嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法的建立

文章旨在建立一种针对嗜水气单胞菌的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。研究根据嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因的保守序列,设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物,通过结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)的方法进行反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。实验结果表明,所建立的嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法可在38℃最适温度下30min内无干扰地检测到嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限为10^(3)cfu/mL和100 pg/μL。利用建立的RPA-LFD与普通PCR同时检测杂交鲟鱼处理临床样品的结果表明,两种方法的结果一致。综上所述,通过对RPA反应条件的探索和优化,成功建立了嗜水气单胞菌快速检测方法。该方法操作简便,反应迅速,与普通PCR相比,不需要昂贵的仪器,为未来嗜水气单胞菌细菌性疾病的早期诊断提供了更有效的技术支持。

匀浆法快速提取叶绿素对比试验

通过与试剂盒法、直接浸提法进行比较,分析增加匀浆步骤后浸提液提取叶绿素的效果,并比较了95%乙醇、95%乙醇和80%丙酮、二甲基亚砜和80%丙酮3种常用浸提液在增加匀浆步骤后对油菜、辣椒、棉花、樟子松、番茄、荷兰菊、小叶黄杨、小麦8种常见植物的提取效率和稳定性。结果表明,匀浆浸提法比试剂盒法和直接浸提法两种方法的提取效率更高、更稳定,并适用于多种浸提液加快浸提过程,其中,番茄和油菜在95%乙醇、95%乙醇和80%丙酮匀浆浸提液中都可以在2 h内完成提取,稳定性好,荷兰菊和辣椒在95%乙醇浸提液中匀浆浸提效果最好,2 h内提取完成,小麦、樟子松在95%乙醇和80%丙酮浸提液中匀浆浸提效果最好,棉花和小叶黄杨在加入匀浆后提取效率大幅提高。

医学病毒形态识别中的假象

基于透射电子显微镜负染技术和超薄切片技术的病毒形态识别是病毒鉴定的重要手段,病毒的形态识别在病毒相关的科研工作及重大疫情、生物恐怖事件的病原体鉴定中均发挥重要的作用。但是,无论负染样本中还是超薄切片上有时存在类似病毒结构的假象,往往导致误判。本文对负染样本、超薄切片样本中常见的医学病毒类似结构的假象结构进行列举,包括噬菌体、球形杂质颗粒、线粒体成分、支原体、网格蛋白及非网格蛋白包被囊泡、多泡体、高尔基体运输囊泡、糖原颗粒、微管、染色质周围颗粒、核孔、微绒毛、分泌泡和胶原原纤维等结构,期望为医学病毒形态判定提供一定的思路。

辣椒素和辣椒水提物的抗氧化特性及对人粪便微生物体外培养特性的影响

为了探究辣椒素和辣椒水提物的抗氧化特性及其对肠道微生物的影响,本研究测定了辣椒水提物的主要营养成分,以辣椒素标品为阳性对照,测定了辣椒水提物的抗氧化活性,并以健康大学生粪便为菌源,采用24 h体外厌氧发酵模式探究其对肠道微生物的影响。结果显示,在微辣(0.028 g/L)到特辣(0.112 g/L)范围内,辣椒水提物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基的清除率分别为75.25%、12.87%、19.45%,均低于标准辣椒素。在特辣(0.0924~0.2918 g/L)范围内,辣椒水提物与辣椒素能增加培养体系的短链脂肪酸含量,在培养6 h时,其对乳酸菌、双歧杆菌、梭状芽孢杆菌、肠杆菌和总厌氧菌的生长具有抑制作用,对拟杆菌无明显抑菌效果;培养12 h时,其对肠杆菌的生长具有抑制作用,对其余菌均为促进作用;培养24 h时,其对总厌氧菌、梭状芽孢杆菌、肠杆菌的生长具有抑制作用,对双歧杆菌、乳酸菌、拟杆菌的生长具有促进作用。在培养24 h的发酵体系中益生元指数PI值最大,分别为0.11、0.04;B/E值在培养12 h时最大,分别为1.60、1.61。本研究为辣椒营养价值与保健功能研究提供一定的数据支撑。

流式细胞术检测肉桂活性成分对Tfh细胞的影响

滤泡辅助性T细胞(Follicular helper CD4 T cells,Tfh)是重要的CD4^(+)T淋巴细胞亚群之一,与多种疾病的发生和发展密切相关,其参与疾病发生的机制尚有待深入研究。该研究将分离小鼠脾脏细胞,应用贝克曼Moflo分选系统分选出CD4^(+)T淋巴细胞。使用细胞因子刺激Tfh细胞分化并检测其分化比例,同时采用流式细胞术检测和分析肉桂活性成分对滤泡辅助性T细胞分化的影响。结果表明,贝克曼Moflo XDP分选系统可以显著提高CD4^(+)T淋巴细胞的纯度,且肉桂活性成分可以显著抑制Tfh细胞分化。为新药在Tfh细胞的开发提供一定实验基础,并且为研发肉桂作为新的增强免疫疗效药物提供可靠的实验依据。

花青素定性定量分析方法及其应用的研究进展

花青素作为一种强大的抗氧化剂和天然着色剂,越来越多地被用作食品补充剂和营养产品的成分.广泛的应用增加了研究人员对植物花青素成分及其影响的兴趣.然而花青素颜色易受pH、光、植物激素、转录因子、温度和金属离子的影响.花青素通过羟基化、甲基化、糖基化和酰化进行修饰,为花青素的颜色和稳定性增加了多样性.因此,花青素正确的提取与纯化分析是进一步探索其营养潜力的先决条件.然而,对于花青素的提取、分离和定性定量分析技术在目前文献中的全面综述很少.该文对以往文献中描述的技术进行全面回顾和比较评估,讨论了花青素的保健作用及应用进展,旨在综述迄今为止各种生物学技术定量和定性鉴定花青素的应用进展,以及花青素对于人类健康和福利方面的各种应用,使人们对花青素相关知识有更深的了解.

体内连续进化——从噬菌体到真核基因组的进化故事

进化是生物多样性产生和保留的自然进程。通过对编码蛋白质的基因进行有目的地设计和改造,获得性能更优异的蛋白质用于生产生活,是蛋白质工程的目的所在。为了在实验室中通过定向进化的蛋白质工程模拟自然进化的实现过程,研究人员通过在快速增殖的原核生物和简单的真核生物中引入靶向诱变元件,建立了各种体内连续进化系统。本综述介绍了体内连续进化平台的现状,重点关注噬菌体和酵母中人工进化技术的研究进展,并对其在生物技术领域中的成功应用进行了总结,最后简要展望了体内连续进化这一新兴领域的发展方向。

植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析

多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为多糖的纯化提供了一定的参考。选用了3种较为常见的方法:三氯乙酸法、盐酸法及沙维积法(Sevag法)对植物多糖提取液进行脱蛋白处理。三氯乙酸法、盐酸法及Sevag法的脱蛋白率分别为46.1%、72.5%和42.3%,多糖损失率分别为6.1%、15.1%和14.3%。盐酸法脱蛋白率高,但它的多糖损失率较高;三氯乙酸法较温和,但除蛋白效率不高;Sevag法的脱蛋白效果不及前两种方法。

亲水金和憎水二氧化硅纳米颗粒对葡萄糖生物传感器响应灵敏度的增强作用

用亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒固定葡萄糖氧化酶 (GOD) ,采用聚乙烯醇缩丁醛 (PVB)为辅助固酶膜基质来制备葡萄糖生物传感器 ,并考察了亲水金、憎水二氧化硅纳米颗粒对酶电极电流响应的影响 .实验表明 ,引入纳米粒子可显著增强电极响应灵敏度 .并对两种不同性质纳米颗粒所起作用的可能机理进行讨论 ,从理论和实验上证明了纳米颗粒对固定酶的作用 .为制备有实用价值的葡萄糖生物传感器提供了可供参考的实验和理论依据 .

番茄成熟度与其电学参数关系的研究

以5个成熟度的金棚一号番茄果实为材料,在126 Hz^5 MHz频率范围内,利用平行板电极系统研究了8个电参数与番茄成熟度的关系,从而筛选反映果实成熟度的评价电指标.结果表明:500 kHz^5 MHz是测定番茄果实电指标的最佳频率段;在最佳频率范围内,随着番茄成熟度的增加,果实的复阻抗值逐渐减小,而其相对介电常数值持续增加;在番茄的转色期,其损耗系数具有最大值,而复阻抗相角具有最小值.研究发现,在合适频率下复阻抗和相对介电常数可以作为辨别番茄果实成熟度的合适电参数,而损耗系数和复阻抗相角可以作为辨别其转色期的指标.

建立糖尿病心肌病动物模型方法的实验研究

目的研究建立糖尿病心肌病动物模型的科学、实用的方法。方法应用链脲佐菌素对SD大鼠进行一次性腹腔注射,通过观察大鼠的一般状况、进食量、进水量、尿量、体重的变化,监测血糖、尿糖、心肌酶含量、胰岛素水平、心肌超微结构、心脏大血管内膜情况及心电图情况来评估糖尿病心肌病的发病情况。结果腹腔注射STZ 3周后,模型组大鼠出现病态表现,进食量、饮水量、尿量增加,体重下降。血糖值、尿糖值及肌酸激酶、乳酸脱氢酶值均较对照组大鼠升高。胰岛素水平较对照组明显降低,心肌超微结构符合糖尿病心肌病表现,心脏大血管未见纤维斑块和粥样斑块。结论对SD大鼠进行一次性腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg),大鼠于注射后第3周可出现稳定的糖尿病心肌病状态。这是一种可靠且实用性强的糖尿病心肌病动物模型的制备方法。

胶原蛋白降解物高效液相色谱/质谱联用分析

利用高效液相色谱/质谱联用技术分析了胶原蛋白Ⅱ和Ⅰ经变性和酶解处理得到的多肽混合物,比较研究了两种类型胶原蛋白降解物之间的区别,利用液相色谱质谱连用技术识别出了不同类型胶原蛋白中的特征肽段.胶原蛋白在50℃处理3h可溶解于盐溶液,凝胶过滤分析结果表明,热变性的胶原蛋白分子量在10万以上,因此在热变性过程中胶原蛋白的三螺旋结构被破坏但没有明显的随机降解.利用胰蛋白酶对胶原蛋白进行了酶切处理,在酶用量为2%,pH 8.1～8.2,温度37℃条件下,处理20h后胶原蛋白降解较完全,多肽混合物的平均分子量在1万以下.利用液质联用技术研究Ⅱ型和Ⅰ型胶原蛋白降解物中的多肽,通过多级质谱分析了胶原蛋白降解物多肽的序列.结果表明,不同类型的胶原蛋白酶解后的多肽混合物中存在特定序列的特征肽段,利用特征肽段进行胶原蛋白类型识别是可行的.

水中五氯酚测定方法的研究

目的 建立灵敏、快速的水中五氯酚的测定方法。方法在色谱柱、色谱条件和定量方法等方面对现行的国家标准检测方法进行改进和优化，并对实际水样进行分析。结果建立以毛细管柱替代填充柱，以三溴苯酚（TBP）作为内标物的水中五氯酚的气相色谱分析方法。方法线性范围为0.1～10μg／L，r=0.9999；方法检出限为4．5ng／L；样品加标回收率为90．1％～98．4％，相对标准偏差（RSD）小于4．1％。结论 本法灵敏度高、准确度好，适用于环境水样中五氯酚的痕量分析。

牛肉及其制品中掺入鸡肉、鸭肉和猪肉的多重数字PCR快速检测方法研究

利用微滴式数字PCR,建立针对牛、猪、鸡和鸭肉的多重数字PCR检测技术。结果表明,所选择的4个物种的引物和探针特异性良好,能够快速对样品中是否存在这4种肉类成分做出快速判断。数字PCR分析中,FAM和HEX两个通道的荧光信号能很好地区分,在对9个实际样品的检测中,所在样品的微滴生成数都在10 000以上,满足数字PCR中泊松公式分析的要求,同时9个样品的检测结果与已知信息完全相符。

灵芝菌原生质体融合条件研究

通过化学方法和电融合法对白芝(Ganoderma applanatum,GA)和赤芝(Ganoderma lucidum,GL)两种大型真菌原生质体融合条件进行了研究,实验得出:化学方法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:PEG浓度30%、CaCl20.02mol/L、融合时间30min、温度30℃,融合率可达0.4%;电融合法对灵芝菌原生质体融合的最佳条件:交变电流频率2MHz、电压40V、直流脉冲脉幅10kV/cm、脉宽25μs、直流电压为500V,融合率可达40%。

太白山几类植物群落灌木及草本层的最小取样面积研究

采用2条非饱和与2条饱和曲线方程对太白山7种类型植物群落（Ⅰ.锐齿栎林、Ⅱ.铁橡树林、Ⅲ.红桦林、Ⅳ.巴山冷杉-牛皮桦林、Ⅴ.巴山冷杉林、Ⅵ.太白红杉林和Ⅶ.头花杜鹃-大毛状薹草灌草丛）灌木及草本层拟合的种-面积曲线,计算研究精度要求分别为60%、70%、80%、90%时各群落各层的最小取样面积,并进行分析比较.结果表明,不同群落灌木及草本层最小取样面积均随研究精度增高而增大,群落Ⅰ~Ⅶ灌木层的取样面积分别为96、35、73、63、75、1701、8 m2时,草本层为91、91、57、59、71、657、m2时,可满足精度80%以下的研究要求;灌木层的取样面积为163、62、122、104、120、296、35 m2时,草本层为150、151、109、110、126、1192、9 m2时,可满足精度90%的研究要求.方差分析表明,不同群落灌木及草本层最小取样面积存在差异,有些差异达显著水平（P〈0.05）.因此,在野外调查时应根据研究精度要求和群落类型合理设置最小取样面积.

酶水解分离人胃粘膜上皮细胞

比较了金属螯合剂EDTA-Na2及各种蛋白酶水解分离人胃粘膜上皮细胞的方法.将胃粘膜组织置于不同分离液中,37℃振荡50min,结果显示:胶原蛋白酶、链霉蛋白酶、胰酶、EDTA-Na2单独使用及胰酶与EDTA-Na2联合使用,样本得到的细胞都较少;而胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合使用时,得到的细胞总数、上皮细胞比率及细胞活率都较高.用彗星电泳对胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合作用下的淋巴细胞进行了分析,结果表明,该条件不会对细胞的DNA造成损伤.

木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及SephadexG75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1Cp).以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以ELISA法检测mPEG1Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1Cp进行了结构的测定分析.结果表明:Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1.6倍,同时酶活力保持在36.5%;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1Cp结构有轻度的改变.

血清及脑组织中单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究

目的建立一种快速准确测定大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）和5-羟色胺（5-HT）含量的高效液相色谱-电化学检测方法.方法采用ODS柱,流动相为缓冲液（0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L磷酸氢二钠）：甲醇=85：15的溶液,流速1.0ml/min.结果四种神经递质保留时间的RSD在0.29%～0.67%之间、峰面积RSD在0.09%～0.36%之间,重现性好.4种回收率在85.3%～95.4%之间,检测限NE为0.083ng/ml、E为0.51ng/ml、DA为0.046ng/ml、5-HT为0.078ng/ml,线性范围NE在1.0～100 ng/ml之间、E为5.0～80ng/m之间、DA为1.0～80ng/ml之间、5-HT为1.0～60ng/ml之间,相关系数在0.996～0.999之间.结论该方法为单胺类递质的神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法.

薄层层析-紫外分光光度法测定葡萄果皮中白藜芦醇及白藜芦醇苷

建立了葡萄果皮中反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的薄层层析-紫外分光光度测定法。以甲醇提取目标组分,以高效硅胶GF254为固定相,甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶4∶1)为展开剂,对反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷进行分离纯化,并用紫外分光光度法进行定量,波长为306nm。结果表明,该方法测定反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的线性关系良好,相关系数为0.9997;平均回收率为98.12%、97.23%;方法的精密度较高。并用该方法测定了酿酒红葡萄品种蛇龙珠不同生长时期的反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷含量。