我国不同地区鸡源致病性大肠杆菌分离株的PFGE分子分型

为了解我国鸡源致病性大肠杆菌的分子流行病学状况,利用PFGE分子分型方法,对2017年分离自山东、吉林、新疆、西藏等7个代表性区域的130株大肠杆菌分离株进行了分子分型研究。结果显示:130株大肠杆菌共分为105个带型,其中33株菌株的图谱相似度在90%以上;不同来源菌株的PFGE带型差别较明显,即使是相同来源菌株,PFGE带型差异同样显著,显示了分离株菌株的遗传多样性。本研究为指导我国鸡群大肠杆菌病防控以及鸡源致病性大肠杆菌引发疾病或食品安全突发事件的追踪溯源提供了依据。

弯曲菌宽谱烈性噬菌体生物学特性、全基因组测序分析及初步应用

为探索控制弯曲菌污染的新途径,以弯曲菌NCTC12662为宿主菌,从养殖场鸡粪便中分离纯化得到弯曲菌噬菌体,并对其进行电镜形态特征观察、生物学特性测定与基因组学分析,同时采用棋盘法,测试噬菌体与抗生素的联合应用效果。结果显示,从山东省胶东地区养鸡场粪便中分离到1株噬菌体P-61。透射电镜下显示该噬菌体颗粒具有1个直径约为102.6 nm的二十面体头部和1个长度约为112.9 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;裂解谱为48.48%,裂解效价为5.5×10^(11)pfu/mL,感染复数为0.01;一步生长曲线显示潜伏期为20 min,裂解期约为130 min,裂解量为240 pfu/cell;最适宜生长温度为42℃,pH耐受性较强,在pH 5~9范围内效价较稳定。噬菌体基因组全长为130425 bp,G+C含量为26.13%,共有176个开放阅读框、3个tRNA,软件预测基因组中不含毒力基因和抗生素耐药基因。利用棋盘法测得,当噬菌体为10^(6) pfu/mL时,环丙沙星最低浓度降至1/8 MIC,联合用药组具有明显的联合杀菌效果。综上可知,得到的噬菌体P-61具有效价高、裂解谱宽及对环境适应能力强等生物学特性,且基因组信息清晰,能与抗生素联合应用发挥协同作用,具有消毒、净化等临床应用可能性。本研究为噬菌体制剂的开发利用提供了生物资源。

全基因组测序分析山东省胶东地区禽源弯曲菌基因组特征和耐药性

为了解山东省胶东地区禽源弯曲菌的耐药特征、毒力特征及分型遗传进化关系,对2021-2022年来自胶东地区26个养禽场的31株弯曲菌,采用肉汤稀释法进行抗生素敏感性检测,然后基于全基因组测序结果分析其耐药基因、毒力基因、多位点序列分型,并进行全基因组单核苷酸多态性(wgSNPs)遗传进化分析。结果显示:31株弯曲菌对四环素的耐药率为96.77%,对环丙沙星、萘啶酸的耐药率均为93.55%;31株菌呈现出6种耐药谱,15株菌耐3类及以上药物。基于全基因组测序结果,31株弯曲菌分为20个序列型(ST),其中结肠弯曲菌优势克隆群为CC828,空肠弯曲菌呈现多样性分布;携带喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等多种类型耐药基因,携带已知功能的6类42种毒力基因。经wgSNPs遗传进化分析,结肠弯曲菌优势克隆群CC828分布在3个小分支中,空肠弯曲菌分布在7个小分支中,分布分散。结果表明:胶东地区禽源弯曲菌耐药严重,耐药谱较广,携带的耐药基因与耐药表型有一定关系;携带毒力基因数量较多,结肠弯曲菌有优势克隆群,空肠弯曲菌ST型呈多样性,分离菌株具有较高的遗传多样性。本研究为降低禽源弯曲菌向人类传播的概率,实现“同一健康”提供了技术支撑。

LF精炼炉废钢自动加料系统工程实践

基于对废钢资源高效利用的目的,介绍了某企业开发的LF精炼炉废钢自动上料系统项目,分析了在LF精炼炉添加优质废钢的优势,主要包括可以高效利用废钢资源中的合金元素降低生产成本,提高经济效益;LF精炼炉添加废钢可以调整LF炉钢水重量来稳定连铸生产节奏;同时,对废钢上料系统设备进行了介绍,对钢铁企业开发LF精炼炉高废钢比加料项目提供了一定的参考价值。

Illumination Compensation for Face Recognition Using Only One Image

在脸识别上减少照明的否定影响，我们基于图象建议一个新照明赔偿方法不变的计算。这不变(补偿角度的和， SCA ) 被加二处于合适补偿状态点亮角度计算。SCA 仅仅依靠单身的轻来源和罐头为一个灯光的系统被计算仅仅一次。基于一个人的颅骨的牛肉香肠水平飞机，我们建议人的颅骨结构的一个几何脸模型。根据我们的脸模型的意见，补偿角度为在一样的点亮系统拿的一幅脸图象从 SCA 被计算。与这个补偿角度，为一幅脸图象的照明赔偿被添加剂操作做。试验性的结果在耶鲁 B 脸数据库上验证我们的方法。与 Choi 的方法相比，我们的方法与大灯光的角度在图象上做明显的改进，并且是更柔韧的在水平、垂直的方向点亮变化。

基于电吸附技术的海砂淡化效果试验研究

海砂淡化是有效利用海砂资源的关键,电吸附技术可以有效的吸附溶液中的氯离子。提出了基于电吸附技术的海砂淡化方法,可实现氯离子在阳极表面富集从而实现溶液的淡化。试验分别选取了碳纤维布、泡沫铝和泡沫镍作为电极材料,分析了不同电极材料下电吸附技术的除氯效果。结果表明:利用电吸附技术淡化海砂5次之后,3种电极材料均能使海砂中的氯离子含量降低至标准规范以下;联合泡沫铝和碳纤维布的除氯效果最佳,单独使用泡沫镍作为电极材料时除氯效果优于单独使用碳纤维布电极材料;电吸附法淡化海砂比水洗法淡化海砂,能节约用水65%以上。

生鲜乳中16种致病微生物多重荧光定量PCR集成检测技术的建立与初步应用

为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏感性等,建立了稳定的4组多重集成荧光定量PCR反应体系,并利用人工污染的生鲜乳样品对所建立的方法和传统培养法进行了验证比较。结果显示:各对引物探针对目标菌株均能有效识别并扩增,每组体系中引物探针未发现交叉反应,对其余3组体系的12株非目标菌均未有特异性反应;组内和组间变异系数均低于3%;该方法对布鲁氏菌的最低检出限为10^(2) CFU/mL,对阪崎肠杆菌、志贺菌、沙门菌等7种致病微生物的最低检出限为10^(3) CFU/mL,对蜡样芽胞杆菌、弯曲杆菌、结核分枝杆菌等8种致病微生物的最低检出限为10^(4) CFU/mL;所建方法和传统培养法对人工污染不同致病菌的各25份样品检测结果基本一致。结果表明,本研究建立的多重集成荧光定量PCR方法灵敏度高,特异性及重复性好,可实现对生鲜乳样品中多种致病微生物的快速高效检测,为生鲜乳微生物性风险监测提供了技术支撑。

峡部甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移临床研究

目的:探讨峡部甲状腺乳头状癌(PTCI)中央区淋巴结转移规律及其危险因素研究,为PTCI淋巴结清扫范围提供临床依据。方法:回顾性分析2010年06月至2023年06月在山西医科大学第二医院普外科行甲状腺癌根治术治疗的538例甲状腺乳头状癌(PTC)患者的临床资料,根据肿瘤位置分为PTCI组(n=62例)和单侧腺叶PTC组(n=476例),采用独立样本t检验或χ^(2)检验分析PTCI和单侧腺叶PTC患者的一般资料;进一步通过χ^(2)检验分析PTCI和单侧腺叶PTC患者中央区淋巴结转移的差异;采用多因素Logistic回归分析PTCI双侧中央区淋巴结转移的独立影响因素。利用绘制受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析肿瘤大小在PTCI患者中的双侧中央区淋巴结(bilateral central lymph nodes,BCLN)转移的预测价值。结果:本研究中,PTCI组和单侧腺叶PTC组相比,在肿瘤大小、淋巴结转移、包膜侵犯、多灶性方面两组有统计学差异(P<0.05);在BCLN清扫术中,PTCI组患者双侧中央区淋巴结转移率高于单侧腺叶PTC组,差异有统计学意义(P<0.05),单侧腺叶PTC组患者单侧中央区高于PTCI组,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归结果显示,峡部肿瘤大小为PTCI患者BCLN转移的独立危险因素(P<0.05)。采用ROC分析PTCI肿瘤大小对BCLN转移的预测价值,AUC为0.807(95%CI:0.670~0.944,P<0.05),最佳临界值(Cut-off值)为0.65 cm,敏感度和特异度分别为90.5%和65%。结论:PTCI患者的肿瘤较小、淋巴结转移率高、包膜侵犯率高、多灶性更常见,且更易出现BCLN转移;PTCI肿瘤大小是BCLN转移的独立影响因素;PTCI癌灶≥0.65 cm时,可预测BCLN转移,应行双侧中央区淋巴结清扫。

基于生物信息学方法设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗

为了设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,试验在NCBI网站的Protein数据库中获取OmpC和FliC蛋白的氨基酸序列,采用Expasy服务器分析其理化性质,通过在线工具AllerTopV.2.0和Vexijen分析其抗原性和致敏性,应用NPS~@服务器分析二级结构,应用IEDB在线工具分析OmpC和FliC的B、T细胞表位。选取优势表位设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,对其理化性质、抗原性、致敏性及三级结构进行预测。结果表明:OmpC和FliC均是亲水性蛋白,无致敏性,抗原性较高;OmpC和FliC蛋白均筛选出3个B细胞优势表位,2个细胞毒性T细胞(CTL细胞)优势表位,1个辅助T细胞(Th细胞)优势表位。设计的多表位疫苗为亲水性的稳定蛋白,抗原性预测的分数为1.1422分,且为非致敏原,预测三级结构模型的可信度大。说明鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗对动物无致敏性,且具有良好的抗原性。

沙门菌分子分型技术研究进展

与传统分型技术相比,分子分型技术以其高分辨率、高重复性、标准化等优点,已成为沙门菌致病性、遗传关联性、溯源和传播路径等研究领域的重要工具。目前,沙门菌分子分型技术主要包括三大类,其中基于限制性内切酶的分子分型方法以脉冲场凝胶电泳和扩增片段多态性为主,基于PCR扩增的分子分型方法以肠杆菌基因间重复共有序列PCR和多位点可变串联重复序列为主,基于测序的分子分型方法以多位点序列分型、规律的成簇间隔短回文重复序列和全基因组测序为主。这三大类分子分型技术均具有灵敏度高、重复性好、结果准确等优点,有助于揭示不同沙门菌间的宿主传播关系、地域传播关系。但这些方法也都存在不同程度的应用局限性,在实际应用中可根据实验室条件及研究需求选择其中一种或联合使用多种分型技术,从而达到对沙门菌精准分型的目的。本文对限制性内切酶、PCR扩增以及测序这三大类沙门菌分子分型方法的国内外相关研究成果进行总结归纳,以期为食品中沙门菌监测、风险评估以及溯源和预警提供参考。

产气荚膜梭菌α-毒素基因数字PCR方法的建立及其在标准物质研制方面的应用

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌,α-毒素是其分子生物学检测的主要靶标。试验选取Clper引物及探针建立微滴式数字PCR(droplet digtial PCR,ddPCR)方法,最佳引物浓度0.85μmol/L,探针浓度为0.3μmol/L,退火温度为60℃。利用建立的ddPCR方法检测单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌的DNA,结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性。合成产气荚膜梭菌α-毒素基因,制成DNA标准品,选取3个稀释梯度的标准品进行重复试验,组内和组间变异系数均小于5%,证明该方法具有较好的重复性。采用7个稀释梯度的标准品进行重复检测,计算出该方法的检测限为12.39 copies/μL,定量限为33.97 copies/μL。通过对68份临床样品进行检测,证实该方法可用于临床,且用于检测质粒DNA时无明显的基质效应。应用ddPCR方法对标准品进行均匀性和稳定性检验,并联合9家实验室进行定值,最终获得了国家市场监督管理总局颁发的标准物质证书(GBW(E)091237)。α-毒素基因ddPCR方法的建立和DNA标准物的研制,为产气荚膜梭菌分子生物学检测试剂的标准化奠定了基础。

鸡源沙门菌及其耐药性流行现状与风险评估研究进展

鸡源沙门菌及其耐药性对食品安全和公共卫生安全均具有严重威胁。通过对鸡肉供应链各环节沙门菌的流行和耐药现状以及相关风险评估研究进行综述发现:在肉鸡供应全链条中,屠宰和零售环节的沙门菌分离率显著高于养殖环节;沙门菌耐药性严重,耐药谱广,多重耐药率最高达100%;不同区域和环节的沙门菌流行率、耐药性及耐药谱有差异;鸡源沙门菌的流行风险主要与初始污染水平和交叉污染有关,屠宰过程中杀菌方法、厨房烹饪过程中的温度等也会对其产生影响。目前针对国内肉鸡源沙门菌耐药性相关风险评估的研究较少。今后需要加大从农场到餐桌全链条鸡源沙门菌的监测和风险评估研究力度,基于“同一健康”理念加强对鸡源沙门菌流行及耐药风险干预措施的评估研究。

猪ETECK88ac、K99黏附素蛋白生物信息学分析及多表位疫苗载体构建

由猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备ETEC疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析ETEC K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种同时含有K88ac、K99基因的多表位重组疫苗载体。首先应用ProParam、SOPMA和GOR软件分析K88ac、K99蛋白的理化特性及二级结构,应用IEDB与ABCpred软件预测二者的B细胞抗原表位,应用RANKPEP软件预测Th细胞表位,应用IEDB与NetMHC-4.0软件预测CTL细胞表位;然后将预测的B细胞、Th细胞和CTL细胞抗原表位加上接头序列,按照一定顺序进行组合,分别设计多表位连接多肽Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;最后通过分析抗原性、致敏性,筛选抗原性最强的连接多肽,并对其进行表征。结果显示:共筛选出9个抗原表位,按照不同的排列组合获得了3种连接多肽,其中连接多肽Ⅱ抗原性最强,为0.906 8;应用AllerTOP v. 2.0在线工具对连接多肽Ⅱ进行过敏性预测,发现其没有过敏性;应用ZpGJn4在线工具对连接多肽Ⅱ进行三维建模,发现其结构表位暴露性较好,易与抗体结合,在蛋白分子构象上符合表位设计要求。将该多表位肽的氨基酸序列按照乳酸菌密码子嗜好性反向翻译为核苷酸序列,随后插入pET28a载体中获得了p ET28a-KT质粒。结果表明,构建的连接多肽Ⅱ适合作为多表位疫苗的备选载体蛋白。多表位肽的设计及pET28a-KT质粒的获得为下一步构建表达ETEC多表位抗原的重组乳酸菌提供了技术支撑。

鸡粪肥还田过程中的大肠杆菌耐药性与传播风险

粪肥还田是一种被广泛采用的养殖粪污资源化利用方式。为探讨不同形式的鸡粪肥对农田土壤中菌株耐药性的影响,以及可能的耐药性传播风险,选取露天大田模拟粪肥还田过程,分离新鲜鸡粪和有机肥样品以及施用两种粪肥的土壤样品中的大肠杆菌,利用微量肉汤稀释法检测分离株的耐药性,利用PCR法鉴定分离菌的MLST分型。结果显示:从采集的220份不同样品中共分离鉴定到57株大肠杆菌,鲜鸡粪组大肠杆菌总分离率为49.5%,有机肥组为4.8%。在21株菌株药敏试验中,分离菌株对9类14种抗菌药均有不同程度的耐药性,多重耐药率高达95.2%,大肠杆菌耐药率在土壤中随时间推移总体呈下降趋势。在大肠杆菌中鉴定到33种ST分型,其中ST10为相对优势基因型(9/56),ST10、ST8774、ST8900和ST533为多种样品共有ST型。结果表明,鲜鸡粪组大肠杆菌污染风险高于有机肥组,粪肥中的大肠杆菌及其耐药基因可传播至土壤中,但耐药率会随时间推移而降低。建议对粪肥处理后还田,以降低大肠杆菌污染及耐药性传播风险。

禽源弯曲菌流行现状及其公共卫生风险评估研究进展

随着养禽业发展,禽源弯曲菌对食品安全和人类健康构成了严重威胁。对肉鸡供应链中禽源弯曲菌流行情况及其风险评估研究现状综述发现:不同地区、不同环节的弯曲菌污染情况差异较大,其中养殖环节的检出率高于屠宰和零售环节;国内外不同环节的禽源弯曲菌流行率相差较大,其中国内养殖环节检出率较高,而国外零售环节检出率较高;结肠弯曲菌检出率逐步超过空肠弯曲菌,成为优势菌株。产品生产加工、运输和处理过程中造成的交叉污染和二次污染是导致禽源弯曲菌流行风险增加的关键因素。目前,国内对于弯曲菌风险评估的研究仍停留在单一环节,而对肉鸡全链条风险评估研究较少,需完善相关数据,开展基于“同一健康”的“动物-环境-人”共同健康风险评估。本文对禽源弯曲菌在家禽生产供应链中的污染情况、影响因素以及风险评估研究进行梳理总结,找出了我国禽源弯曲菌污染的关键控制点以及风险评估中的不足,以期为更有效实现“同一健康”提供参考。

腹腔镜治疗未成年人非寄生虫性脾囊肿的手术方式

目的 探讨如何选择腹腔镜治疗未成年人非寄生虫性脾囊肿的手术方式及其优缺点。方法 收集2012年7月至2023年7月郑州大学第一附属医院15例行腹腔镜脾囊肿手术的患者临床资料。统计分析腹腔镜下脾脏切除术(LTS),腹腔镜下脾脏部分切除术(LPS),腹腔镜下脾囊肿去顶减压毁底术(LTDSC)患者的年龄、囊肿位置及大小、手术时间、术中出血量、病理结果、术后血小板计数、腹腔引流管留置时间、术后住院时间、术后并发症、出院后影像学随访结果等相关指标。结果 LTS 6例,LPS 4例,LTDSC 5例。LPS中1例因术中损伤脾门血管出血较多,手术方式转为LTS。LPS和LTS中均有1例因术中出血较多,给予输注红细胞悬液1个单位。术后病理结果:脾囊肿13例,囊性畸胎瘤2例。LPS中1例患者术后腹腔出血,给予止血药物应用后症状缓解。LTS中4例患者术后出现血小板骤升,给予口服双嘧达莫片预防血栓形成,1个月后血小板降至正常。LTS中1例患者术后脐部切口感染,给予抗感染、清洁换药后好转。术后复发2例,时间为术后2个月和4 a,均为LTDSC,术后病理结果为脾囊肿,再次行LPS。结论 LPS治疗未成年人脾囊肿的术后并发症和复发率低,囊肿位于脾门处的保脾手术可选择LTDSC,对于多发囊肿及囊肿合并感染的患者可选择LTS。

液相微萃取技术在烟草分析中的应用进展

利用快速高效的样品前处理方法进行烟草成分分析可以减少烟草中基质对分析过程的影响。液相微萃取技术是一种简单、快捷、环保的样品前处理技术。本文介绍了液相微萃取技术的原理,分析了影响萃取效率的因素,总结了液相微萃取技术在烟草分析中的应用进展。针对液相微萃取技术在烟草样品前处理中存在的不足,对其应用前景进行了展望。

面愈贴促进Balb/c小鼠急性面神经损伤后神经功能恢复的作用机制

目的 研究面愈贴促进急性面神经损伤神经功能恢复的作用和可能的机制。方法 随机将120只无特定病原体(SPF)雄性Balb/c小鼠分为假手术组(Sham组,n=40)、模型组(Model组,n=40)和治疗组(M+MYT组,n=40)。模型组和M+MYT组小鼠压榨面神经主干建立急性面神经损伤模型。造模成功后,M+MYT组小鼠给予面愈贴贴敷治疗24 h, Sham组和Model组不做处理。各组每24 h进行面神经功能评分。术后第9天采集脑干面神经核、面神经主干组织和眼球静脉血样本;苏木精-伊红(HE)染色和透射电子显微镜观察面神经主干和面神经核神经元的形态变化;免疫荧光和蛋白质免疫印迹分别检测小鼠面神经核单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(ET-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清MCP-1、TNF-α、iNOS、eNOS、ET-1和VEGF表达;硝酸还原法检测血清中一氧化氮(NO)浓度。结果 术后第9天,M+MYT组小鼠面神经功能评分低于Model组(P<0.05);HE染色和透射电子显微镜显示,M+MYT组面神经核神经元和神经纤维的损伤较Model组明显改善;免疫荧光、蛋白质免疫印迹和ELISA检测显示,M+MYT组MCP-1、TNF-α、iNOS、ET-1和VEGF表达显著低于Model组(P<0.05),而eNOS表达高于Model组(P<0.05);硝酸还原法显示,NO浓度以M+MYT组最高,Sham组最低(P<0.01)。结论 面愈贴可降低急性面神经损伤后MCP-1、TNF-α、iNOS、ET-1及VEGF表达,增强eNOS和NO表达,有效控制炎症,保护微血管内皮功能,降低血管通透性,促进神经功能恢复。

人工+智能深度改善患者就医体验的探索与实践

随着国家卫生健康事业高质量发展的不断推进,人民群众对卫生健康服务的高品质需求越来越强烈,要求医疗机构运用新技术、新理念,不断调整、创新服务模式。本文旨在通过深入调研分析和实践探索,建立并不断完善医患双方沟通的渠道和媒介,从患者实际需求出发,以人工+智能的新模式深度服务患者,灵活有效地解决群众就医难题,在提升医院满意度、树立医院良好品牌形象的同时,坚持“以患者为中心”,不断改善就医感受提升患者就医体验,增强群众就医的获得感、安全感和幸福感。

面向智能可穿戴设备的系统风险评估分析

现有的智能可穿戴设备普遍存在较多脆弱点,需要通过风险评估来科学判断其所面临的风险。当前智能可穿戴设备的安全风险评估方法多基于零散的脆弱点,没有充分考虑可穿戴设备应用场景的体系化特征,无法从整体上评估安全风险。因此,文章提出一种基于分层攻击路径图的可穿戴设备风险评估方法,该方法对可穿戴设备的脆弱性进行分类,绘制出多层脆弱性关系图,并在图中添加系统面临的直接威胁与数据资产目标,合并计算从直接威胁、外部脆弱性层、间接威胁、内部脆弱性层到攻击目标的攻击路径,进行风险评估。与传统方法相比,文章所提方法在风险评估过程中充分考虑了系统架构的特点,可以更方便、准确地评估风险,且有助于发现系统安全的瓶颈,并评估应对措施的效果。