BMP4对人根尖牙乳头干细胞增殖、迁移及矿化的作用机制研究

目的:观察骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic proteins 4,BMP4)对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)增殖、迁移及矿化的影响,并探讨可能机制。方法:取P3代对数期SCAPs,随机分为空白组、NC组、mimics组、mimics+DAPT[神经源性基因Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)/Jagged1信号通路抑制剂]组。空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒BMP4 NC,mimics组转染过表达质粒BMP4 mimics,mimics+DAPT组转染BMP4 mimics并加入DAPT(10μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力;茜素红染色法检测细胞矿化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA表达量;Western blot法检测细胞Notch1、Jagged1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达量。结果:与空白组、NC组比较,mimics组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量升高(P<0.05);与mimics组比较,mimics+DAPT组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值,迁移量,矿化结节面积比,ALP、BSP、OCN mRNA表达量,Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:过表达BMP4可提升SCAPs增殖、迁移能力并促进其矿化,推测其作用机制可能与激活Notch1/Jagged1信号通路有关。

P物质在牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤中的作用和机制研究

目的本研究通过在牙周炎模型小鼠和体外细胞实验中给予NK-1受体拮抗剂阻断P物质(SP),探讨SP在牙周炎诱导全身炎症反应致多脏器功能损伤中的作用。方法通过反复龈沟注射牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)的方式诱导牙周炎小鼠模型。同时给予NK-1受体拮抗剂,观察牙周炎小鼠全身炎症因子分泌及器官功能损伤情况;细胞实验使用LPS和SP分别刺激巨噬细胞,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定上清液中的IL-1β,加入NK-1受体拮抗剂,观察上清液中IL-1β的水平。结果与对照组相比,LPS诱导的牙周炎组龈沟液中、血清中的SP含量均明显升高(P<0.001),同时血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平也较对照组升高(P<0.001)。LPS组的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)轻度升高(P<0.05),肺组织病理学评分有显著性差异(P<0.001)。给予NK-1受体拮抗剂,血清中IL-1β水平较LPS组降低,差异有统计学意义(P<0.05),且小鼠ALT的水平降低,肺组织病理学评分改善。NK-1受体拮抗剂能够部分逆转SP诱导巨噬细胞产生IL-1β的作用,有统计学差异(P<0.001)。结论SP通过与NK-1受体结合参与了牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤。