PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报...PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报道,为了深入研究PDRG1对NF-κB信号通路的调控机理,构建了稳定干涉PDRG1的HeLa细胞系。选择了基于慢病毒载体pLKO.1的感染体系,该慢病毒体系可以同时感染分裂期与非分裂期的细胞,将目的基因干涉序列稳定整合至靶细胞基因组中;再经过抗生素压力筛选后在短时间内获得稳定干涉目的基因表达的细胞株。设计合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1载体,转染病毒包装细胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa细胞系,进一步经过嘌呤霉素压力筛选成功获得稳定表达PDRG1干涉序列的细胞株。该稳定细胞株的建立为PDRG1的功能研究提供了必要的实验工具。展开更多
目的:构建高表达腺病毒感染的体外三维血管生成模型,为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。方法:制备空载腺病毒和cdc42高表达腺病毒。用空载腺病毒感染人微血管内皮细胞(hum an m icrovascu lar endothelial cell,HMVEC)...目的:构建高表达腺病毒感染的体外三维血管生成模型,为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。方法:制备空载腺病毒和cdc42高表达腺病毒。用空载腺病毒感染人微血管内皮细胞(hum an m icrovascu lar endothelial cell,HMVEC),然后用感染过的HMVEC构建体外血管生成三维模型,同时用未感染的HMVEC构建对照组模型,观察腺病毒感染本身对血管新生模型的生长有无影响。用cdc42高表达腺病毒感染HMVEC并构建体外血管新生模型,对照模型采用空载腺病毒感染的细胞构建,验证由腺病毒介导的基因高表达在模型发展过程中维持的时间。结果:空载腺病毒感染模型的平均出芽长度(average length of sprouts,ALS)在24、48、72 h时与非感染模型相比有显著性差异(P<0.01),在96、120 h时与非感染模型无显著性差异(P>0.01)。cdc42高表达腺病毒感染的模型在模型构建后1周内保持了高表达。结论:成功地使用腺病毒作为载体诱导了某个基因在体外三维血管生成模型中的高表达,为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。展开更多
文摘PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报道,为了深入研究PDRG1对NF-κB信号通路的调控机理,构建了稳定干涉PDRG1的HeLa细胞系。选择了基于慢病毒载体pLKO.1的感染体系,该慢病毒体系可以同时感染分裂期与非分裂期的细胞,将目的基因干涉序列稳定整合至靶细胞基因组中;再经过抗生素压力筛选后在短时间内获得稳定干涉目的基因表达的细胞株。设计合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1载体,转染病毒包装细胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa细胞系,进一步经过嘌呤霉素压力筛选成功获得稳定表达PDRG1干涉序列的细胞株。该稳定细胞株的建立为PDRG1的功能研究提供了必要的实验工具。
文摘目的:构建高表达腺病毒感染的体外三维血管生成模型,为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。方法:制备空载腺病毒和cdc42高表达腺病毒。用空载腺病毒感染人微血管内皮细胞(hum an m icrovascu lar endothelial cell,HMVEC),然后用感染过的HMVEC构建体外血管生成三维模型,同时用未感染的HMVEC构建对照组模型,观察腺病毒感染本身对血管新生模型的生长有无影响。用cdc42高表达腺病毒感染HMVEC并构建体外血管新生模型,对照模型采用空载腺病毒感染的细胞构建,验证由腺病毒介导的基因高表达在模型发展过程中维持的时间。结果:空载腺病毒感染模型的平均出芽长度(average length of sprouts,ALS)在24、48、72 h时与非感染模型相比有显著性差异(P<0.01),在96、120 h时与非感染模型无显著性差异(P>0.01)。cdc42高表达腺病毒感染的模型在模型构建后1周内保持了高表达。结论:成功地使用腺病毒作为载体诱导了某个基因在体外三维血管生成模型中的高表达,为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。