎液及拆分组分对大鼠尿量的影响;微板法检测尿氯（Cl-）、尿钾（K＋）水平;比浊法检测尿钠（Na＋）水平;离子选择电极法检测尿渗透压;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆抗利尿激素（ADH）,肾脏水通道蛋白2（AQP2）水平;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测肾脏水通道蛋白2（AQP2）水平。结果：与空白对照组相比,麻黄水煎液和生物碱组分能显著增加大鼠尿量和尿液电解质排泄,降低尿渗透压,ADH,AQP2水平（P〈0.01或P〈0.05）。结论：麻黄具有显著的利尿作用,其利尿作用的组分主要为生物碱,且发挥利尿作用的机制可能与降低ADH的水平和AQP2的表达有关。

网络药理学辅助探究牛膝及其不同炮制品对肾病综合征大鼠的保护作用

目的探究牛膝、盐牛膝及酒牛膝对肾病综合征模型大鼠的影响及潜在机制。方法60只雄性SD大鼠,除正常组(6只)外,其余大鼠尾静脉注射阿霉素(4 mg·kg^(-1)),并于7 d后再次尾静脉注射阿霉素(3.5 mg·kg^(-1)),正常组2次均尾静脉注射等剂量生理盐水。第2次尾静脉注射阿霉素7 d后检测反映模型是否复制成功的相关指标,即血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。将模型复制成功的30只大鼠随机分成5组:模型组、阳性药醋酸泼尼松组(12.5 mg·kg^(-1))、牛膝组(4 g·kg^(-1))、盐牛膝组(4 g·kg^(-1))和酒牛膝组(4 g·kg^(-1)),每组6只,按照上述剂量每天灌胃给药1次,模型组给予等量水,持续2周。HE染色观察大鼠肾脏病理变化;比色法检测血清中Cr、BUN及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物歧化酶(GSH-Px)水平;ELISA法检测血清及肾组织中白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)水平。网络药理学预测牛膝治疗肾病综合征的潜在机制并进行实验验证。Western Blotting法检测肾组织中NF-κB p-p65、NF-κB p65、p-smad3、smad3蛋白表达水平。结果实验结果显示,模型组血清中Cr、BUN水平与正常组比较明显降低(P<0.01,P<0.05),模型复制成功。牛膝及其炮制品均能不同程度地改善肾组织病理损伤,降低血清中Cr、BUN、MDA水平,升高GSH-Px、SOD水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001);降低血清和肾组织中IL-6、IL-18、TNF-α、IFN-γ水平,升高IL-2水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。网络药理学发现牛膝治疗肾病综合征可能主要通过TNF、转录因子AP(JUN)、IL-6等9个靶基因以及NF-κB、造血细胞调控、TGF-β信号通路等多条通路发挥作用。验证实验表明,与模型组比较,牛膝及其炮制品均能降低肾组织中NF-κB p-p65/NF-κB p65、p-smad3/smad3蛋白比值(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论牛膝及其2种炮制品对阿霉素肾病综合征模型大鼠均有不同程度的保护作用,且盐牛膝和酒牛膝作用优于牛膝,可能通过TNF及IL-6等靶点、NF-κB及TGF-β等信号通路对肾病综合征发挥作用。

β-谷甾醇对OVA诱导的过敏性哮喘大鼠模型中Th17/Treg免疫失衡的调节

目的:探讨β-谷甾醇对卵白蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘大鼠的干预作用及潜在作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组(CON)、模型组(M)、阳性药地塞米松组(DEX,0.075 mg/kg)、β-谷甾醇组(Sit,50 mg/kg),采用腹腔注射OVA氢氧化铝溶液致敏,雾化吸入OVA激发建立过敏性哮喘大鼠模型。雾化激发前30 min灌胃给药,连续给药7 d后,检测大鼠咳喘指标、气管酚红排泌量;HE染色观察肺组织病理变化;流式细胞术检测大鼠原代肺细胞活性氧(ROS)、凋亡水平及外周血中Th17和Treg细胞比例;生化法检测大鼠肺组织中MDA含量及T-SOD、GSH-Px活力;ELISA检测Th17、Treg相关细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-35)水平。结果:与模型组相比,β-谷甾醇明显延长了过敏性哮喘大鼠的咳嗽及引喘潜伏期,减少了咳嗽及喘息次数,促进了气管酚红排泌;显著减轻了哮喘大鼠肺组织炎症浸润;显著降低了哮喘大鼠肺组织MDA含量、原代肺细胞ROS和凋亡水平,提高了T-SOD及GSH-Px活力;显著降低了Th17细胞比例及促炎细胞因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A水平,提高了Treg细胞比例及抑炎细胞因子IL-35水平。结论:β-谷甾醇能够改善OVA诱导的过敏性哮喘大鼠气道炎症和氧化损伤,其作用机制可能与β-谷甾醇对Th17/Treg免疫失衡及氧化应激反应的调节有关。

虎杖苷对角叉菜胶致肺水肿大鼠的干预作用研究

目的探讨虎杖苷对角叉菜胶致肺水肿大鼠的干预作用及相关机制。方法将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.075 mg·kg^(-1))及虎杖苷低、高剂量组(20、40 mg·kg^(-1)),每组10只;灌胃给药,每日1次,连续7 d。给药结束后,通过胸腔注射1%角叉菜胶(20 mg·kg^(-1))溶液致炎48 h,建立肺水肿大鼠模型。通过计算肺组织湿/干质量比、肺组织含水量评价肺组织水肿情况;采用HE染色法观察肺组织病理变化;流式细胞术检测肺组织原代细胞凋亡、活性氧(ROS)水平,以及肺组织中巨噬细胞、中性粒细胞水平;检测肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平,以及肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)水平;RT-qPCR法检测肺组织中水通道蛋白1(AQP1)、AQP5、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-13 mRNA表达;免疫组化法测定肺组织中AQP1蛋白表达,并对虎杖苷与AQP1进行分子对接验证;Western Blot法检测肺组织中AQP1、AQP5、IL-1β、IL-10蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠的肺组织湿/干质量比及含水量明显升高(P<0.05,P<0.01);肺泡结构破坏及炎症浸润明显;肺组织原代细胞中的活细胞比例显著降低(P<0.01),死细胞、凋亡细胞比例显著升高(P<0.01);肺组织原代细胞ROS水平及肺组织MDA水平显著升高(P<0.01),T-SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.01);肺组织中巨噬细胞、中性粒细胞水平显著升高(P<0.01);肺泡灌洗液中IgE、IL-4水平显著升高(P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);肺组织AQP1、AQP5、IL-10 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-13 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);肺组织中AQP1、AQP5、IL-10蛋白表达量显著降低(P<0.01),IL-1β蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,虎杖苷高、低剂量组大鼠的肺组织湿/干质量比及含水量明显降低(P<0.05,P<0.01);肺组织的病理变化均得到明显改善;虎杖苷高剂量组大鼠肺组织原代细胞中的活细胞比例显著升高(P<0.01),死细胞比例显著降低(P<0.01),虎杖苷高、低剂量组的凋亡细胞比例显著降低(P<0.05,P<0.01);虎杖苷高、低剂量组大鼠肺组织原代细胞ROS水平及肺组织MDA水平显著降低(P<0.05,P<0.01),T-SOD、GSH-Px水平显著升高(P<0.05,P<0.01);肺组织中巨噬细胞、中性粒细胞水平显著降低(P<0.01);肺泡灌洗液中IgE、IL-4水平显著降低(P<0.05,P<0.01),IFN-γ水平显著提高(P<0.05,P<0.01);肺组织AQP1、AQP5、IL-10 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-13 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);肺组织中AQP1、AQP5、IL-10蛋白表达量显著升高(P<0.01),IL-1β蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论虎杖苷与AQP1靶点具有较强的结合活性,其对角叉菜胶诱导的肺水肿大鼠具有明显改善作用,可能与其通过调节体内炎症反应、氧化应激与细胞凋亡水平,以及上调AQP1、AQP5表达有关。

进口核电设备采购中的商务谈判策略

从介绍商务谈判的定义入手,剖析核电设备采购活动中所涉及到国际商务谈判的特点,进而研究如何在核电设备采购商务谈判之前做好充分准备工作,以及如何在谈判的三个阶段:申明价值、创造价值、克服障碍中制定正确有效的谈判策略。

姜状三七皂苷R1对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤的保护作用研究

目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;小动物活体成像观察2-DG和PEG在小鼠体内的荧光强度;流式细胞术检测肝细胞的活性氧和凋亡水平。结果:与模型组比较,各剂量姜状三七皂苷R1可改善急性肝损伤小鼠肝脏病理损伤;降低小鼠血清ALT、AST水平和小鼠体内2-DG和PEG的荧光强度(P<0.01);降低肝细胞活性氧水平、血清MDA含量和小鼠肝脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的水平(P<0.01,P<0.05);提高SOD和GSH-Px水平(P<0.05,P<0.01)。结论:姜状三七皂苷R1介导氧化应激和炎症来发挥抗急性肝损伤的作用。

基于非靶向代谢组学研究腺苷对阿尔兹海默症的干预作用

目的:基于代谢组学方法研究腺苷对Aβ25-35多肽诱导的阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠体内代谢紊乱的干预作用。方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组、腺苷组。脑室内注射Aβ25-35多肽模拟AD的生理病理状态,末次给药结束,禁食12 h后收集各组小鼠的尿液样本。处理后的尿液样本进行超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS)分析,得到质谱原始数据,经预处理后导入SIMCA-P软件,进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选潜在差异代谢物,并利用HMDB、MassBank等在线数据库进一步鉴定生物标志物。通过Mev软件对生物标志物在各组中的相对含量进行热图聚类分析。结合MBRole、KEGG和MetaboAnalyst5.0等在线数据库进行通路富集分析和代谢网络构建。结果:腺苷组小鼠代谢轮廓与模型组明显分离,并向正常组回调。腺苷组与模型组间共筛选出59个差异标志物(正源模式下38个、负源模式下21个),通路富集分析后得到烟酸盐和烟酰胺代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、精氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等显著受干扰的代谢通路。结论:腺苷可能通过氨基酸代谢和维生素代谢来修复AD小鼠的神经损伤,为临床上腺苷治疗AD的应用提供了理论依据。

牛膝及其炮制品对肝衰竭大鼠的作用差异研究

目的:比较牛膝不同炮制品对肝衰竭大鼠的作用差异,初步探讨牛膝炮制机理。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、水飞蓟宾44 mg/kg组、牛膝组、盐牛膝组、酒牛膝组(均为4 g/kg)。灌胃给药,连续7 d,末次给药后禁食24 h,除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS 10μg/kg)和氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN 900 mg/kg),8 h后解剖。HE染色观察肝脏组织病理学变化;Elisa检测血清与肝脏组织中IL-2、IL-6、IL-18、IFN-γ、TNF-α含量;试剂盒检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;蛋白印迹法检测肝脏组织中B细胞淋巴瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、凋亡蛋白活性因子-1抗体(FAS)、FAS相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase8蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝脏组织病理损伤严重,血清中AST、ALT活性和MDA含量明显升高,SOD、GSH-Px活性明显降低,血清和肝脏组织中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-18、IFN-γ的浓度明显升高,肝脏组织BAX、Caspase-3、Caspase-9、FAS、FADD蛋白表达明显上调,BCL-2、Caspase8蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,牛膝不同炮制品组大鼠肝脏组织病理损伤有所改善,血清中AST、ALT活性和MDA含量明显降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,血清和肝脏组织中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-18、IFN-γ的浓度明显降低,肝脏组织BAX、Caspase-3、Caspase-9、FAS、FADD蛋白表达显著下调,酒牛膝4 g/kg组BCL-2、Caspase-8蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),其中以酒牛膝效果最好,优于牛膝和盐牛膝。结论:牛膝、酒牛膝、盐牛膝对肝衰竭大鼠的保护作用存在差异,酒牛膝作用强于盐牛膝,牛膝炮制后可能影响其作用趋向(部位)。

基于“顺病位逆病势”的麻黄升浮药性和葶苈子沉降药性潜在靶点研究

目的探究麻黄升浮药性和葶苈子沉降药性的潜在靶点。方法将340只大鼠采用随机数字表法分为风寒表证模型组80只、风水水肿模型组90只、痰饮停聚模型组90只、肺水模型组80只,各组大鼠按体质量均衡原则及造模需要再行分组。采用吹风加寒冷刺激构建大鼠风寒表证模型,分为正常对照组、风寒表证组、麻黄组、生物碱组、多糖组、非生物碱组和通宣理肺丸组7组,各组均连续灌胃4天;采用尾静脉注射盐酸多柔比星联合吹风刺激构建大鼠风水水肿模型,分为正常对照组、风水水肿组、麻黄组、生物碱组、多糖组、非生物碱组和通宣理肺丸组7组,各组均连续灌胃21天;采用腹腔注射卵白蛋白联合雾化激发构建大鼠痰饮停聚模型,分为正常对照组、痰饮停聚组、葶苈子组、黄酮苷组、黄酮苷元组、低聚糖组、多糖组和脂肪油组8组,各组均连续灌胃7天;通过胸腔注射角叉菜胶构建大鼠肺水模型,分为正常对照组、肺水组、葶苈子组、黄酮苷组、黄酮苷元组、低聚糖组、多糖组和脂肪油组8组,各组均连续灌胃7天。灌胃完成后检测各模型毒蕈碱乙酰胆碱受体M3(CHRM3)、毒蕈碱乙酰胆碱受体M1(CHRM1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的mRNA水平;检测风寒表证和风水水肿模型CHRM3的蛋白表达,痰饮停聚和肺水模型PPAR-γ的蛋白表达。结果与风寒表证组相比,麻黄组、通宣理肺丸组和生物碱组CHRM3的蛋白及mRNA水平,麻黄组CHRM1的mRNA水平显著升高,非生物碱组CHRM3,通宣理肺丸组和非生物碱组CHRM1及麻黄组、通宣理肺丸组、生物碱组和多糖组PPAR-γ的mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与风水水肿组相比,麻黄组、通宣理肺丸组和生物碱组CHRM3的蛋白及mRNA水平,麻黄组和通宣理肺丸组CHRM1的mRNA水平,通宣理肺丸组、生物碱组、非生物碱组和多糖组PPAR-γ的mRNA水平显著升高,麻黄组PPAR-γ的mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与痰饮停聚组相比,低聚糖组CHRM3的mRNA水平,葶苈子组、低聚糖组、黄酮苷组和脂肪油组PPAR-γ的蛋白及mRNA水平显著升高,脂肪油组和黄酮苷元组CHRM1的mRNA水平显著降低(P<0.01)。与肺水组相比,葶苈子组CHRM3的mRNA水平、多糖组PPAR-γ的mRNA水平显著降低,低聚糖组、脂肪油组和多糖组CHRM3的mRNA水平,葶苈子组、黄酮苷组、低聚糖组和脂肪油组PPAR-γ的蛋白及mRNA水平,多糖组和黄酮苷元组CHRM1的mRNA水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论药性升浮的麻黄及生物碱组分和通宣理肺丸可显著促进病位在表的风寒表证和风水水肿模型大鼠CHRM3的表达,其可能为麻黄升浮药性的潜在作用靶点之一;药性沉降的葶苈子、黄酮苷、低聚糖和脂肪油可显著促进病位在里的痰饮停聚和肺水模型大鼠PPAR-γ的表达,其可能为葶苈子沉降药性的潜在作用靶点之一。

草麻黄、中麻黄、木贼麻黄对风寒表证大鼠的干预作用比较研究

目的:比较草麻黄、中麻黄、木贼麻黄对风寒表证大鼠的干预作用,为指导临床用药提供理论依据。方法:将SD大鼠通过“风扇吹风加寒冷刺激”构建风寒表证模型,以大鼠出现蜷卧或团缩聚卧状态、自发活动减少、弓背耸毛、打喷嚏,体温升高为造模成功。造模成功大鼠,随机分为模型对照组、对乙酰氨基酚0.46 g/kg、草麻黄、中麻黄及木贼麻黄2.34 g/kg组,另设正常对照组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续5 d。观察大鼠的基本状态,分别从呼吸系统、中枢神经系统、消化系统以及循环系统评价草麻黄、中麻黄及木贼麻黄对风寒表证大鼠的影响。结果:三种麻黄可有效降低风寒表证大鼠体温,不同程度地从呼吸系统、中枢神经系统、消化系统及循环系统改善风寒表证大鼠,草麻黄效果较好,木贼麻黄和中麻黄次之。结论:草麻黄对风寒表证治疗作用效果优于中麻黄和木贼麻黄,与临床用药一致。

草麻黄、中麻黄及木贼麻黄水提物对风寒表证大鼠机体免疫作用的差异研究

本实验采用"风扇吹风加寒冷刺激"构建风寒表证模型,比较草麻黄、中麻黄及木贼麻黄水提物对风寒表证大鼠机体免疫作用的差异,为麻黄的临床用药提供理论支撑。当大鼠出现蜷卧或团缩聚卧状态、自发活动减少、弓背耸毛、打喷嚏、体温升高时即为模型成功。造模成功后,将雄性SD大鼠随机分为正常(CON)、模型(FHBZ)、对乙酰氨基酚(Y,455 mg/kg)、草麻黄(CMH,2340 mg/kg)、中麻黄(ZMH,2340 mg/kg)及木贼麻黄(MZMH,2340 mg/kg)组,连续灌胃给药5d。利用流式细胞术检测大鼠肺和脾脏细胞凋亡水平及外周血和脾脏内自然杀伤细胞(natural killer cells,NKs)、树突状细胞(dendritic cells,DCs)、髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)、辅助性T细胞(helper T cells,Ths)、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells,Tcs)以及调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的水平变化。研究结果显示,三种麻黄均能显著降低风寒表证大鼠肺和脾脏细胞的凋亡水平,调节大鼠机体内免疫细胞水平(P<0.01),且草麻黄的作用效果优于中麻黄和木贼麻黄,与临床用药一致。

杜仲补天素胶囊对雷公藤多苷所致雄性大鼠生殖障碍干预作用的实验研究

目的:研究杜仲补天素胶囊对雷公藤多苷所致雄性大鼠生殖障碍的干预作用并初步探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、模型组、生精胶囊560 mg/kg组、杜仲补天素485 mg/kg、970 mg/kg组。以雷公藤多苷(40 mg/kg)造模成功后,持续给药干预四周,雌雄合笼后,观察雌鼠受孕情况与产仔数,计算雄鼠脏器系数、测定各组性激素水平和氧化应激指标、观察睾丸组织形态变化、检测睾丸凋亡相关蛋白与雌激素受体蛋白表达的变化。结果:与正常组相比,模型组睾丸曲细精管空泡化,曲细精管内各级精细胞不同程度减少;睾丸系数、精子数量和精子活力均显著下降;受孕率与产仔数显著下降;雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡雌激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量或活力显著下降,丙二醛(MDA)的含量显著上升;睾丸组织中B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)表达显著下调,Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达显著上调;睾丸中雌激素受体α和雌激素受体β(ERα、ERβ)蛋白的表达量显著上调。给药干预后与模型组相比,杜仲补天素胶囊组剂量依赖地使睾丸中曲细精管空泡化情况改善,各级精细胞再生;睾丸系数、精子数量和精子活力显著上升;受孕率与产仔数显著上升;E2、FSH、GSH-Px、SOD的含量或活力显著上升,MDA的含量显著下降;睾丸组织中Bax蛋白表达显著下调,Bcl-2蛋白表达显著上调;睾丸中ERα、ERβ蛋白的表达量显著下调。结论:杜仲补天素胶囊对雷公藤多苷所致雄性大鼠生殖障碍有一定的改善作用,可能是通过调控ERα、ERβ来调节氧化应激与凋亡水平实现的。

典型升浮中药和沉降中药潜在作用靶点网络药理学及大鼠体内验证研究

目的探究典型升浮中药和沉降中药的潜在作用靶点。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台检索并筛选升浮中药(麻黄、柴胡、升麻、葛根、桔梗、薄荷)和沉降中药(葶苈子、旋覆花、刀豆、川牛膝、茯苓、苦杏仁、丁香)的靶点;以病位在表(风寒表证、风水水肿)、病位在里(痰饮停聚、肺水)、病势下陷(胃缓、心衰)、病势上逆(呕吐、肝阳上亢)在GeneCards数据库检索病症靶点。取升浮中药与病位在表、病势下陷病症的共有靶点,推测其可能为升浮中药的潜在作用靶点;取沉降中药与病位在里、病势上逆病症的共有靶点,推测其可能为沉降中药的潜在作用靶点。再进行动物实验验证:将140只雄性SD大鼠分为正常对照组、麻黄组(4.2 g/kg)、柴胡组(7 g/kg)、升麻组(7 g/kg)、葛根组(10.5 g/kg)、桔梗组(7 g/kg)、薄荷组(4.2 g/kg)、葶苈子组(7 g/kg)、旋覆花组(6.3 g/kg)、刀豆组(6.3 g/kg)、川牛膝组(7 g/kg)、茯苓组(10.5 g/kg)、苦杏仁组(7 g/kg)和丁香组(2.1 g/kg),每组10只,以1ml/100g灌胃体积连续灌胃相应药物14天。根据网络药理学研究结果,采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织中胰岛素生长因子2(IGF-2)、己糖激酶2(HK-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、毒蕈碱乙酰胆碱受体M3(CHRM3)、毒蕈碱乙酰胆碱受体M1(CHRM1)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)的mRNA水平;采用Western Blot法和免疫组化法检测CHRM3、CHRM1和PPAR-γ蛋白水平。结果网络药理学结果显示,升浮中药潜在作用靶点为IGF-2和HK-2,沉降中药潜在作用靶点有PPAR-γ、CHRM3、CHRM1和GSK-3β。mRNA及蛋白检测结果显示,与正常对照组比较,麻黄组、柴胡组、升麻组、葛根组、桔梗组、丁香组和刀豆组CHRM3水平均显著降低,苦杏仁组CHRM3水平显著升高(P<0.05或P<0.01);葛根组和桔梗组CHRM1水平显著降低,薄荷组、葶苈子组、旋覆花组、川牛膝组、茯苓组、丁香组、苦杏仁组和刀豆组CHRM1水平显著升高(P<0.05或P<0.01);麻黄组、升麻组、葛根组和桔梗组PPAR-γ水平显著降低,旋覆花组、川牛膝组、茯苓组、苦杏仁组PPAR-γ水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论典型升浮中药和沉降中药潜在作用靶点主要为CHRM3、CHRM1和PPAR-γ。

Different meridian tropism in three Chinese medicines: Tinglizi(Semen Lepidii Apetali), Yiyiren(Semen Coicis), Cheqianzi(Semen Plantaginis)

OBJECTIVE: To study the meridian tropism(MT) for three Chinese medicines: Tinglizi(Semen Lepidii Apetali, TLZ), Yiyiren(Semen Coicis, YYR), Cheqianzi(Semen Plantaginis, CQZ) in vivo experiments.METHODS: The extracts of TLZ,YYR, CQZ were orally administered to rats at a dose 234, 700 and 350 mg/kg, respectively. The urinary excretion rate, loss in weight of rats and the electrolyte levels in the plasma were measured, in order to assess the mechanisms of the three traditional Chinese diuretic medicines.RESULTS: TLZ, YYR and CQZ exhibited obvious diuretic effect and reduced the weight of saline-loaded animals. All the three diuretic medicines differentially reduced various serum, urinary, lung, stomach, kidney and hormonal markers, thus indicating the different mechanisms of action and a close resemblance with their different meridian as per the MT theory.CONCLUSION: Our findings suggest that the three Traditional Chinese Medicine(TCM) medicines-TLZ,YYR and CQZ-possess different Shamisen meridian.This can support the regimen of treating the same disease with different therapies in TCM theory.

Ephedra Herb extract ameliorates adriamycin-induced nephrotic syndrome in rats via the CAMKK2/AMPK/mTOR signaling pathway

This study aimed to investigate the effect and mechanisms of Ephedra Herb(EH)extract on adriamycin-induced nephrotic syndrome(NS),providing an experimental basis for the clinical treatment of NS.Hematoxylin and eosin staining,creatinine,urea nitrogen,and kidn injury molecule-1 were used to evaluate the activities of EH extract on renal function.The levels of inflammatory factors and oxidative stress were detected by kits.The levels of reactive oxygen species,immune cells,and apoptosis were measured by flow cytometry.A network pharmacological approach was used to predict the potential targets and mechanisms of EH extract in the treatment of NS.The protein levels of apoptosis-related proteins and CAMKK2,p-CAMKK2,AMPK,p-AMPK,mTOR and p-mTOR in the kidneys were detected by Western blot.The effective material basis of EH extract was screened by MTT assay.The AMPK pathway inhibitor(compound C,CC)was added to investigate the effect of the potent material basis on adriamycin-induced cell injury.EH extract significantly improved renal injury and relieve inflammation,oxidative stress,and apoptosis in rats.Network pharmacology and Western blot results showed that the effect of EH extract on NS may be associated with the CAMKK2/AMPK/mTOR signaling pathway.Moreover,methylephedrine significantly ameliorated adriamycin-induced NRK-52e cell injury.Methylephedrine also significantly improved the phosphorylation of AMPK and mTOR,which were blocked by CC.In sum,EH extract may ameliorate renal injury via the CAMKK2/AMPK/mTOR signaling pathway.Moreover,methylephedrine may be one of the material bases of EH extract.

Studying the nature of ascending-descending-floating-sinking of Chinese medicines based on gonadotropin-releasing hormone

OBJECTIVE:To explore the nature of ascendingdescending-floating-sinking of Traditional Chinese Medicine on normal rats using gonadotropin-releasing hormone(GnRh).METHODS:Normal male Sprague-Dawley rats were orally administered six floating Chinese medicines and seven sinking Chinese medicines for 14 d.Then,GnRh and relevant indicators were detected.Initially,the different effects of floating and sinking drugs on the body were explored.To verify the effects of floating and sinking drugs on the body,normal rats were orally administered Mahuang(Herba Ephedra Sinica)and Tinglizi(Semen Lepidii Apetali)for 14 d.Then,GnRh antagonists were administered.We observed the changes of relevant indicators and clarified the correlation between GnRh and the laws of floating and sinking.RESULTS:Floating Chinese medicines significantly increased the testicular coefficients;GnRh level in the serum;the protein level of GnRh receptor(GnRhR)in the testis;and the mRNA levels of androgen receptor(AR),small C-terminal domain phosphatase(SCP)3,SCP2,SYCE1,SMC1 B,SMC3,and Rec8(P<0.01 or<0.05).Sinking Chinese medicines did not react similarly,while GnRh antagonists blocked the regulatory effect of Mahuang(Herba Ephedra Sinica)but did not affect Tinglizi(Semen Lepidii Apetali).CONCLUSIONS:GnRh may be closely related to the nature of ascending-descending-floating-sinking of Chinese medicine.Floating Chinese medicines may promote their medicinal properties by regulating Gn RH level;however,sinking Chinese medicines did not affect GnRh level.