丙泊酚调控miR-133a/AQP1表达改善H/R心肌细胞损伤

目的探讨丙泊酚调控miR-133a/聚合酶链反应(AQP)1表达对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将体外培养的H9c2细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(行H/R处理)、H/R+丙泊酚组(在H/R处理前给予25μmol/L丙泊酚预处理),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测H9c2细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测H9c2细胞上清液中LDH释放量,流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3试剂盒检测H9c2细胞的Caspase-3活性,实时荧光定量水通道蛋白(PCR)检测H9c2细胞中miR-133a的表达水平,Western印迹检测H9c2细胞中AQP1蛋白表达;转染miR-133a inhibitor后,观察miR-133a低表达对丙泊酚保护H/R诱导的H9c2细胞损伤及AQP1蛋白表达的影响。采用双荧光素酶报告基因验证miR-133a与AQP1的靶向关系。结果与对照组比较,H/R处理可引起H9c2细胞损伤,表现为H9c2细胞存活率和细胞中miR-133a的表达水平明显降低,且细胞上清液中LDH释放量、细胞凋亡率和Caspase-3活性明显升高(均P<0.05);与H/R组比较,丙泊酚处理后H/R诱导的H9c2细胞损伤明显改善(P<0.05)。转染miR-133a inhibitor成功下调miR-133a表达后,丙泊酚对H/R诱导的H9c2细胞损伤的改善作用及对H9c2细胞中AQP1蛋白表达的抑制作用明显减弱(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实AQP1是miR-133a的靶基因。结论丙泊酚可通过调控miR-133a/AQP1表达保护H/R诱导的H9c2细胞损伤。