空间与加权基因共表达分析揭示跨种属的缺血性心力衰竭机制

[目的]从空间与基因共表达网络的角度揭示跨种属的缺血性心力衰竭机制。[方法]从美国国立生物技术信息中心基因表达数据库(NCBI-GEO)中检索获得GSE210374和GSE57338高通量测序数据,利用R语言软件程序包分析筛选在心肌梗死大鼠不同心肌区域中差异表达基因(DEG)以及缺血性心力衰竭患者与健康对照者的心肌样本间的DEG,分析共同基因的分区域表达情况。利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选心肌梗死相关的基因并进行富集分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI)筛选核心基因(HG)。[结果]在心肌梗死大鼠和正常对照组中共筛选出4835个差异基因,在缺血性心力衰竭患者和正常对照样本共筛选出51个差异基因,揭示心肌梗死后左心室心肌梗死区(I区)、边缘区(BZ区)及远端区(R区)的代表性基因集。空间表达分析发现两个种属样本:在每个心肌分区均有20个共表达基因,其中16个在3个分区均有表达,在I区、BZ区和R区特异表达的基因数分别为2、0和2个。富集分析显示:各分区的共表达基因功能各异,I、BZ区与胶原纤维组装、应激诱导的心肌细胞肥大、下调c-Jun氨基末端激酶(JNK信号)与细胞增殖等功能以及补体信号通路相关;而I、R区则富集于Wnt和胶原结合;作为非缺血的远端R区,共表达基因显著富集于细胞外基质的抗压性、细胞溶解以及抑制T细胞增殖等功能。此外值得注意的是:3个分区的共表达基因的产物大部分位于细胞外空间和细胞外基质当中,提示可能存在活化的细胞分泌与互作调控。进一步PPI分析提示无孢蛋白(ASPN)、骨诱导因子(OGN)和ⅩⅣ型胶原蛋白α链(COL14A1)基因可能是前述机制的核心基因。[结论]大鼠和人类缺血性心力衰竭的共性机制涉及补体与凝血级联信号、Wnt等多种信号通路;可能与细胞外基质、外泌体介导的细胞凋亡密切相关;ASPN、OGN和COL14A1可能是其中的核心基因。本工作有望为缺血性心力衰竭相关转化研究中的干预靶点与路径选择提供空间与通路参考。

基于表达谱的Zunyimycin C抗肝细胞癌的机制分析

目的 探讨蒽酮类抗生素Zunyimycin C治疗肝细胞癌(HCC)的作用机制。方法 通过PharmGKB网络药理学工具预测Zunyimycin C抗HCC的作用靶点;以Zunyimycin C干预HCC HepG2和人源正常肝细胞L02,分为试剂处理组、空白对照组、药物处理组及药物处理后加抑制剂组。对不同处理组进行基因测序分析,筛选差异性表达基因,运用在线数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,根据基因表达谱进行聚类分析。结果 预测得到细胞内与Zunyimycin C结合得分最高的20个靶点,这些靶点主要参与代谢和肿瘤发生发展的通路。KEGG通路富集分析表明,癌症、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)、RAS相关蛋白(Rap1)、细胞黏附分子、焦点黏附、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是Zunyimycin C发挥抗HCC的主要通路。结论 Zunyimycin C可能是通过多靶点多通路的方式发挥抗肿瘤作用。

miR-26a靶向ADAM10对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-26a对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移的影响及分子机制。方法实验设置对照(Con)组、脂多糖(LPS)组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-26a组、LPS+pcDNA3.1组、LPS+pcDNA3.1-ADAM10组、LPS+miR-26a+pcDNA3.1组、LPS+miR-26a+pcDNA3.1-ADAM10组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-26a表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;蛋白质印迹(Western blot)法检测解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)、细胞增殖核抗原Ki67(Ki-67)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达;Transwell检测细胞迁移;双荧光素酶报告实验验证miR-26a和ADAM10的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组miR-26a表达水平显著降低,细胞活性显著升高,克隆形成数及迁移细胞数显著升高,Ki67、N-cadherin表达水平显著升高,E-cadherin表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-26a抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移。miR-26a靶向ADAM10,过表达ADAM10逆转了miR-26a对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移的抑制作用。结论过表达miR-26a可能通过靶向下调ADAM10抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移。

EXPERIMENTAL STUDY ON OPEN－DIE COLD EXTRUSION FORMING TECHNIQUE FOR INVOLUTESPLINE SHAFTS

The deformation principles of the steady- state and the unsteady一state of open- die cold extrusion for involute spline shafts are analyzed by means of experiments. On one hand,based on the deformation principles of the steady- state, data for determining structural parameters of the die, the size of the billet and the constraint condition of this technique are given. On the other hand, according to the principles of the unsteady- state, data for modifying the shapes and sizes of the bil- lets are provided.