山羊NPC1基因核心启动子鉴定与转录调控分析

NPC1基因编码的C型尼曼匹克蛋白1(NPC1)参与脂筏形成、病原微生物内吞以及内吞体的胞内转运等过程。本试验旨在阐明海南黑山羊NPC1基因的转录调控机制,为研究病原微生物与宿主细胞互作提供理论参考。首先,以山羊NPC1基因1466 bp启动子序列为模板,构建9个启动子5'端连续缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因核心启动子区;继而对核心启动子区的关键转录因子进行预测分析,构建转录因子结合位点缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因的关键转录因子结合位点。结果表明:山羊NPC1基因的核心启动子区位于转录起始位点上游-195 bp至-60 bp,并且该区域存在E2F3(-134/-120 bp)、SREBP-1(-107/-96 bp)、SP1(-68/-62 bp)等多个转录因子结合位点。双荧光素酶报告实验结果表明,缺失E2F3、SREBP-1、SP1三个转录因子结合位点均会使山羊NPC1基因启动子的转录活性显著下降(P<0.01),且缺失SREBP-1结合位点后NPC1基因转录活性下降最显著。提示,SREBP-1转录因子对海南黑山羊NPC1基因转录活性具有重要的调控作用。本试验成功鉴定山羊NPC1基因的核心启动子区(-195/-60 bp)及该区域的关键转录因子结合位点SREBP-1,为进一步研究山羊NPC1基因介导病原微生物与宿主互作分子机制提供理论基础。

计及可再生能源接入配电网的负荷预测和优化

目前,可再生能源大量接入配电网,但是太阳能、风能、光伏及风电等可再生能源的间歇性和随机性不可避免地会造成配电网的波动。考虑电网内可再生能源发电功率与用电负荷随时间变化的特点,提出一种基于小波变换和神经网络的可再生能源接入配电网的负荷预测和优化方法。首先采集配电网的发电与负荷数据,利用小波变换处理收集到的数据,得到局部尺度和频率分解的特征参数,建立神经网络预测模型;然后,对经过小波变换后得到的特征参数进行训练,根据预测负荷对可再生能源的发电量进行调节,保持配电网供需侧的动态平衡。结果表明,所提方法能够对负荷进行有效预测,通过提前预测负荷量,保证配电网用电稳定性的同时,最大化利用可再生能源。

我国冰雪运动发展的战略规划与推进路径

以冰雪运动发展的前期基础和现实短板为切入点,明确我国冰雪运动发展的战略目标与任务,形成战略性推进路径。认为:我国冰雪运动的发展存在冰雪竞技运动综合实力偏弱、冰雪服务供给质量不高、冰雪市场发展面临多重困境、冰雪运动专业人才紧缺等问题。未来我国冰雪竞技运动的发展应:以开放为主线,均衡冰雪竞技项目发展;以共享为核心,满足群众冰雪运动发展需求;以标准为方向,强化冰雪产业服务创新;以疏通为基调,构建冰雪专业人才培养渠道。

有机朗肯循环中的工质热源转折温度及其特征

有机朗肯循环中存在有极值功循环与无极值功循环,即存在一种净功的转折线与所对应的工质热源转折温度,它对工质的选择与循环性能评价具有指标性的作用。基于梯形循环及其理论模型,本文建立工质饱和线形状(饱和液线斜率、饱和气线斜率及其斜率比与临界温度)及物性为自变量的数学关系,并提出和定义线性饱和线工质模型,建立循环性能与工质物性之间的数学关系。分别推导出有机朗肯循环中工质热源转折温度的经验公式,以及梯形循环下线性饱和线工质的热源转折温度理论公式及其修正。研究热源转折温度及其对应的优化工况的特征与一般性规律,得到21种工质热源转折温度的有机朗肯循环数值计算与经验公式之间的偏差小于1.97%。线性饱和线工质模型下,工质的热源转折温度为临界温度和蒸发器窄点温差之和;热源转折温度所对应的最高优化工况(最高优化蒸发温度与最大净功极值)随斜率比单调增加,至干工质时,最高优化工况接近工质的临界点。

海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析

甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C,MBL-C)是C型(Ca^(2+)依赖型)凝集素超家族的成员,其作为一种急性期蛋白,具有抗细菌感染的功能,参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1009 bp)的重要转录因子,探寻该基因的转录调控机制,本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1009 bp,采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1009 bp的启动子5′端侧翼缺失序列,克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中,结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点,利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体,转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明,海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内,在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明,RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P<0.01)。结果提示,RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。

生源多元化背景下高职院校分类教学创新研究

由于高职多元化招生制度改革背景,生源差异化严重,基础能力差异化等弊端,高职院校应该实施分类、分层次教学,进一步提高高职院校教育模式的适应性,最大限度地提升教学质量、教育效果。在此背景下,根据生源特点主要从制定差异性人才培养方案、构建数字化资源平台、重构教学内容及组织形式、考核评价方式等方面进行管理创新,为实现分类培养、精准教学、全面提高人才培养质量而提供有力基础保障。

工质物性变量化的梯形循环一般性热力学规律

基于前期研究提出的梯形循环及其理论模型,建立工质饱和线形状(饱和液线斜率、饱和气线斜率与临界温度)及物性的自变量数学关系,进而建立循环性能(净输出功、热效率等)与工质饱和线及物性的数学模型,从理论角度研究工质性质对循环性能影响的一般性热力学规律,得到循环性能分别随工质的干、湿、等熵性质和工质饱和线斜率、临界温度、雅克比数及定压比热的变化规律。

融入大数据元素,推动高校教学革新

以大数据为代表的新一轮科技革命正在引领社会各领域的快速发展,我国高校教学也面临着新的挑战和要求。培养新时代创新型人才,是时代赋予高校的新使命;推动高校教学革新,顺应时代发展,是高校教学前行的必然趋势。

多杀性巴氏杆菌脂多糖刺激羊支气管上皮细胞后的转录组测序与分析

脂多糖(LPS)是多杀性巴氏杆菌(Pm)关键的毒力因子,在其致病机制中发挥重要作用。为了探究不同血清型Pm LPS对宿主细胞的致病机制,本实验将从D型和A型Pm中提取的LPS(D-LPS和A-LPS)分别以1μg/mL刺激羊支气管上皮细胞6 h后裂解各组细胞,采用Illumina HiSeq测序平台进行转录组测序,将测序数据处理后获得转录水平差异基因,利用GO和KEGG数据库对转录差异基因进行GO功能注释与KEGG富集分析,并利用RTqPCR对转录组测序中的转录差异基因进行验证。结果显示:D-LPS组筛选出转录水平上调的基因62个,下调的基因24个,A-LPS组筛选出转录水平上调的基因27个,下调的基因29个,两组相同转录差异基因6个;转录差异基因的GO功能注释结果显示,D-LPS组中共显著富集到243个GO term,包括146个生物学过程(BP)、44个细胞组分(CC)、53个生物学功能(MF),且显著富集的生物学过程有ATP生物合成过程、NADH脱氢酶活性和RAGE受体结合等;A-LPS组中共显著富集到167个GO term,包括109个BP、19个CC、39个MF,且显著富集的生物学过程有IL-11受体结合、GTP酶活性、磷脂酶A2活性和尿嘧啶分解代谢过程等;KEGG富集分析结果显示,D-LPS组中的转录差异基因显著富集到氧化磷酸化、产热以及ECM-受体相互作用途径等通路,A-LPS组中的转录差异基因显著富集到Ras信号通路以及泛酸和辅酶A生物合成等通路。从上述两组中随机选取13个转录差异基因进行RT-qPCR验证,结果与测序结果基本一致。本研究首次分析了两种不同血清型Pm LPS刺激羊支气管上皮细胞后转录组测序数据的变化,结果表明两种Pm LPS均主要影响羊支气管上皮细胞免疫、细胞增殖分化、能量产生及代谢等信号通路,为研究LPS在Pm对宿主致病机制中的作用奠定了基础,同时也为Pm LPS疫苗的研发提供参考依据。

实时与瞬时弹性成像在肝纤维化评价中的应用

目的探讨超声实时组织弹性成像(RTE)与瞬时弹性成像(FS)在慢性乙肝患者肝纤维化程度评价中的应用价值。方法选取210例慢性乙肝患者作为观察组,另选取120例健康志愿者作为对照组。对两组研究对象实施超声RTE与FS检查,观察组最终通过穿刺活检确定肝纤维化程度。对比两组研究对象的肝纤维化指数、肝脏硬度值,分析RTE、FS检查指标与肝纤维化程度的关系。结果对照组与观察组各亚组的应变均值(MEAN)、标准偏差(SD)、复杂度(COMP)、偏度(SKEW)、蓝色领域百分比(AREA)值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组中,F0期患者的MEAN、SD、COMP、SKEW、AREA值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随着肝纤维化分期的升高,MEAN呈现出下降趋势(F0期>F1期>F2期>F3期>F4期),SD、COMP、SKEW、AREA水平均呈现出升高趋势(F0期<F1期<F2期<F3期<F4期)。对照组与观察组各亚组的肝纤维化指数(LF Index)、肝硬度值(LSM)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),LF Index、LSM均随着肝纤维化分期的升高而升高。相关性分析显示LF Index、LSM与肝纤维化分期均呈正相关性(P<0.05)。以F2期为分界点,LF Index和LSM值的ROC曲线下面积(AUC值)分别为0.892和0.905,以F3期为分界点,LF Index和LSM值的AUC值分别为0.886和0.872。结论超声RTE与FS检查均能有效评估慢性乙肝患者的肝纤维化程度,二者对肝纤维化程度的评估能力相当,且都具有无创、快速的优点。

产业经济学视域下我国滑雪产业研究综述与启示

北京冬奥会的成功申办,为滑雪产业的发展注入全新动力,在产业经济学指导下开展滑雪产业研究的应用价值和学理价值不断提升。只有明确现有的研究成果,才能进一步提升我国滑雪产业研究的质量和数量。运用理论分析、数理统计等方法梳理近10年来滑雪产业主题方向的文献情况,认为现有文献存在以下不足:1)研究内容存在地域偏差,研究视角存在理论缺失;2)理论方法缺乏系统运用,研究工具仍需继续创新;3)宏观研究理论深度不足,微观研究操作建议泛化。根据上述研究不足,结合滑雪产业发展的现实需求,得出启示:1)拓展研究区域视野,提升研究认识高度;2)跨学科理论方法相融合,应用多领域研究工具;3)坚持宏观领域理论创新导向,加强微观领域动态跟踪研究。

基于LCEEMD的低信噪比拉曼光谱自适应去噪方法研究

在生物体拉曼光谱快速采集或低功率采集过程中,往往会获得低信噪比拉曼光谱。针对低信噪比光谱数据,提出应用补充总体经验模态方法(CEEMD)分解拉曼光谱,并且依据特征模态分量的归一化排列熵值(NPE)按比例扣除噪声成分的方法,称为局部补充总体均值经验模分解方法(LCEEMD)。LCEEMD方法不仅解决了经验模态(EMD)分解中高频信号与噪声的模态混叠问题,还有效降低了总体经验模态分解法(EEMD)中的残留噪声。仿真数据实验显示,LCEEMD方法在处理10db信噪比模拟光谱时获得了39.615 0db信噪比,0.001 17标准差和0.999 9相关系数。在人体皮肤拉曼光谱试验中,LCEEMD方法滤波后数据准确呈现出角质层脂质酰胺I带激发拉曼强谱峰以及甘油三酸酯中(C—O)酯微弱谱峰。在水稻叶片可溶性糖定量预测模型中,LCEEMD方法取得了0.871 7预测相关系数和0.912 0预测标准误差,优于EMD和EEMD软阈值去噪(0.511 4,1.647 8和0.638 2,1.508 8)。LCEEMD方法实施过程中,根据去噪性能指标反馈调整归一化排列熵阈值,直至获得最佳去噪效果,滤波过程无需参数设置,可以自适应实现。

绵羊CCL19基因启动子活性分析及其转录调控元件筛选

【目的】鉴定绵羊趋化因子C-C基序配体19(C-C motif chemokine ligand 19,CCL19)基因启动子的核心启动子区域和关键转录因子,探究该基因在转录调控方面的作用机制。【方法】选取绵羊CCL19基因5′-侧翼序列1000 bp,PCR扩增启动子的7个不同长度的截短片段,并连接至pGL3-Basic质粒;将重组质粒与pRL-TK质粒共转染到293T细胞中,结合双荧光素酶报告基因检测系统分析不同截短片段的相对荧光活性。利用在线预测软件分析和筛选CCL19基因核心启动子区域内的转录因子结合位点。采用定点突变技术构建转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体,与pRL-TK质粒共转染到293T细胞,分析转录因子结合位点缺失质粒的相对荧光活性。【结果】成功构建了7个不同长度(pGL3-P、pGL3-P1、pGL3-P2、pGL3-P3、pGL3-P4、pGL3-P5及pGL3-P6)的CCL19基因启动子片段的荧光素酶报告载体;采用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定出转录起始位点上游-256/-186 bp为CCL19基因启动子核心启动子区域,表明该区域对CCL19基因转录调控有重要作用。生物信息学分析预测到该区域存在POU5F1(-201/-189 bp)、ZBTB26(-228/-217 bp)、FOXI1(-239/-228 bp)、GLI2(-255/-243 bp)和SP2(-219/-211 bp)5个转录因子的结合位点,并成功构建了转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体。双荧光素酶报告基因检测系统分析显示,POU5F1转录因子的结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性极显著降低(P<0.01),FOXI1、ZBTB26、SP2转录因子结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性均极显著升高(P<0.01)。【结论】试验成功构建CCL19基因启动子荧光素酶报告载体,确定CCL19基因启动子的核心启动子区域为转录起始位点上游-256/-186 bp,并鉴定出转录因子POU5F1结合位点可能是CCL19基因转录的重要调控位点,为下一步研究绵羊CCL19基因在先天性免疫、适应性免疫和淋巴细胞迁移等方面的功能提供理论基础。

超声引导下细针穿刺抽吸活检联合基因检测在甲状腺TI-RADS4级结节诊断中的应用

目的:探讨超声引导下细针穿刺细胞学活检(FNAB)联合鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因V600E点突变检测对甲状腺TI-RADS4级结节的诊断价值。方法:选取2019-2021年在淮南东方医院集团总医院实施手术治疗的甲状腺TI-RADS4级结节患者78例为观察对象,所有患者均于术前行超声引导下FNAB检查及BRAF V600E基因检测,以术后病理切片结果为“金标准”,分析超声引导下FNAB检查、BRAF V600E基因检测及联合诊断的价值。结果:78例患者术后病理结果显示,恶性肿瘤患者60例(占76.92%),均为甲状腺乳头状癌;超声引导下FNAB检测、BRAF V600E基因检测结果与病理对照,采用Kappa一致性检验,Kappa值分别为0.430、0.583;二者联合检测结果Kappa值为0.720;联合检测诊断甲状腺结节的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为98.33%、66.67%、90.77%和92.31%。结论:对于甲状腺TI-RADS4级结节,超声引导下FNAB检测联合BRAF V600E基因检测可以显著提高诊断价值。

羊源D型多杀性巴氏杆菌感染小鼠脾脏转录组分析

试验旨在探索羊源D型多杀性巴氏杆菌入侵宿主脾脏组织中引发的免疫应答途径。首先利用羊源D型多杀性巴氏杆菌(HN01菌株)感染小鼠,建立羊源D型多杀性巴氏杆菌感染的动物模型;之后利用转录组测序技术获得感染小鼠与正常小鼠的脾脏转录组数据,并使用COG、KOG、eggNOG、GO、KEGG数据库对测序结果中的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行功能注释与分析,同时对于显著富集到关键免疫通路的差异表达基因使用STRING软件和KEGG mapper进行蛋白互作分析,筛选出核心通路中起关键作用的基因;最后选取关键的10个基因进行实时荧光定量RT-PCR验证。转录组分析结果显示,与正常组相比,感染组中筛选出3380个差异表达基因(P<0.01,log_(2)|FoldChange|≥0.5),其中1691个基因上调,1689个下调。基因功能富集分析结果表明,感染组脾脏中的差异表达基因主要发挥信号转导的功能,其主要参与的生物途径包括细胞因子与细胞因子受体互作通路、趋化因子信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路。蛋白互作分析筛选出约28个核心差异表达基因,结合实时荧光定量RT-PCR验证后,其中9个基因的表达结果与测序一致,分别是C3、Cd4、Cxcl13、Lck、Gnai1、Grap2、IL-6、Cxcr6及Serping1基因。本研究初步证明了脾脏在抵抗多杀性巴氏杆菌入侵中参与了一系列免疫应答反应,为进一步研究羊源D型多杀性巴氏杆菌与宿主之间相互作用的分子机制奠定理论基础。

聚硼硅氧烷的合成及其流变性能

为了探究聚硼硅氧烷(PBDMSs)的物理交联网络结构对体系黏弹性的影响,将不同羟基含量的端羟基聚二甲基硅氧烷(PDMS)分别与硼酸进行反应,制备不同硼化交联密度的PBDMSs,并对合成的PBDMSs的结构、热力学及流变性能进行表征。结果表明:制备的PBDMSs中含有Si—O—Si,Si—O—B,CH_(3)—Si—CH_(3)和B—O—B结构单元;PBDMSs具有优异的耐低温性能,其玻璃化转变温度随着原料PDMS中羟基含量的增加而升高,且当原料PDMS的羟基含量较低时(1%和2%,质量分数),生成物PBDMSs具有一定的结晶能力;PBDMSs具有频率敏感性的特征,并且具有良好的抗冲击能力、优异的阻尼耗散能力和出色的回弹性能,原料PDMS的羟基含量影响生成物PBDMSs的物理交联网络结构,进而对PBDMSs的动态模量有显著影响,实际应用时可根据需求改变PDMS的羟基含量来调节PBDMSs的黏弹性。

外泌体在脓毒症器官功能障碍中的研究进展

外泌体是一种由活细胞分泌的纳米级膜性囊泡,包含核酸、蛋白质和脂质等活性分子,可以促进细胞间的信号传递。近期研究表明,脓毒症期间的外泌体中富含细胞因子和损伤相关模式分子(DAMPs),在促进炎症反应及介导脓毒症期间的器官功能障碍中发挥着重要作用。本文对外泌体在脓毒症中的调节机制以及在继发性多器官功能障碍中的作用进行综述。

一种提高生物体拉曼光谱痕量测量精度的方法

微量物质拉曼光谱测量精度的提高是拉曼分析技术的难点之一,特别是高荧光背景下生物体中微量物质的测量。根据拉曼谱峰突发、离散特点,分别给出荧光背景和噪声拟合函数,通过监测总体拟合偏差A类不确定度函数实现拉曼谱峰定位和干扰信号滤波;进一步根据谱峰位置划分光谱区间,在单调区间内弱化非谱峰信号,实现谱峰信号增强。与其他光谱处理方法比较,可以准确拆分重叠特征峰,不会降低特征峰高度,提供更加灵敏的半谱峰面积指标。实验表明,该方法在处理皮肤拉曼光谱时,可以准确得到螺旋构象的酰胺I带、神经酰胺和CO的归属拉曼谱峰;另外经过该方法处理后数据建立水溶性糖(水稻叶片)含量测量模型,其精度优于小波分解、多项式拟合和非线性最小二乘法。

乡村振兴背景下医学高职院校人才培养机制助推基层医疗建设研究

为了改善基层医疗人才匮乏现状,从医学高职院校人才培养机制角度出发,剖析一些高校毕业生不愿意服务基层医疗的原因,从而研究有助于基层医疗建设的优化措施。

大学生参与电子竞技的感知风险对行为意愿的影响:有调节的中介模型

目的:探究感知风险对大学生群体参与电子竞技行为意愿的影响,以及行为态度和同伴支持的作用机制。方法:采用问卷调查、数理统计等方法,基于感知风险理论和同伴支持理论,以行为态度为中介、以同伴支持为调节,利用SPSS 24.0对搜集的数据进行分析并验证研究假设。结果:大学生在参与电子竞技的过程中,感知风险对行为态度产生负向直接作用;感知风险对行为意愿的直接作用不显著;行为态度在大学生参与电子竞技过程中具有完全中介作用;同伴支持对感知风险和行为态度的调节作用显著。结论:大学生群体参与电子竞技活动的感知风险、行为态度是大学生群体参与电子竞技活动的阻碍因素和中介因素;大学生群体同伴关系能够通过调节阻碍因素改变中介因素的作用水平,进而影响大学生群体参与电子竞技活动的行为意愿。