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猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究 被引量:1
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作者 卓娜 朱忠武 +7 位作者 李静 胡世享 王建昌 林华 陈朝林 韩佃刚 艾军 陈培富 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1959-1970,共12页
【目的】分析猪源戊型肝炎病毒(Swine hepatitis E virus,sHEV)4型ORF2蛋白的结构和功能,筛选具有保护性抗原的基因片段并表达蛋白,为研究其作为潜在保护性抗原提供候选蛋白。【方法】对sHEV 4型ORF2蛋白进行生物信息学分析,选取具有潜... 【目的】分析猪源戊型肝炎病毒(Swine hepatitis E virus,sHEV)4型ORF2蛋白的结构和功能,筛选具有保护性抗原的基因片段并表达蛋白,为研究其作为潜在保护性抗原提供候选蛋白。【方法】对sHEV 4型ORF2蛋白进行生物信息学分析,选取具有潜在保护性抗原蛋白的基因片段ORF 2(128/140),通过PCR扩增、酶切后克隆至昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞,通过Western blotting鉴定分析表达蛋白p128/p140。【结果】生物信息学分析显示,sHEV 4型ORF2蛋白存在2个稳定蛋白:p128和p140,分别含有496和476个氨基酸,二者皆为稳定蛋白,无跨膜区,蛋白二级结构主要以无规则卷曲为主。p128蛋白有11个T细胞表位、21个B细胞表位;p140蛋白有14个T细胞表位、18个B细胞表位。成功构建ORF 2(128)、ORF 2(140)2个基因的昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞后经Western blotting检测发现,表达蛋白可被His标签单抗、sHEV抗体阳性血清识别。【结论】试验发现2个sHEV具有潜在保护性抗原的p128和p140蛋白,均可在sf9细胞中表达,且具有免疫活性。结果为进一步研究sHEV ORF2蛋白的功能和新型疫苗的研发提供了材料。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒(sHEV) ORF2蛋白 生物信息学分析 昆虫细胞 表达
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非洲猪瘟病毒数字PCR检测方法的建立及比较 被引量:2
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作者 赵晓娜 谭笑 +8 位作者 朱忠武 周萍 祝贺 陆冠亚 史敏 沈炜 唐泰山 祝长青 孔繁德 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第10期89-94,共6页
为建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的非洲猪瘟病毒(ASFV)检测方法,根据ASFV保守区域设计引物探针,在荧光PCR检测方法的基础上,建立了检测ASFV的微滴数字PCR方法,对其特异性及线性关系进行评估,以阴性样品和低拷贝样品分别测定该... 为建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的非洲猪瘟病毒(ASFV)检测方法,根据ASFV保守区域设计引物探针,在荧光PCR检测方法的基础上,建立了检测ASFV的微滴数字PCR方法,对其特异性及线性关系进行评估,以阴性样品和低拷贝样品分别测定该方法的空白检测限(LOB)和最低检测限(LOD)。结果显示:该方法有较好的线性关系(R2=0.999),与其他6种猪常见病毒及5种动物组织无交叉反应,LOB为1.6 copies/μL,LOD为3 copies/μL。利用建立的数字PCR、C1荧光PCR,以及世界动物卫生组织(WOAH)提供的荧光PCR和常规PCR方法对50份不同来源的样品进行检测,结果表明,建立的ASFV数字PCR检测方法具有高效、特异、灵敏等特点,可用于非洲猪瘟监测和口岸动物疫病防控。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 数字PCR 荧光PCR
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基于RAA-Cas13a的猪瘟病毒检测方法的建立
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作者 薛俊欣 韩伟 +7 位作者 朱忠武 熊炜 黄忠荣 李春阳 赵新宇 孔祥翔 李健 蒋原 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期78-84,共7页
灵敏、准确、多样的检测方法对有效防控猪瘟疫情极其重要,为了丰富现有的猪瘟病毒(CSFV)检测技术,本研究拟建立基于RAA-Cas13a的检测方法。基于全序列比对的基础上分别设计1对引物和两条cr RNA,对不同浓度的阳性质粒、阳性样品和7种其... 灵敏、准确、多样的检测方法对有效防控猪瘟疫情极其重要,为了丰富现有的猪瘟病毒(CSFV)检测技术,本研究拟建立基于RAA-Cas13a的检测方法。基于全序列比对的基础上分别设计1对引物和两条cr RNA,对不同浓度的阳性质粒、阳性样品和7种其他猪病病毒样品进行RAA扩增,扩增产物以Cas13a酶切体系进行荧光检测;结果显示,Cas13a酶切体系可以放大普通RAA的检测信号,RAA-Cas13a可以将检测的灵敏度提高至102copies/μL,不能检出其他7种猪病病毒,检测变异系数小于5%,临床样本检测结果与荧光RT-PCR一致性高。结果表明,本研究建立CSFV的RAA-Cas13a灵敏度较高、特异性和重复性好,具有推广应用的潜力。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 检测 RAA Cas13a
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戊型肝炎病毒食源性传播研究进展
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作者 余姓鸿 安微 +9 位作者 朱忠武 杨苗 张婧 陈世界 严玉宝 王新 周李华 汪琳 史喜菊 林华 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期217-223,共7页
戊型肝炎病毒(HEV)是一种全球性食源性病原体,猪、牛、兔、骆驼等多种动物均可成为其宿主。人类直接接触受HEV感染的猪和其他动物,或食用受污染的食物(未加工或未煮熟)均有感染该病毒的风险。本文综述了HEV的病原学、流行病学特征和在... 戊型肝炎病毒(HEV)是一种全球性食源性病原体,猪、牛、兔、骆驼等多种动物均可成为其宿主。人类直接接触受HEV感染的猪和其他动物,或食用受污染的食物(未加工或未煮熟)均有感染该病毒的风险。本文综述了HEV的病原学、流行病学特征和在动物中的流行情况,以及对肉类及其制品、水生环境、水产品和蔬菜等作物的污染情况,可进一步了解HEV食源性传播风险,为预防和控制戊型肝炎的流行提供科学依据。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 肉类制品 水产品 作物 食源性传播
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A Web-Based CAL System Constructing Tool Using Case-BasedReasoning Approach
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作者 zhu zhongwu Kunio KONDO +1 位作者 Wang Qiao Behrouz H.FAR(Department of information and Computer Sciences, Saitama University, JapanE-mail:{zhu, kondo} @ke.ics. Saitama-u.ac.jp) 《Computer Aided Drafting,Design and Manufacturing》 1999年第2期59-65,共7页
It seems that a big problem in applying the WWW to education fields is that teachershave difficulty directly developing and managing a web-based intelligent CAL (Computer AidedLearning) system, because of the shortage... It seems that a big problem in applying the WWW to education fields is that teachershave difficulty directly developing and managing a web-based intelligent CAL (Computer AidedLearning) system, because of the shortage of funds and teachers who are skilled in both AI (ArtificialIntelligence) and computer information technologies. Focusing on solving the problems we havedeveloped a general-purpose tool called WWW-CALIST (WWW-based Computer Aided LearningIndividual-adaptive System Tool), which helps teachers build up a web-based individualized adaptivecomputer aided learning environment called 'test→search for information using an adaptivekowledge map→adaptive learning'. By using easy-to-use interfaces equipped with the tool, ateacher who knows only the HTML can develop and manage web-based individualized adaptive CAIsystems for various education domains. 展开更多
关键词 TOOL Case CAL A Web-Based CAL System Constructing Tool Using Case-BasedReasoning Approach
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