李铁教授治疗不寐症学术思想与临床经验

李铁教授对不寐症提出“四型分治”理论进行辨证施治。本文系统总结李铁教授治疗不寐症的中医理论体系,梳理其学术思想,并对其临床经验进行了总结。

绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

C-TIRADS及BRAF^(V600E)基因检测对细针穿刺细胞学难以定性的甲状腺结节的诊断价值

目的探讨中国版甲状腺影像数据与报告系统(C-TIRADS)、BRAF^(V600E)基因检测及二者联合对细针穿刺细胞学难以定性的甲状腺结节的诊断价值。方法纳入我院2020年1月—2021年4月的甲状腺手术患者53例行回顾性分析,术前完成超声、细针穿刺抽吸及BRAF^(V600E)基因检测,选取细针穿刺细胞学难以定性的患者作为研究对象,53例患者共62个结节。以手术病理结果作为金标准,比较C-TIRADS、BRAF^(V600E)基因检测及二者联合诊断对甲状腺结节的诊断效能。结果C-TIRADS诊断甲状腺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确性分别为92.50%、50.00%、77.08%、78.57%、77.42%。BRAF^(V600E)基因诊断甲状腺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确性分别为55.00%、100.00%、100.00%、55.00%、70.97%。C-TIRADS联合BRAF^(V600E)基因诊断甲状腺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确性分别为95.00%、50.00%、77.55%、84.62%、79.03%。C-TIRADS及联合诊断对甲状腺癌诊断的敏感性高于BRAF^(V600E)基因检测(P<0.001),BRAF^(V600E)基因检测特异性及阳性预测值高于C-TIRADS及联合诊断(P<0.05)。C-TIRADS、BRAF^(V600E)基因检测及联合诊断对甲状腺癌诊断的阴性预测值和准确性差异无统计学意义(P>0.05)。结论C-TIRADS及BRAF^(V600E)基因检测对于细胞学难以定性的甲状腺结节均有良好的诊断效能,术前联合应用可以更好地评估甲状腺结节。

热模锻压力机切边工位压紧缸液压回路问题分析处理与方案优化

热模锻压力机切边工位与模锻工位集成在一起可以提高生产效率,但是切边压紧缸会面临高温高速的恶劣工况。通过分析切边压紧缸管路油液泄漏原因,针对压紧缸高温环境和高速工况,提出了解决措施和系统优化方案。

山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的克隆及序列分析

为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成功构建原核表达载体PET 42b-gtpv-036,测序结果显示036基因大小为285 bp,与山羊痘gtpvIsolateIndia等参考株系同源性为97.9%~100%,遗传进化树表明其与gtpv处于同一分支,亲源关系最近,测序比对发现其基因有2个碱基发生了突变,推测氨基酸序列:从第37位和95位异亮氨酸密码子是“ATA”分别突变成异亮氨酸氨酸“ATT”和天冬氨酸氨酸“CTA”;预测山羊痘病036蛋白亚细胞定位在细胞质;蛋白信号肽的剪切位点位于第23和24号氨基酸之间;蛋白磷酸化位点有10个;蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,其次β-折叠,三级结构以α-螺旋为主,推测山羊痘病gtpv-036蛋白功能可能是巯基氧化酶。这为制备山羊痘病毒疫苗研究和为研发新型药物提供理论基础。

攻癌固真汤联合吉非替尼治疗肺癌气虚血瘀证疗效及对患者血流状态的影响

目的:分析攻癌固真汤治疗肺癌气虚血瘀证治疗效果及对患者生活质量、血流状态的影响。方法:纳入肺癌气虚血瘀证患者127例,随机分为观察组(n=75)和对照组(n=52)。对照组给予吉非替尼口服治疗,观察组在对照组基础上联合攻癌固真汤治疗。观察两组患者的治疗效果、生活质量以及血液流变学包括纤维蛋白原、全血低切黏度、全血高切黏度、红细胞聚集指数及血浆黏度等变化。结果:对照组临床总有效率为67.31%,低于观察组的89.33%,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组治疗后卡氏评分均增加,且观察组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,两组各项血液流变学指标明显降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。对照组不良反应发生率为19.23%,观察组为18.67%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:攻癌固真汤联合吉非替尼治疗肺癌气虚血瘀证疗效较好,可有效提高患者生活质量,改善血流状态,且不良反应较少。

术前超声引导注射与术中注射纳米碳在甲状腺乳头状癌淋巴结清扫中的应用效果对比

目的:对比术前超声引导注射与术中注射纳米碳在甲状腺乳头状癌淋巴结清扫中的淋巴示踪效果。方法:回顾性分析我院行甲状腺乳头状癌手术162例患者的临床资料,其中术前超声引导注射纳米碳组59例,术中注射纳米碳组103例。分析两组患者淋巴结清扫数目和转移淋巴结的检出数目。结果:术前超声引导注射纳米碳组平均淋巴结清扫数、转移淋巴结检出数、<5 mm淋巴结清扫数、<5 mm转移淋巴结检出数、>5 mm淋巴结清扫数、>5 mm转移淋巴结检出数、中央区淋巴结清扫数、中央区转移淋巴结检出数、侧颈区淋巴结清扫数、侧颈区转移淋巴结检出数均明显高于术中注射纳米碳组(P<0.05和P<0.001)。结论:术前超声引导纳米碳注射较术中注射有更好的淋巴结清扫率。

李铁教授治疗出血性中风经验举隅

总结李铁教授诊治急性出血性中风的经验,对出血性中风的治疗突破了出血性中风单一止血和过份依赖脱水剂的束缚,提出“阳明腑热、痰瘀胶结、湿热瘀毒侵袭脑髓,神机化灭”病机观,创立“清泻腑热,化治痰瘀,养阴解毒”治疗原则,弥补了传统芳香开窍醒神法之不足,守住经方以《伤寒论》中大承气汤、《奇效良方》中的涤痰汤为主,辨证施治、注意因人制宜,随症加减。以患者为中心,辩证施治,才能显著提高出血性中风病人的临床总体疗效,促进患者神经功能恢复,改善患者的临床症状。

Fractal-like adsorption kinetics of Pb^(2+) in rocks

The adsorption kinetics of Pb2+ in rocks has been studied using ion selective electrodes and atomic absorption spectrophotometer. The results showed that the adsorption process is a fractal-like reaction. The adsorption rate was relatively high before 30 minutes, and then dropped. The saturated adsorption capacity (a) of Pb2+ and kinetic parameters (b, α , D and k) increased with increasing initial concentrations of Pb2+. These parameters (except a) decreased while Na+ was present in the solution. Furthermore, the smaller the rocks were in grain size, the bigger these kinetic parameters would be, though the parameter a was almost constant.

不同聚桂醇硬化方法治疗甲状腺囊性肿块疗效对比

目的对比超声引导下两种不同聚桂醇硬化方法治疗甲状腺囊性肿块的临床疗效。方法60例患者根据聚桂醇一次注入(n=34)及聚桂醇反复抽吸(n=26)分组,根据治疗后肿块大小改变比较评估疗效、穿刺异常情况及不良反应。结果一次注入组与反复抽吸组的年龄、性别、术前囊肿体积、囊液性质组成、介入操作时间及最终囊肿体积缩小率的组间差异均无明显统计学意义(均P>0.05),但反复抽吸组对甲状腺囊性肿块硬化的总有效率(96.2%)显著高于一次注入组(76.5%),且其差异有统计学意义(P=0.019)。反复抽吸组抽出的囊液量和术后随访囊肿体积较一次注入组显著增加(P=0.025和0.013),但其针尖脱出的穿刺异常情况及不良反应发生率要显著高于一次注入组(P=0.018)。结论超声引导下介入联合聚桂醇反复抽吸硬化是治疗甲状腺囊性肿块的微创、安全、疗效确切的手段。

Fractal kinetic characteristics for dissolving and leaching processes of strontium residue

The pore structural characteristics of strontium residue were studied with the N2 adsorption method(ASAP2010).The kinetic properties concerning dissolving and leaching strontium waste were described by determining the concentrations of Sr2+,Ba2+ and soluble sulphides in solutions.The results showed that the specific surface area and pore volume increased with decreasing granule diameter,and the micropore surface of the residue was fractal.In the dissolving and leaching processes of strontium residue,soluble ion concentrations increased with decreasing granule diameter of the residue,and the reaction dimension was lower than the fractal dimension of pore surface.Sr2+ and soluble sulphide concentrations significantly exceeded the defined standard values,while Ba2+ concentrations did not,either in the dissolving or leaching solutions.In addition,dissolving and leaching reactions selectively occurred on the micropore surface of strontium residue.

桥本甲状腺炎背景与单纯背景甲状腺乳头状癌C-TIRADS及BRAF V600E 基因检测的对比研究

目的:比较桥本甲状腺炎(HT)背景与单纯背景甲状腺乳头状癌(PTC)中国甲状腺影像报告与数据系统(C-TIRADS)及BRAF V600E基因检测的差异。方法:选取2019年12月~2021年5月术前完成超声及BRAF V600E基因检测的PTC手术患者,共165例196个结节,将有HT患者作为研究组,单纯背景作为对照组,对比两组临床特征、C-TIRADS及BRAF V600E基因检测的差异。结果:女性PTC患者合并HT多于男性(91.23%vs.8.77%,P=0.001)。研究组和对照组超声表现为垂直位分别为38(54.29%)、65(51.59%),实性成分分别为70(100.00%)、122(96.83%),极低回声分别为37(52.86%)、65(51.59%),微钙化分别为30(42.86%)、64(50.79%),上述阳性指标两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组和对照组PTC边缘模糊、不规则或向甲状腺外侵犯的个数分别为60(85.71%)、92(73.02%),差异有统计学意义(P=0.041)。研究组和对照组C-TIRADS 4B类及以上分别为70(100.00%)、119(94.44%),两者间差异无统计学意义(P=0.108)。研究组C-TIRADS诊断准确性高于BRAF V600E基因检测(100.00%vs.80.00%,P<0.001),对照组中两种方法差异无统计学意义(94.44%vs.92.06%,P=0.451)。结论:C-TIRADS对HT背景和单纯背景PTC均有较好的诊断准确性,且C-TIRADS对HT背景PTC诊断准确性高于BRAF V600E基因。

山羊痘病毒晚转录因子VLTF-3基因的原核表达及结构预测

研究旨在了解羊痘病毒晚转录因子VLTF-3结构特征和生物学特征。试验采用PCR方法扩增羊痘病毒Thx毒株晚转录因子VLTF-3基因,将其插入质粒PET-42b中建立原核表达载体,经菌液PCR和测序方法鉴定。阳性质粒转入大肠杆菌BL21中,用0.1 mmoL/L的IPTG诱导其表达蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot技术进行蛋白的表达的检测与鉴别。基因检测结果利用DNAMAN、DNAStar和Mega等软件进行生物信息学分析和建立遗传进化树,对其编码的氨基酸序列在线进行二级结构分析和高级结构的预测,并对其信号肽、跨膜特性、亲水性、磷酸化位点和抗原性等生物学特性进行分析。结果显示:试验成功扩增了VLTF-3的基因组,并建立了原核表达载体pET-42b-VLTF-3。测序结果表明,GTPV-VLTF-3基因全长681 bp;与参照株GTPV-Pellor毒株的同源性达99%,保守性较强,编码227aa,与理论相符。遗传进化树分析结果显示,该基因与皮肤疙瘩病遗传距离最近。SDS-PAGE检测结果显示,该蛋白质大量表现在上清中;Western blot结果显示,该蛋白与His标签进行了融合表达。VLTF-3蛋白不具有信号肽,为非分泌型蛋白,共有22个磷酸化位点,α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β转角分别占34.80%、35.68%、22.91%、6.61%,三级结构以α螺旋为主。研究表明,试验成功克隆了晚转录因子VLTF-3,并能够可溶性表达其蛋白,生物分析预测其高级结构α螺旋为主。

Preparation of PZT Thin Films by Magnetron Sputtering With Metal and Metal Oxide Composite Target

This article mainly deals with the preparation and properties of PZTthin films. A new type of Metal-Me tal Oxide composite target was developed. Relating factors have been discussed. The electrical and optical properties of PZT thin films have also been studied.