南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质

将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体,并将其电转化入毕赤酵母GS115中。通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子。重组细胞经过120 h培养后,发酵液上清酶活达到13 U/mL。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD,比原始脂肪酶略大。粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后,得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。该酶最适反应温度为75℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性。

藏药大叶小檗和锡金报春的生药学鉴定

采用原植物、性状、显微、薄层鉴定的方法对藏药大叶小檗、锡金报春进行系统的生药学鉴定,为其鉴别及应用提供科学依据。结果表明:通过原植物、性状、显微、薄层色谱图研究能够很好的鉴定原植物。

低温菌穿梭质粒的构建及转化方法研究

由于低温微生物在细胞结构上的特殊性,使得对它们进行遗传操作受到很大的限制.以分离自冻土的低温菌Acinetobactersp.DWC6为宿主菌,构建了一套外源DNA导入系统.通过在质粒pBR322和pUC118中插入一段Acinetobacter属特异性的Ori片段,成功构建了一系列穿梭质粒,并建立了稳定的转化方法,所有重组质粒均可在Escherichia coli和Acinetobactersp.DWC6中正常复制.通过优化转化方法,使质粒在低温菌Acinetobactersp.DWC6中的转化率达3×106转化子/μg DNA.