利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响

为研究猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的PK-15细胞系(PK-OAS2-KO)。在构建PK-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导PK-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染PK15细胞获得的PK-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的PK-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。

E3泛素连接酶RNF114：一种新的抗猪瘟病毒宿主因子

在病毒与宿主进化的过程中,E3泛素连接酶作为宿主和病毒联系的桥梁,介导这二者之间的相互作用。在宿主细胞中,E3泛素连接酶通过调节宿主细胞的抗病毒免疫应答间接地抑制病毒复制,如调控信号通路、细胞凋亡和细胞分化等。此外,E3泛素连接酶也可以直接靶向并降解病毒编码蛋白调控病毒复制。为逃逸宿主的抗病毒反应,许多病毒编码或劫持E3泛素连接酶,修饰宿主蛋白以利于其复制,如:kK3和kK5通过调控宿主细胞膜中的MHC-I、MHC-II以及细胞膜表面的免疫受体ICAM-1和DC-SIGN等分子。

利用深度测序和单个B细胞PCR技术解析猪流行性腹泻病毒免疫后的猪抗体谱

猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染主要引起10日龄内新生仔猪呕吐、水样腹泻和严重肠炎,导致高致病率和高死亡率,是目前引起我国新生仔猪腹泻的主要病原,每年给我国养猪业造成重大的经济损失。预防PEDV感染主要通过B细胞产生的抗体免疫应答,特别是肠道黏膜局部抗体的免疫应答。大量文献已经证实PEDV感染或免疫接种怀孕母猪通过乳汁能够保护刚出生的哺乳仔猪,明显减轻仔猪的临床症状和死亡率,并发现仔猪的被动免疫保护和初乳、母乳中的中和抗体水平最相关。因此如何诱导高水平的保护性抗体是制定科学的免疫程序和设计下一代新型疫苗必须回答的科学问题。