采用PCR技术克隆得到拟南芥类核糖体RNA加工蛋白41(Ribosomal RNA-processing protein 41-LIKE,RRP41L)基因,然后构建其原核表达载体,并对其进行诱导和纯化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明,试验获得了拟南芥RRP41L基因的全长编码序...采用PCR技术克隆得到拟南芥类核糖体RNA加工蛋白41(Ribosomal RNA-processing protein 41-LIKE,RRP41L)基因,然后构建其原核表达载体,并对其进行诱导和纯化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明,试验获得了拟南芥RRP41L基因的全长编码序列(coding sequence,CDS)(771 bp),将其与原核表达载体PGEX4T-1连接构建了原核表达载体PGEX4T-RRP41L,将PGEX4T-RRP41L质粒导入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中,在37℃条件下,用1 mmol·L-1IPTG诱导8 h后体外纯化融合蛋白.SDS-PAGE电泳结果显示,在此诱导条件下,PGEX4T-RRP41L重组质粒可表达出较大量的重组蛋白,蛋白质相对分子质量大小为53.4 k D,除去PGEX4T-1自身表达相对分子质量大小为26.0 k D后,与RRP41L编码的蛋白质相对分子质量约为27.4 k D的大小一致.展开更多
文摘采用PCR技术克隆得到拟南芥类核糖体RNA加工蛋白41(Ribosomal RNA-processing protein 41-LIKE,RRP41L)基因,然后构建其原核表达载体,并对其进行诱导和纯化,以期获得较大量的重组蛋白.结果表明,试验获得了拟南芥RRP41L基因的全长编码序列(coding sequence,CDS)(771 bp),将其与原核表达载体PGEX4T-1连接构建了原核表达载体PGEX4T-RRP41L,将PGEX4T-RRP41L质粒导入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中,在37℃条件下,用1 mmol·L-1IPTG诱导8 h后体外纯化融合蛋白.SDS-PAGE电泳结果显示,在此诱导条件下,PGEX4T-RRP41L重组质粒可表达出较大量的重组蛋白,蛋白质相对分子质量大小为53.4 k D,除去PGEX4T-1自身表达相对分子质量大小为26.0 k D后,与RRP41L编码的蛋白质相对分子质量约为27.4 k D的大小一致.
