砷诱发细胞凋亡与大鼠畸胎形成的关系研究

为进一步揭示砷的致畸性、胚胎毒性和作用机制，采用胚胎活体染色和原位ＤＮＡ末端标记等技术探讨了不同剂量砷是否能诱导孕９．５天龄大鼠的胚胎细胞发生凋亡（程序性细胞死亡）及其凋亡与畸胎形成的关系。结果表明随着砷浓度（０、１、４和８ｍｇ／ｋｇ）的增高，畸胎率和死胎率分别由２．６％和０上升到３５．７％和２３．８％，呈明显剂量－反应关系。活体染色发现在胚胎脑、眼、体节、肢芽和腮弓等部位出现大量散在的凋亡细胞，与畸形发生部位相一致。原位ＤＮＡ末端标记进一步证实砷能诱发器官形成期胚胎细胞凋亡，８ｍｇ／ｋｇ砷染毒后，凋亡阳性率高达５５．６％（Ｐ＜０．０５），表明凋亡与畸胎发生关系密切，这是砷致畸作用的重要机制之一。实验结果还发现胚胎细胞坏死亦与畸胎形成有关。

气相色谱/氢火焰检测器检测HL-60细胞DNA中氧化损伤产物8-羟基鸟嘌呤的研究

用0．4mmol／LH2O2处理HL－60细胞株24h，采用气相色谱／氢火焰检测器（GC／FID）检测DNA氧化损伤产物8-羟基鸟嘌呤，并用气相色谱质谱仪选择性离子检测（CGC／MS－SIM）对其进一步鉴定。所用方法的平均回收率为81．7％，RSD小于5％。

细胞色素P450 2C19单碱基突变位点CYP2C19m1的分析

目的:CYP2C19ml是引起CYP2C19酶活性缺陷的主要等位基因,有83％左右的慢代谢者含有CYP2C19ml等位基因,本文试图建立一步PCR测定CYP2C19ml等位基因的方法。方法:根据等位基因特异扩增(ASA)原理设计两对分别特异扩增野生型等位基因和突变型等位基因的引物,建立了一步PCR测定CYP2C19ml等位基因的方法。结果:对39位随机受试者进行了基因分型研究,发现3位CYP2C19ml纯合子、18位CYP2C19ml杂合子,其余18位为野生型纯合子。结论:说明效法能够用于测定CYP2C19ml等住基因,并且证明该法具有简便、快速和污染少的优点。

xylE 转基因小鼠突变检测系统的建立

为了验证ｘｙｌＥ转基因小鼠能否用于体内基因突变检测，首先对从小鼠体内回收目的质粒的影响因素（电压，基因组ＤＮＡ浓度和Ｔ４连接酶浓度）进行了研究，结果发现用ＨｉｎｄⅢ酶切后的０．５μｇ组织ＤＮＡ在４００μＬ反应体系中以０．３ＵＴ４连接酶连接后，以１６ｋＶ，２００Ω，２５μＦ的参数用电穿孔法转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ菌株是回收目的质粒效率最高的方法．在此基础上观察了致突变剂ｎ－甲基－ｎ′－硝基－ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对转基因小鼠（ｉｐ１０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，连续４ｄ）外周血正染红细胞（ＮＣＥ）的微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因的自发和诱发突变率，并对突变的ｘｙｌＥ基因进行序列分析，结果ＭＮＮＧ使外周血ＮＣＥ的微核率从（２．２０±１．４８）‰上升为（６．８０±２．２８）‰（Ｐ＜０．０１），ｘｙｌＥ基因的突变率从小于１／２２８４３增至４／１８６４１，表明ＭＮＮＧ可诱发转基因小鼠ＮＣＥ微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因突变率显著升高．序列分析显示ＭＮＮＧ诱发的ｘｙｌＥ基因突变主要是单碱基缺失．上述结果表明ｘｙｌＥ转基因小鼠是检测体内基因突变的有效模型．

9种新的人类染色体异常核型报告

发现９种新的人类染色体异常核型，分别为：４６，ＸＸ，ｔ（２；１０）（ｑ３３；ｑ１１）；４６，ＸＹ，ｔ（１０；１２）（ｑ２６；ｑ２２）；４６，ＸＹ，ｔ（６；１５）（ｐ２３；ｑ２３）；４６，ＸＹ，ｔ（１；６）（ｐ３６；ｑ２１）；４６，ＸＹ，ｔ（１；１９）（ｐ３２；ｐ１３）；４６，ＸＹ，ｔ（１６；１８）（ｑ２２；ｑ２１）；４６，ＸＹ，ｉｎｖ（１）（ｐ３６ｑ２５）；４６，ＸＹ，ｔ（１３；１７）（ｑ１２；ｑ２５）；４６，ＸＹ，ｔ（１５；２１）（ｑ２６；ｑ１１）。异常核型是导致自然流产和不育的原因。

重铬酸钾对人精子染色体畸变率的影响

本文介绍了人精子经重铬酸钾体外染毒后，与去透明带金黄地鼠卵受精、体外培养制备人精子染色体进行核型分析。结果表明各染毒组（１０Ｙｍｇ／Ｌ、２０ｍｇ／Ｌ、４０ｍｇ／Ｌ）染色体断裂均数分别为０．１３２０、０．２５００、０．３６７６，与阴性对照组比较，中、高剂量组均具有显著差异（Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１）．而且具有剂量效应关系。

5──溴脱氧尿嘧啶核苷标记法检测哺乳动物体细胞染色体异常分离的研究

通过分析５一溴脱氧尿嘧啶核苷（５－ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ）掺入后的第２周期细胞染色体，同步评估了受试化合物秋水仙素（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，ＣＯＬ）及昆明山海棠水抽提物（Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｕｉｍｈｙｐｏｇｌａｕｃｕｍ（Ｌｅｕｌ）Ｈｕｔｃｈ，ＴＨＨ）在小鼠骨髓细胞中的有丝分裂阻滞、染色体异常分离及姐妹染色单体互换（ｓｉｓｔｅｒｃｈｒｏｍａｔｉｄｅｘｃｈａｎｇｅ，ＳＣＥ）诱发效应。ＣＯＬ及ＴＨＨ均具有不同程度的有丝分裂阻滞效应，且显著诱发非整倍体（２ｎ＝４１－４３）及多倍体的产生。ＴＨＨ尚显著诱发小鼠骨髓细胞ＳＣＥ。结果提示：ＴＨＨ具有与ＣＯＬ类似的哺乳动物体细胞非整倍体／多倍体诱发效应；此外，ＴＨＨ尚含有某些基因毒性成分．实验还证实，ＢｒｄＵ标记法检检测哺乳动物体细胞染色体异常分离是可行的。

平阳霉素诱发人精子染色体结构畸变类型

人精子经平阳霉素处理后与去透明带地鼠卵受精，继而制备染色体进行核型分析．结果显示断裂是诱发畸变的主要类型，其后依次为互换、缺失、环和粉碎化；染色体型畸变的比例和均数远高于染色单体型；断裂型畸变的比例和均数远高于重接型．畸变中１７．３％为重接型，表明金黄地鼠卵母细胞中的ＤＮＡ损伤修复系统能够修复化学诱变所致人精子ＤＮＡ损伤．染色体型互换多于染色单体型互换提示：对这类损伤的修复，复制前修复系统可能比复制后修复系统作用更强．研究结果还证实染色体畸变精子和正常精子同样具有与卵受精的能力，提示人精子若反复或是期暴露于环境诱变因子，所产生的ＤＮＡ损伤有可能在精子中积累并在受精时不受选择性淘汰而传递给下一代．

人淋巴细胞染色体畸变自发率及其与性别年龄关系的研究

本文观察了４８０例不同年龄健康人外周血淋巴细胞染色体畸变的自发率，结果，双着丝粒体、无着丝粒断片、易位、畸变细胞和总畸变的平均自发率分别为０．０３％、０．１３％、０．００３％、０．１５％和０．１６％。染色体畸变率与性别之间不存在相关关系，而与年龄密切相关。

一个遗传性血管水肿家系C1抑制物基因突变的检测分析

目的对一个遗传性血管水肿(HAE)家系患者C1抑制物(C1INH)基因的突变类型进行检测分析。方法用聚合酶链反应扩增产物直接测序法检测HAE患者C1INH基因8个外显子及旁侧内含子序列,将检测结果与GenBank公布的C1INH基因序列相比较,确定突变。为除外多态性可能,在30名正常人中对该突变进行分析。结果该家系中的5例患者外显子8中均检测到1种新的突变类型(核苷酸序列17839delC),正常人中无此改变。结论在该家系中发现C1INH基因核苷酸序列17839delC突变,该突变可能是此家系发病的分子基础。

人DNA修复基因hR24L参与细胞周期检定点调控

目的：研究酵母ＲＡＤ２４Ｌ基因功能，克隆人类同源物。方法：分离ＲＡＤ２４基因区域ｒａｄ２４Ｌ突变株，以人的ｃＤＮＡ表达文库转化突变株，筛选回复表型；大剂量Ｘ线照射观察细胞周期。结果：ｒａｄ２４Ｌ对紫外线敏感，从转化文库后的回复表型中克隆出人类ｈＲ２４Ｌ全长ｃＤＮＡ。结论：克隆的人类ＤＮＡ修复基因ｈＲ２４Ｌ，它能校正ｒａｄ２４Ｌ的突变表型，参与细胞周期检定点调控。

丝裂霉素C诱发人精子染色体畸变的研究

人精子经最终浓度分别为７．５，１５．３０μｇ／ｍｌ丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）处理１ｈ后与去透明带地鼠卵受精，制备第１次卵裂中期相进行核型分析，以探讨ＭＭＣ对人精子的诱变效应。结果显示明显的量效关系。染色单体型畸变是诱发畸变的主要类型，但仍观察到一定数量染色体型畸变，表明ＭＭＣ作用于人精子与通常拟紫外线致断剂作用于体细胞诱变的结果并不完全一样。３６．８９％的诱发畸变为重接型。

9例正常男性536个精子染色体核型分析

为获得我国正常男性单倍体遗传学基线资料，用人精子与去透明带金黄地鼠卵异种体外受精技术，对正常男性５３６个精子核型进行了分析。结果显示，染色体自发畸变精子率为８．０２％．其中非整倍体率为了１．８６％，结构畸变精子率为６．１６％。Ｘ—精子与Ｙ—精子比例为５０．５６％：４９．４４％。在丹佛体制水平上，精子核型中随体联合呈随机分布，其频率为０．１１２。

三种有丝分裂抑制剂诱发小鼠骨髓细胞非整倍体的比较研究

以秋水仙素有丝分裂(CM)效应、微核(MN)及染色体畸变(CA)三种体内细胞遗传学指标综合评估了有丝分裂抑制剂(秋水仙素、益康唑及对苯二酚)诱发小鼠骨髓细胞非整倍体的效应。结果表明:秋水仙素是典型的多倍体及非整倍体诱发剂。益康唑对细胞有丝分裂有与秋水仙素相类似的效应,进一步分析表明其在哺乳动物体细胞内无非整倍体诱发效应。对苯二酚在哺乳动物活体实验系统中,可能具有诱发非整倍体及染色体结构畸变的多种遗传毒性。结果提示三种细胞遗传学指标能为非整倍体诱发剂的检出提供依据。

不同种类诱导物致人类细胞染色体畸变效应

本文通过四类不同化学诱导物：５－氟尿嘧啶脱氧核苷ｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（ＦＵＤＲ），ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ（ＡＰＤ），咖啡因ｃａｆｆｅｉｎｅ以及丝烈霉素ｃ１ｍｉｔｏｍｙｃｉｎｃ（ＭＭＣ）按照正交设计对正常人外周血进行染色体畸变诱导实验，通过染色体断裂、裂隙以及统计分析表明：四种化学诱导物单独作用于血标本时，均可极显著地诱导染色体畸变；不同组别染色体的畸变效应有别；不同种类诱导物之间有一定的交互作用。

硫酸钾、硫酸铝对小鼠骨髓细胞致突变性的研究

用小鼠骨髓细胞微核试验方法和小鼠骨髓细胞染色体畸变试验方法观察硫酸钾、硫酸铝诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞（ＰＣＥ）微核和染色体畸变的作用。结果表明：７２６ｍｇ／ｋｇ、９６８ｍｇ／ｋｇ剂量组的硫酸钾、硫酸铝诱发的微核率和畸变率均明显高于阴性对照组（Ｐ＜０．００１）。提示硫酸钾、硫酸铝对小鼠骨髓细胞具有明显的诱变作用。

健康人体染色体畸变分析

健康人体染色体畸变分析刘文丽四川省劳动卫生职业病防治研究所６１００４１唐兴华四川省结核病防治研究所６４１４００陈清英四川省涪陵地区计生委指导站６４８０００染色体畸变分析，对于放射损伤、职业危害的评价或遗传性疾病的诊断，具有十分重要的意义。然而健康人群...

化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究

应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变 ,应用mRNA差异显示和反义技术分离到两个基因表达序列标识 ,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。用体外DNA复制技术证明其发生基础是由于化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但DNA聚合酶酶谱发生改变。还证明它的发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活和cAMP浓度升高。细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。

Ada蛋白质在突变alkA基因启动子转录中的作用研究

目的：研究Ａｄａ蛋白质对ａｌｋＡ基因表达的调节，探讨Ａｄａ蛋白质与ａｌｋＡ基因有效转录的关系。方法：采用ＤＮＡ顺序测定和体外转录的方法，以ｌａｃ基因启动子为对照进行实验。结果：Ａｄａ蛋白质加入以突变和野生ａｌｋＡ基因启动子为模板的体外转录体系中，产生的ａｌｋＡｍＲＮＡ高于无Ａｄａ蛋白质组；Ａｄａ蛋白质加入ｌａｃ基因启动子转录体系中，产生的ｌａｃｍＲＮＡ与未加Ａｄａ蛋白质组基本相同。结论：Ａｄａ蛋白质对ｌａｃ基因启动子转录调节作用不明显，对于突变的和野生的ａｌｋＡ基因转录均有促进作用，这种调节作用可能发生在启动子上游区。