软骨终板干细胞外泌体活化巨噬细胞自噬抑制软骨终板炎的研究

目的探讨软骨终板干细胞外泌体通过调控巨噬细胞进而抑制软骨终板炎的机制。方法采用免疫组化检测炎症因子和巨噬细胞在不同分级分期退变的软骨终板组织中的表达和浸润,NTA(nanoparticle tracking analysis)和透射电镜鉴定外泌体,外泌体质谱检测和KEGG富集分析预测相关信号通路,Western blotting和免疫荧光检测巨噬细胞中自噬因子LC3A/B和炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的蛋白水平。结果在临床标本中,软骨终板的退变程度与巨噬细胞浸润数量IL-1β水平均正相关;40μg/ml软骨终板干细胞外泌体可有效活化巨噬细胞自噬,使P62表达降低,LC3B表达增加;自噬激动剂Rapamycin(20μmol/ml)则降低了TBHP诱导巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-1β的水平。结论软骨终板干细胞外泌体通过活化巨噬细胞自噬,降低其炎症因子表达,延缓了软骨终板炎的进程。

肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达及免疫保护性研究

目的利用基因工程技术获取原核表达的肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)蛋白并初步研究其对小鼠的免疫保护性。方法根据基因库中psaA基因序列设计合成特异性引物,从临床分离到的肺炎链球菌中提取DNA,PCR技术扩增目的基因psaA,克隆后构建原核表达载体PET-32a(+)/psaA,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,获得重组蛋白,并通过Western-blot鉴定其免疫活性。将重组蛋白免疫小鼠,观察对肺炎链球菌感染动物的保护作用。结果经酶切及测序鉴定,克隆出870bp的目的基因,DNA序列与Gen-Bank中的相应数据符合率为100%;成功构建出原核表达载体pET-32a/psaA;经IPTG诱导,表达出了约57kD左右的融合蛋白,与预期大小相符,并且具有抗体结合活性;重组PsaA蛋白对肺炎链球菌感染小鼠具有一定保护作用。结论在原核细胞中成功表达出PsaA蛋白,能在一定程度上抵抗肺炎链球菌感染,为基于黏附素的新型疫苗的研究提供线索。

赖氨酸甲基转移酶SETD7在小鼠急性肾损伤中的作用

目的观察赖氨酸甲基转移酶SETD7在小鼠急性肾损伤中的作用,并探讨有关机制。方法雄性C57BL/6小鼠24只,周龄8~10周,体重20~30 g。经随机数字表法,把实验动物(小鼠)归入下述4组(n=6):对照组(CON组)、DMSO+对照组(DMSO-CON组)、AKI组(FA-AKI组)、SETD7抑制剂+AKI组(PFI-2-AKI组)。FA-AKI组采用腹腔注射叶酸,制作叶酸诱导的急性肾损伤模型。在注射叶酸前1 h,PFI-2-AKI组腹腔注射PFI-2,DMSO-CON组腹腔注射0.1%DMSO 0.2 mL。3 d后对外周血样进行采集,对血清BUN以及Cr进行测定;借助HE与PAS染色法,对肾组织病理学形态进行测定,并评估肾小管损伤程度;借助免疫组织化学(IHC),对肾组织MPO^(+)细胞、F4/80^(+)细胞、CD3^(+)细胞进行测定;借助RT-PCR,对肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-1β与IL-6四者mRNA表达进行测定。结果与CON组比较,FA-AKI组血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)浓度升高,肾小管损伤评分增加,肾组织MPO^(+)细胞、F4/80^(+)细胞、CD3^(+)细胞数增加,TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA表达上调(P<0.05);与FA-AKI组比较,PFI-2-AKI组血清BUN和Cr浓度降低,肾小管损伤评分和肾组织MPO^(+)细胞、F4/80^(+)细胞、CD3^(+)细胞数量降低,TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA表达下调(P<0.05)。DMSO-CON组与CON组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论赖氨酸甲基转移酶SETD7通过调控炎症反应促进小鼠急性肾损伤。

Th1/Th2促进早发性重度子痫前期胎盘滋养细胞焦亡

目的研究Th1/Th2对早发性重度子痫前期(early-onset severe preeclampsia,EOSP)胎盘滋养细胞焦亡的影响。方法收集2018年6月至2019年12月本院妇产科确诊为EOSP的55例临床资料为子痫前期组,选取同期本院产检正常孕妇30例为正常组。应用流式细胞仪检测各组孕妇静脉血中Th1和Th2细胞的比例,应用ELISA检测血清中细胞焦亡相关因子IL-1β、IL-18的含量、应用TUNEL染色观察胎盘组织焦亡的情况;应用免疫荧光染色观察胎盘组织特异性切割关键焦亡底物蛋白消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)的表达;应用Western blot检测Caspase-1、NLRP3、接头蛋白(ASC)、GSDMD的蛋白表达。结果流式结果显示,子痫前期组Th1/Th2细胞的比例与正常组相比较明显升高;ELISA结果显示,子痫前期组血清中细胞焦亡相关因子IL-1β、IL-18的含量明显升高;TUNEL染色结果显示,子痫前期组可见大量的类似凋亡细胞,明显多于正常组;免疫荧光染色GSDMD发现,子痫前期组的表达量明显多于对照组;Western blot结果显示,Caspase-1、NLRP3、ASC、GSDMD的蛋白表达明显高于正常组。结论早发性重度子痫前期时,Th1/Th2的比例增高促进了胎盘滋养细胞发生细胞焦亡。

纳赛尔与北也门内战

1962年9月,也门"自由军官组织"发动政变,推翻伊玛目专政统治,而不甘心退出历史舞台的君主派反扑,也门内战爆发。也门内战的发生及进程与埃及有直接的联系。在内战中,埃及积极参与并给予革命党政治及军事上的支持,并派军队保卫新生也门政权。此外,苏联、沙特、美国相继卷入这场战争,小小的也门成为各国及势力集团角逐的场所。文章主要探讨埃及在也门战争中与北也门政府的关系和两者之间的分歧。

胶体金免疫层析试纸条快速检测玉米细菌性枯萎病菌

本文采用胶体金免疫层析技术成功建立了玉米细菌性枯萎病菌试纸条快速检测法。条件优化后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测,方法的检测限为106cfu/mL,其灵敏度与双抗夹心ELISA检测方法相当;交叉试验结果表明,该试纸条对玉米细菌性枯萎病菌有良好的特异性。本方法可作为玉米细菌性枯萎病菌日常监测的现场筛查手段,具有简便、快速、成本低廉、便于普及等优点,对保障我国农产品安全具有重要的现实意义。

上海推进城市精细化管理调研报告

上海作为超大型城市不同于一般城市,推进城市精细化管理的形势更复杂、变量更多、难度更大。上海要立足超大城市实际,把深入推进城市精细化管理作为建设全球城市的重要抓手,以精准适切的法规标准为依据、以智慧泛在的信息技术为手段、以跨界多元的协调共治为支撑,以持续推进的补短板行动为突破,让城市更有序、更安全、更干净。

TLR7/8激动剂R848体外诱导记忆B细胞分化抗原特异性浆细胞的方法研究

目的为了从PBMCs获得病原体特异性浆细胞,我们建立了TLR7/8激动剂R848体外诱导记忆B淋巴细胞分化浆细胞的方法。方法使用TLR7/8激动剂R848联合细胞因子组合,诱导接种乙肝疫苗(3年及以上)的健康志愿者来源的PBMCs,进行体外活化和分化浆细胞。分别利用ELISA和ELISPOT检测培养液上清中总IgG、HBsAg特异性IgG以及总抗体分泌细胞(ASCs)和HBsAg抗原特异性ASCs。结果成功建立R848体外诱导PBMCs中记忆B淋巴细胞分化浆细胞的方法。R848(使用质量浓度在1~2.5μg/ml)仅与IL-2联合使用,最早在第5天即可检测到特异性ASCs。结论通过该方法可以从患者恢复期少量(仅需5~10 ml)的外周血中获得抗原特异性抗体分泌细胞用于分析和分选,为中和抗体的制备提供方法。

难忘的生死考验岁月——亲历也门萨那保卫战(下)

奉命参加和解仪式归途迷路幸遇救兵 也门共和力量经过一年多的浴血奋战，在军事上取得了萨那保卫战的胜利。此后，共和与王室双方开始了政治谈判。经沙特调解，也门共和政权同王室势力于1970年5月达成协议，结束内战。

涎腺腺样囊性癌中NOS和VEGF的表达与血管生成及临床病理因素的关系

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在涎腺腺样囊性癌(salivaryadenoid cystic carcinoma,SACC)中表达的相关性;探讨三者与SACC血管生成和临床病理特征的关系;研究一氧化氮(nitric oxide,NO)和VEGF的相互作用及NO在VEGF促肿瘤生长中的作用机制。方法:应用免疫组织化学方法检测32例SACC手术切除标本VEGF、iNOS和eNOS的表达,CD34血管内皮细胞特异性染色计数肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)。结果:①20例SACC组织表达VEGF,22例表达iNOS,25例表达eNOS;②VEGF与iNOS的表达正相关,与eNOS的表达无相关;③VEGF、iNOS的表达与涎腺腺样囊性癌MVD呈正相关,eNOS的表达与涎腺腺样囊性癌MVD的差异无显著性意义;④VEGF的表达与SACC病理类型、淋巴结转移、肿瘤部位及临床分期密切相关;iNOS的表达与病理类型、肿瘤部位及临床分期密切相关;与淋巴结转移未见相关。eNOS表达与以上因素均无关。结论:①iNOS对VEGF的生成和发挥作用的过程有重要影响;②MVD随着VEGF和iNOS表达的增强而增加,说明两者对SACC血管生成具有促进作用.

新型冠状病毒潜在抗体依赖增强效应的研究进展

抗体依赖增强(antibody-dependent enhancement,ADE)是关系到病毒疫苗和抗体疗法安全性的重要问题之一。临床试验表明,ADE效应是导致部分病毒疫苗(如登革热疫苗等)研发失败的重要原因。针对非典型肺炎的致病病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome-coronavirus,SARS-CoV)以及其他呼吸道病毒的研究提示,这些病毒刺激产生的抗体可能会通过ADE效应加重疾病症状。基于以上证据,新型冠状病毒SARS-CoV-2的ADE效应成为人们关注的热点问题。现对ADE效应及其关键机制进行介绍,并结合目前已有的实验室数据和临床数据评估和解读SARS-CoV-2引发ADE效应的潜在风险。

流感嗜血杆菌D蛋白作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白结合疫苗蛋白载体的免疫效果评价

目的对流感嗜血杆菌D蛋白(protein D,PD)作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白结合疫苗蛋白载体的免疫效果进行评价。方法采用CDAP活化法,将PD、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌多糖结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,每次加强免疫前及末次免疫后7 d经眼眶采血,分离血清,间接ELISA法检测抗体水平及亚类,同时在末次免疫后7 d取小鼠脾脏,检测细胞免疫水平。结果 PD与A群多糖结合后能增强抗-多糖抗体的IgG水平,第3次免疫后抗体水平达1∶12 800,显著高于单独多糖组(1∶400)(P<0.05);其脾细胞经多糖及多糖蛋白混合物刺激后,IFNγ和IL-4的斑点形成细胞数量与多糖组比较均升高(P<0.05);但Th1/Th2亚群比值与单独多糖组比较并未增高(P>0.05),反而显著低于GAMP-TT组和单独PD组(P<0.05)。结论重组PD与A群多糖结合后能够增强多糖的免疫原性,既可提高体液免疫反应能力,又可激发细胞免疫反应,提示PD具备作为A群脑膜炎奈瑟菌多糖蛋白载体的潜力。

口腔鳞癌中COX-2、VEGF-C的表达及其临床意义

目的:检测口腔鳞癌(OSCC)中COX-2、VEGF-C的表达,以探讨COX-2、VEGF-C与OSCC淋巴转移的关系及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色S-P法检测COX-2、VEGF-C在OSCC中的表达情况。结果:COX-2在OSCC组织中表达明显高于正常口腔黏膜(P<0.01);COX-2在伴淋巴结转移者的阳性表达率明显高于不伴淋巴结转移者(P<0.05)。VEGF-C在OSCC组织中表达明显高于正常口腔黏膜(P<0.01);VEGF-C在伴淋巴结转移者的阳性表达率明显高于不伴淋巴结转移者(P<0.05)。40例OSCC组织中,COX-2与VEGF-C表达共阳性16例(40.0%),表达阴性10例(25.0%),二者在OSCC中的表达成正相关(r=0.517,P<0.01)。结论:COX-2、VEGF-C在OSCC组织中表达明显上调,并与淋巴结转移有关,提示二者有可能在OSCC的生长及转移中起重要作用。COX-2表达上调与VEGF-C表达成正相关,提示二者在OSCC的淋巴管生成及侵袭转移中可能起协同作用。

狂犬病病毒糖蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立可快速检测狂犬病病毒(rabies virus,RabV)糖蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法用抗RabV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测RabV糖蛋白抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性、准确性、板内与板间精密性、灵敏度验证,对不同厂家(毒株分别为aG、PV、CTN、PM)生产的狂犬病疫苗与不同工艺阶段的狂犬病疫苗样品进行适用性检测。结果捕获抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶2 000和1∶4 000,最佳封闭剂为1. 5%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围在0. 003 2~0. 103 1 IU/mL之间,R2> 0. 98;准确性验证的回收率在97. 0%~110. 1%之间;精密性验证的板内变异系数<8. 6%,板间变异系数<13. 9%;检测不同厂家的狂犬病疫苗和不同工艺阶段的疫苗样品呈良好的剂量依赖效应。结论建立了适用于人用狂犬病疫苗糖蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于aG、PV、CTN、PM等不同毒株生产的狂犬病疫苗检测;也可用于病毒收获液、浓缩液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。

新型冠状病毒抗体水平检测方法的比较

目的分析新型冠状病毒抗体水平不同检测方法间的相关性和一致性。方法将重组新型冠状病毒疫苗免疫Wistar大鼠,采用ELISA法检测大鼠血清特异性IgG抗体水平,假病毒中和试验和野病毒中和试验检测大鼠血清中和抗体水平。对不同方法的检测结果进行相关性(Spearman秩相关)和一致性(kappa检验)分析。结果3种方法的检测结果均具有良好的相关性(Spearman rs>0.75,P<0.05)和一致性(kappa>0.75)。结论新型冠状病毒抗体水平3种检测方法结果的相关性和一致性均良好,对疫苗早期研发中免疫效果的评价具有重要指导意义。

PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中的表达及相关性

目的:观察蛋白激酶C-α(protein kinase C-α,PKC-α)和B细胞淋巴瘤因子-2(B Cell Lymphoma/Leukemia-2,BCL-2)在成釉细胞瘤中的表达及其相关性,探讨其与成釉细胞瘤发生和发展的生物学意义。方法:应用免疫组织化学方法检测42例成釉细胞瘤中PKC-α和BCL-2的表达,10例牙源性角化囊肿和10例口腔正常黏膜为对照。结果:PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中的阳性率均高于对照组,且PKC-α和BCL-2的表达呈正相关。结论:PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤中高度表达。PKC-α和BCL-2在成釉细胞瘤的发生、发展及细胞分化与增殖中起着重要作用。

Id1在腺样囊性癌的表达及与肿瘤血管生成相关性研究

目的:研究即分化抑制因子-1(Id1)在腺样囊性癌的表达及其与腺样囊性癌临床病理特征、肿瘤血管生成的关系。方法:免疫组化EnvisionTM法检测46例腺样囊性癌组织和10例正常唾液腺组织Id1的表达,检测CD34的表达,对肿瘤组织微血管密度进行计数。应用SPSS16.0软件对实验数据进行统计学分析。结果:Id1在腺样囊性癌中表达阳性率为65.2%,显著高于正常唾液腺组(P<0.01)。Id1表达与腺样囊性癌病理分型、临床分期、及肿瘤转移显著相关(P<0.05),与患者的性别和年龄无显著性相关(P>0.05)。Id1在腺样囊性癌中的表达与CD34标记的肿瘤微血管密度密切相关。结论:Id1的表达与腺样囊性癌临床病理特征密切相关,Id1可能通过促进腺样囊性癌的血管生成而与肿瘤的发展和转移密切相关。

斯钙素-1改善哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的机制

目的探讨斯钙素-1(STC-1)减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的机制。方法采用腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)与氢氧化铝凝胶[Al(OH)3]的混合物致敏、OVA雾化激发成功诱导构建哮喘小鼠模型。随机将40只雌性C57BL/6J小鼠分为正常对照组、哮喘组、哮喘+低剂量重组人斯钙素-1(rhSTC-1,1.25μg/L)组、哮喘+高剂量rhSTC-1(5.0μg/L)组和哮喘+地塞米松(5 mg/kg)组。收集右肺支气管肺泡灌洗液(BALF)检测炎性细胞分类及计数,左肺进行HE染色和Masson染色观察肺组织病理改变、气道重塑变化,右肺行Western blot、免疫组化检测STC-1、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-p65)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,qPCR检测STC-1、NF-κB p65、α-SMA mRNA表达。结果与正常对照组比较,哮喘组BALF中的白细胞(WBC)总数、嗜酸性粒细胞数(EOS)以及中性粒细胞数(NEU)均升高,肺组织STC-1、NF-κB p65、p-p65、α-SMA蛋白表达升高,STC-1、NF-κB p65、α-SMA mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与哮喘组比较,哮喘+低、高剂量rhSTC-1组和哮喘+地塞米松组BALF白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数降低,肺组织NF-κB p65、p-p65、α-SMA蛋白表达降低,NF-κB p65、α-SMA mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论rhSTC-1可减少哮喘小鼠气道炎症、胶原纤维沉积。STC-1作为一种应激性保护蛋白,起到抗炎作用,STC-1可能通过抑制NF-κB活化减轻气道炎症和气道重塑。