重组结核分枝杆菌11kDa蛋白鉴别潜伏性结核感染与卡介苗接种的研究

目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防治所和北京市大兴区结核病防治所,于2014年7月至2016年3月在以上3个区的高校和工厂招募健康志愿者。共计招募3001名志愿者,所有志愿者体检合格,均签订知情同意书。对所有志愿者采用Mantoux法进行重组11kDa蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1ml重组11kDa蛋白(10μg/ml)和0.1ml TB-PPD(50U/ml),观察注射后72h后的皮肤反应。于皮肤试验前采集所有志愿者的静脉血,进行体外γ-干扰素释放试验(IGRA)检测。采用"一致率(%)"和"一阶一致性系数(the first-order agreement coefficient,AC1)比较重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD试验及IGRA结果的差异。3001名志愿者均接受3种方法检测,其中475名3种检测结果均为阴性的受试者,采用数字表法按随机双盲的原则,以2∶1的比例接种卡介苗(318名;失访8例)和安慰剂(147名;失访2例),接种3个月后再次进行重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD皮肤试验及IGRA,采用"一致率(%)"和"AC1"比较其结果差异。结果健康志愿者潜伏性结核感染筛查中,IGRA阳性率(34.4%,1033/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=22.787,P<0.001);IGRA与重组11kDa蛋白的一致率为93.4%(2804/3001),AC1值为0.882(95%CI=0.866~0.898),两者有较好的一致性。TB-PPD阳性率(47.7%,1430/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=182.146,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为60.6%(1819/3001),AC1值为0.243(95%CI=0.207~0.279),两者的一致性较差。卡介苗接种鉴别研究中,接种卡介苗的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)与IGRA(3.1%,10/318)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.571,P=0.109);一致率为95.6%(304/318),AC1值为0.954(95%CI=0.929~0.979),两者有较好的一致性。重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)低于TB-PPD(56.3%,179/318),差异有统计学意义(χ^2=167.350,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为42.5%(135/318),AC1值为0.025(95%CI=-0.106~0.155),两者的一致性较差。接种安慰剂的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(4.1%,6/147)与IGRA(1.4%,2/147)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.667,P=0.109);一致率为95.9%(141/147),AC1值为0.957(95%CI=0.921~0.993),两者有较好的一致性。TB-PPD的阳性率(17.7%,26/147)高于重组11kDa蛋白(4.1%,6/147),差异有统计学意义(χ^2=15.385,P<0.001),一致率为82.3%(121/147),AC1值为0.781(95%CI=0.690~0.871),两者有较好的一致性。结论重组11kDa蛋白在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种方面与IGRA有很好的一致性,可作为潜伏性结核感染者筛查与卡介苗接种鉴别的候选诊断试剂。

冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)原液效力评价用国家参考品的初步建立

目的以冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](以下简称"EC")原液为原材料,研制EC变态反应原原液效力评价用国家参考品。方法以电泳法、高效液相色谱法分别测定备选EC原液纯度,纯度合格后经精密称量、分装、冻干制成候选国家参考品,再测定其蛋白质和水分含量。将候选国家参考品稀释成不同稀释度后,皮内注射结核分枝杆菌活菌致敏的豚鼠,根据皮肤试验硬结或红晕反应平均直径大小(简称"反应平均直径大小")结果探索原液效价测定的适宜稀释度。在此基础上,将候选国家参考品用于EC原液的效价测定并进行方法验证,初步评价其适用性能。研究还初步观察了候选品在-20℃放置24个月的稳定性。结果 EC原液电泳法纯度为100.00%,高效液相色谱法纯度为95.33%,候选国家参考品蛋白质含量为508μg/瓶,水分含量为1.57%,分装精度控制在±1%以内。稀释度探索结果显示:候选品稀释度为2.5μg/ml(12.5U/ml)、5μg/ml(25U/ml)和10μg/ml(50U/ml)时剂量对数反应平均直径大小曲线有良好的线性关系(R^2=0.9944),可作为后续研究的适宜稀释度。将候选国家参考品用于EC原液效价测定,两者剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R^2=0.9878,R^2=0.9643),且每个稀释度EC原液与相应稀释度候选国家参考品反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2。方法验证结果显示:候选国家参考品和EC原液的剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R^2=0.9999,R^2=0.9815),且两者相应稀释度反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2,方法可行。初步稳定性研究结果显示:-20℃放置24个月的候选国家参考品效价测定性能稳定。结论候选国家参考品的纯度、蛋白质含量、水分含量及均匀性检测均符合国家参考品质量要求,将其稀释到适宜稀释度后可用于EC原液的效价测定;经方法验证与稳定性观察,显示其性能良好,为国家参考品申报提供了基础。

结核菌素类产品的发展历程概述

结核菌素类产品研发至今已120多年,经历了旧结核菌素、纯蛋白衍生物和新型皮肤试验诊断试剂的不同发展阶段。本文介绍以上产品的研发历程和产品特点,以及发展趋势,供使用人员了解其背景知识,便于更合理的应用此类产品,同时也为新型皮肤试验诊断试剂的研究提供借鉴。

国内外结核病预防用卡介苗质量标准比较

卡介苗对预防结核病有重要意义，我国实行新生儿出生时即接种卡介苗的策略。作者从国内外卡介苗的质量标准概况、我国卡介苗菌种概况、我国卡介苗接种后诱导免疫反应及不良反应等方面进行论述，为了解中国卡介苗提供基本素材。

泰安市白纹伊蚊监测分析

目的了解辖区内白纹伊蚊密度、分布及季节变化趋势。方法在6—9月的每月中旬对监测点进行现场监测,采用布雷图指数(BI)监测幼虫密度,采用双层叠帐法监测成蚊密度。结果泰安市每月均监测到白纹伊蚊幼虫和成蚊,季节性消长明显,呈单峰型,幼虫密度8月布雷图指数高达62. 79,成蚊帐诱指数高达26. 37只/(顶·h),孳生容器以闲置容器阳性构成比为71. 97%。结论泰安市白纹伊蚊种群密度较高,存在登革热流行的潜在危险,应加强监测和环境整治以及开展健康教育等工作,预防病原输入而引起暴发流行。

课程思政与专业课程融合的探索和实践--以兽医临床诊疗技术为例

以兽医临床诊疗技术为例,对课程思政体系构建、课程思政元素发掘、专业课程与课程思政的融合等方面进行了探索和实践。通过在专业课中开展思政教育,学生的学习积极性、专业素养、思想政治觉悟得到了全面提升。课程思政和专业课程的有机融合在培养社会主义建设者和接班人的过程中发挥了积极的作用。

屋尘螨致敏小鼠鼻炎模型建立及其免疫学评价

目的基于屋尘螨变应原组主要变应原(Der.p1)的剂量建立稳定的屋尘螨过敏小鼠模型,并以此系统筛选过敏评价生物标识。方法以屋尘螨变应原提取物为致敏蛋白,以氢氧化铝为佐剂,依据主要变应原(Der.p1)含量设置不同抗原浓度组和不同免疫针次,皮下注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫一周后,采用Der.p1浓度为500μg/mL的屋尘螨变应原提取物滴鼻激发,每只小鼠20μL,每天1次,持续1周。通过观察小鼠的过敏反应症状、检测鼻部组织病理变化、测定各组小鼠体液免疫和细胞免疫指标的变化,筛选最佳的过敏模型建立程序。在此基础上更换不同来源屋尘螨抗原重新致敏BALB/c小鼠,验证过敏小鼠模型建立方法的可重复性。结果致敏小鼠经抗原激发后均出现明显的过敏反应,其中最佳免疫程序为Der.p1浓度100μg/mL、皮下注射两次。该致敏组小鼠经抗原激发后体内IL-4特异性淋巴细胞数(174±23)明显增多,与阴性对照组(22±0.5)比较差异具有统计学意义(P=0.011);脾淋巴细胞Th2型极化显著(Th1/Th2比值为0.362±0.028),与阴性对照组(0.832±0.07)比较差异具有统计学意义(P=0.034);血清屋尘螨特异性IgE抗体水平与激发前比较明显增高(P=0.00017),总IgE抗体水平与阴性对照组比较明显增高(P=0.041)。利用不同来源的屋尘螨抗原,选择优化的致敏程序建立过敏小鼠模型,表现出较好的可重现性。结论成功构建屋尘螨变应原特异性致敏小鼠模型,并以此筛选到致敏相关的生物标识,证实Der.p1剂量与致敏效果间的量效关系,为后续屋尘螨过敏症机制研究及屋尘螨变应原脱敏制剂研制提供实验基础。

我国结核病免疫学预防、治疗与诊断用制品发展进程与展望

结核病的免疫学预防、治疗与诊断是控制结核病的最重要措施之一。作者总结了我国结核病免疫学生物制品的发展进程、研究现状及未来的发展方向,同时展望了在已构建的结核病免疫预防体系框架下,有机运用各种生物制品,降低我国结核感染率、发病率,改变我国结核病高负担现状的可能性。

泰安市病媒生物防治工作现状调查分析

目的了解泰安市及辖区内县(市、区)、乡镇三级疾病预防控制机构的病媒生物防治工作现状,对存在的问题进行调查分析,促进泰安市病媒生物防治工作的可持续发展。方法通过调查问卷的形式,收集泰安市及辖区内县(市、区)疾病预防控制中心关于病媒生物防治的人员、设备、技术能力和开展工作等现状的基础数据,并对相关调查数据进行统计学处理分析。结果目前泰安市及辖区内县(市、区)、乡镇三级疾病预防控制机构共计11家,其中有病媒生物防治工作专业部门的占81.82%,均可开展病媒生物监测工作,病媒生物监测完成的达88.89%。从事病媒生物监测与控制工作的专业技术人员共计37人,仅占疾病预防控制机构在职人员的0.2%。年龄偏大,年龄≥50岁的占24.32%,≥40岁占32.43%,其他年龄占43.25%;工作经验丰富,连续工作年限≥10年的占51.37%,≥5年的占29.73%,<5年的占18.92%;从业人员专业水平有待提高,具有本科及以上学历者占59.46%,具有副高及以上专业技术职称占27.03%。结论病媒生物防治工作的体系有待完善,应该持续地加强病媒生物防治机构建设,培养和引进病媒生物防治的专业技术人才。

一株盐湖芽孢杆菌AF-1的鉴定及其抗尖孢镰刀菌活性研究

盐湖作为一种特殊的极端环境,其中的微生物具有巨大的潜在应用价值.为了了解盐湖微生物的特性,对分离自山西运城盐湖的一株芽孢杆菌AF-1进行分类鉴定及抗菌特性研究.对该芽孢杆菌分类鉴定采用的是16s rDNA基因序列分析;以尖孢镰刀菌作为指示菌,采用杯碟法检测AF-1发酵上清液的抗菌活性,研究不同温度、pH、盐度条件对发酵上清液抗菌活性的影响,检测AF-1的生长曲线和抗生素产生量的关系及抗菌曲线;利用扫描电镜和透射电镜观察AF-1的抗菌效果;利用PCR技术对AF-1基因组进行抗菌功能基因PKS筛查.结果显示,16s rDNA基因序列的系统发育分析表明AF-1为Bacillus属成员,对尖孢镰刀菌有很好的抗性;AF-1发酵上清液在不同的温度、p H和NaCl浓度条件下均有很好的抗菌活性;显微镜检测和透射电镜结果显示,AF-1发酵上清液使尖孢镰刀菌细胞结构出现明显改变,并导致部分细胞质泄露;AF-1基因组中含有聚酮合酶PKS基因,可以用来合成抗生素前体物质.以上结果表明,从盐湖中分离的芽孢杆菌AF-1具有很好的抗尖孢镰刀菌的活性,可以作为抗菌活性物质的新菌种来源.

肠道菌群与大脑双向互动的研究进展

肠脑轴(GBA)是大脑与肠道之间由神经—内分泌介导的双向应答系统,连接着大脑的情感认知和外周肠道的功能。近年有研究发现,定植于人体肠道内的微生物在脑肠交流中起到了不可或缺的重要作用。一方面,肠道菌群可通过GBA影响大脑的发育与功能;另一方面,大脑也可以通过GBA改变肠道菌群的结构组成。这些发现逐渐形成了一个新的医学研究热点,即"菌群—肠—脑轴"。该文就肠道菌群与大脑之间通过GBA进行的相互作用作一综述,希望为胃肠道和大脑功能领域的研究以及相关疾病的治疗提供一定支持。

代谢性疾病中胆汁酸水平变化及相关治疗策略

胆汁酸作为一种信号分子可以特异性地与胆汁酸受体(如法尼醇X受体、G蛋白偶联胆汁酸受体1)结合介导一系列生物调节反应。近年发现,胆汁酸在调节糖代谢、脂质代谢和能量代谢中扮演着十分重要的角色。在代谢性疾病的发生发展过程中,也常伴随着胆汁酸谱以及受体的改变。基于胆汁酸在代谢性疾病中的重要性,未来其可能成为临床诊断、预测、评价治疗效果的潜在生物标志物。该文对胆汁酸与代谢性疾病关系以及基于调节胆汁酸代谢治疗代谢性疾病进行综述。

基于约登指数的肝纤维化诊断模型改进研究

目的·采用约登指数改进肝纤维化诊断模型的性能,解决组间样本数相差大时诊断灵敏度不平衡的问题。方法·使用在GitHub网站公开获取的来自上海中医药大学附属曙光医院的482例乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染患者和来自厦门市中医院的86例HBV感染患者分别作为训练集和验证集开展研究。基于HBV患者的年龄和3项血液学检查结果(血小板计数、血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量),建立线性判别分析、随机森林、梯度增强、决策树4种机器学习模型,实现早期和晚期肝纤维化的诊断,以及肝纤维化和肝硬化的诊断。借助约登指数调整模型的分类阈值和诊断结果。采用总准确率、受试者工作特征曲线下面积(area under the curve,AUC)和灵敏度等指标,比较各模型以及临床常用的基于4个因素的纤维化指数(fibrosis index based on the 4 factor,FIB-4)的诊断性能。结果·在肝纤维化诊断中,4种机器学习模型均存在组间灵敏度不平衡的现象。在向模型引入约登指数后,组间灵敏度的差别均大幅减小;机器学习模型的总准确率和AUC普遍高于FIB-4。结论·基于约登指数的诊断模型可平衡各组间的灵敏度,有助于提高肝纤维化诊断模型的综合性能。

重组结核杆菌融合蛋白(EC)产品质量标准的建立

目的建立重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)";简称"EC"]原液及成品的质量标准。方法选取6批次EC原液及11批次EC成品、体质量300~400g无特定病原体(SPF)级白色豚鼠21只、卡介苗(BCG)活菌菌液(1mg/ml)、结核分枝杆菌减毒株H37Ra活菌菌液(2mg/ml)作为实验材料,建立EC原液质量标准,包括残余抗生素活性检测、致敏效应实验、效价测定及动物法鉴别实验;建立EC成品质量标准,包括鉴别实验及效价测定;应用建立的质量检测标准对连续6批次EC原液和11批次EC成品进行检测,验证其适用性和可行性。结果(1)EC原液残余抗生素活性检测。①专属性实验:磷酸盐缓冲液的吸光度值(A值)为1.736,卡那霉素标准品(0.0ng/ml)的A值为2.178;②线性与范围实验:卡那霉素标准品在0.5~40.5ng/ml范围内,连续3次实验回归方程拟合优度的判定系数R^2均大于0.99;③准确性实验:连续3批次EC原液的卡那霉素残留量回收率分别为112.163%、117.285%、103.527%;④重复性实验:连续3批EC原液重复性实验A值相对标准偏差(RSD)分别为5.59%、9.18%、8.07%;⑤中间精密度实验:同一实验员不同时间及不同实验员检测连续3批次EC原液卡那霉素残留量检测均小于定量限0.5ng/ml,为限量测定;⑥耐用性实验:改变读板时间(0、5、10min)对EC原液卡那霉素残留量检测无影响,卡那霉素残留量均小于定量限0.5ng/ml。(2)EC原液效价测定:稀释度为1μg/ml(5U/ml)、2.5μg/ml(12.5U/ml)、5μg/ml(25U/ml)及10μg/ml(50U/ml)时,每个稀释度对应的2批次EC原液动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径及硬结或红晕平均直径总和比值分别为(15.17±0.88)mm、(13.67±1.25)mm、1.11(91.00/82.00);(17.00±1.76)mm、(16.08±1.32)mm、1.06(102.00/96.50);(19.58±1.69)mm、(17.67±1.37)mm、1.11(117.50/106.00);(20.75±1.57)mm、(20.25±1.17)mm、1.02(124.50/121.50)。(3)EC原液动物法鉴别实验:连续3批次EC原液动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径均为0,TB-PPD动物皮肤试验的硬结平均直径为(15.13±5.06)mm。(4)EC成品鉴别试验:连续3个批次EC成品动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径均为0,TB-PPD动物皮肤试验的硬结平均直径为(16.50±2.65)mm。(5)质量标准验证:①EC原液:残余抗生素活性检测结果均低于定量限0.5ng/ml;致敏效应实验结果均为皮肤试验后豚鼠注射部位局部反应无明显区别,也无全身反应;每个稀释度[2.5μg/ml(12.5U/ml)、5μg/ml(25U/ml)及10μg/ml(50U/ml)]在皮内注射后24h所产生的局部硬结或红晕反应平均直径均≥8mm,与相应稀释度参考品的局部硬结或红晕平均直径总和的比值为0.9±0.1;动物法鉴别实验结果为EC原液对BCG活菌致敏组豚鼠的皮肤试验结果均呈阴性反应(硬结或红晕平均直径<5mm),而TB-PPD呈阳性反应(硬结平均直径≥5mm)。②EC成品检测:各批次成品对BCG活菌致敏组豚鼠的皮肤试验均呈阴性反应(硬结或红晕平均直径<5mm),而TB-PPD呈阳性反应(硬结平均直径≥5mm)。结论所建立的质量标准可用于EC原液及成品的检定。

肠道法尼醇X受体对糖脂代谢调节作用的研究进展

法尼醇X受体(farnesol X receptor,FXR),又称为胆汁酸核受体,是配体依赖性的核转录因子,可分布于体内肝脏、肠道等多个组织器官;胆汁酸是其内源性天然配体。近年有研究表明,肠道FXR对于糖脂代谢调节具有不可或缺的作用,肠道特异性FXR激动剂或抑制剂均可参与体内糖脂代谢调节。该文对近年来报道的肠道FXR在糖脂代谢中的作用进行系统的综述。

布鲁氏菌抗原检测试剂用国家参考品的研制

目的研制布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。方法将3株布鲁氏菌标准株和10株阴性参考菌株在各自适宜的培养基和温度下进行培养,收集新鲜培养物并灭活,采用比浊法制备阳性和阴性参考品菌液;分光光度法制备最低检出量和重复性参考品菌液。对参考品进行均匀性检测和稳定性试验,组织4个实验室对布鲁氏菌抗原检测试剂用参考品进行协作标定。结果建立了由3株布鲁氏菌为阳性参考品、10株阴性菌为阴性参考品、最低检出量参考品及重复性参考品组成的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品。该参考品具有较好的均匀性及稳定性。协作标定结果为阳性参考品符合率均为100%,阴性参考品符合率均为90%,最低检出量参考品的检出限为1×10^7~1×10^6个/ml之间,重复性参考品均符合规定。结论研制的布鲁氏菌抗原检测试剂评价用国家参考品可用于布鲁氏菌抗原检测试剂的质量控制。

RNA干扰技术防治新型冠状病毒肺炎的思考和展望

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019, COVID-19)对社会和人类健康造成严重了的危害。除了要严格控制病毒传播外,当务之急是探索新的治疗策略,开发新的治疗药物,努力提高患者生存率和生存质量。本文回顾了当前抗病毒药物研发的途径,并结合此次新型冠状病毒(SARS-CoV-2)基因组特点和RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术在相关领域中的研究进展,分析了将RNAi技术应用于COVID-19防治的可行性、优势与需要克服的问题。

中低压配电网故障定位的改进蚁群算法研究

蚁群算法在配电网故障定位中取得了良好的应用效果,但其具有搜索时间长、速度慢等特点,改进的蚁群算法能有效改善这些问题。首先,基于区域划分思想,将中低压配电网分为中压、低压配电网进行故障筛选,分别形成稀疏矩阵,以此完成对蚂蚁行走路线的预分解,降低解空间。然后,进一步利用聚类的思想对故障点进行深度分解,求解全局最优路径,提高寻优概率。并从初始化信息素稀疏矩阵及启发因子改进着手,引导算法跳出局部最优。此外,从工程应用角度,设计了故障定位与用电信息采集等各相关系统间的业务关系框架。试验结果验证了研究方法可极大提升停电事件统计的及时性和准确性。

布鲁氏菌噬菌体国家参考品的研制

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的一类人畜共患疾病。我国现人用布病疫苗为皮上划痕人用布鲁氏菌活疫苗。2020版《中国药典》三部收录的皮上划痕人用布鲁氏菌活疫苗鉴别试验采用噬菌体裂解方法,所用噬菌体为布鲁氏菌Tb噬菌体[1]。但目前缺少效价高、稳定性好的布鲁氏菌Tb噬菌体参考品,影响布鲁氏菌活疫苗鉴别试验结果判定。中国食品药品检定研究院在已完成鼠疫噬菌体和炭疽噬菌体国家参考品研制的基础上[2-3],建立了效价高且稳定性良好的布鲁氏菌Tb噬菌体参考品,为布鲁氏菌活疫苗的鉴别试验提供保障。

经皮电刺激干预联合多维康复护理对肺癌化疗患者肺功能康复及胃肠道反应的影响

目的探讨经皮电刺激干预联合多维康复护理对肺癌化疗患者肺功能康复及胃肠道反应的影响。方法选择我院2016年5月至2018年5月收治的肺癌化疗患者80例为研究对象,按入院顺序将其等分为对照组和观察组,对照组采用常规护理,观察组采用经皮电刺激干预联合多维康复护理。比较两组患者肺功能康复效果及胃肠道反应状况。结果观察组恶心、呕吐、腹痛、腹泻发生率低于对照组(P<0.05);观察组第1秒用力呼气容积、第1秒用力呼气容积占用力肺活量比值、最大自主通气量均高于对照组(P<0.05)。结论经皮电刺激干预联合多维康复护理在肺癌化疗患者中应用能促进肺功能康复,缓解胃肠道反应。