骨髓间充质干细胞源神经细胞移植治疗帕金森病大鼠模型

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)源神经细胞脑内移植对帕金森病(Parkinson s disease,PD)大鼠的治疗作用。方法贴壁培养法分离、培养大鼠骨髓MSCs,脑匀浆上清诱导第3代MSCs向神经细胞分化,采用免疫细胞化学法鉴定诱导分化后细胞的性质,激光共聚焦显微镜检测诱导前后细胞Ca2+浓度变化,6只PD大鼠行纹状体内MSCs源神经细胞移植作为细胞移植组,6只PD大鼠作为对照组。细胞移植术后4周检测PD大鼠的行为变化,观察移植细胞在脑内的分布情况。结果倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,有1～2个核仁,MSCs经脑匀浆上清诱导后其胞体折光性增强,发出数个细长突起,互相交织成网,有的似轴突。诱导后细胞表达神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白(NF),胞质Ca2+荧光强度显著增强,可推测诱导后的细胞为MSCs源神经细胞,将BrdU标记的MSCs源神经细胞移植到PD大鼠纹状体治疗4周后,可见细胞散在分布于注射侧脑组织,有少量细胞可迁移到对侧脑组织,PD大鼠的旋转行为得到显著改善。结论MSCs源神经细胞移植治疗帕金森病大鼠可使其旋转行为得到改善。

Bcl-2和Caspase-3调控他莫昔芬诱导的ER阴性乳腺癌细胞凋亡

目的研究Bcl-2和Caspase-3在他莫昔芬(TAM)诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡中的调控作用。方法在体外培养条件下,用浓度为1 0μmol/L的TAM作用于雌激素受体(ER)阴性的MDA-MB-2 3 1人乳腺癌细胞株1 2,2 4,3 6,4 8,6 0 h;流式细胞仪检测细胞凋亡率及Bcl-2和Bax的蛋白表达,荧光分光光度仪检测Caspase-3活性,以及加入Caspase-3活性抑制剂Ac-DEVD-CHO后凋亡百分率的变化。结果TAM作用ER阴性乳腺癌细胞后,Bcl-2表达下调,Caspase-3活性增强,细胞凋亡率增加,且有时间依赖性,细胞凋亡在4 8 h达高峰。Bcl-2表达水平与Caspase-3活性变化成负相关(r=-0.9 2 1,P<0.0 5),但Bax蛋白在药物处理前后无明显变化。加入Ac-DEVD-CHO后,能阻断Caspase-3活化而抑制TAM诱导细胞凋亡。结论TAM通过下调Bcl-2表达而经线粒体途径诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡,Caspase-3的激活在此过程中发挥重要作用。

小鼠肾血管球滤过膜发育的电镜研究

目的研究发育中小鼠血管球滤过膜的变化。方法应用透射电镜观察胚胎和新生小鼠血管球滤过膜的超微结构。结果在肾小体的发育过程中,足细胞形状明显变薄,足突数量逐渐增多,其形状逐渐窄小,足突间裂孔和裂孔膜出现;足细胞下、内皮细胞下先后出现基膜,而后两种基膜融合形成一层较厚的基膜。随着毛细血管袢的不断增生,在足细胞下方出现新合成的环状或袋状的基膜片段;内皮细胞形状也明显变薄,出现大量内皮孔。结论在小鼠肾小体的发育过程中,足细胞和内皮细胞逐渐分化成熟,基膜最早来源于足细胞,随后内皮也参与合成基膜,发育晚期基膜的合成和更新主要由足细胞来完成。

尿多酸肽对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽(CDA-II)对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法将CDA-II与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-2 3 1进行体外培养,同时以维甲酸为阳性对照,观察CDA-II对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡及形态学等方面的影响。结果CDA-II可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡。结论CDA-II可抑制MCF-7和MDA-MB-2 3 1两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡.本研究为CDA-II治疗乳腺癌提供了实验依据。

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21ras表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗，通过免疫细胞化学，双参数流式细胞仪等方法，探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱，胞膜阳性率明显降低，分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大，提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多；经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后，Ｇ１期细胞表达的差异减小，说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。

不同小鼠腹水型肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型表达研究

目的探讨在小鼠淋巴道转移潜能不同的肝癌细胞中,肝癌细胞增殖侵袭能力与膜联蛋白A7的亚细胞定位和亚型的表达。方法以小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移潜能不同的细胞株Hca-F细胞和Hca-P细胞为研究对象,通过CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western blotting方法检测膜联蛋白A7在体外增殖侵袭能力不同的肿瘤细胞中的亚细胞定位和亚型的变化。结果发现Hca-F细胞无论是增殖能力还是侵袭能力都高于Hca-P细胞。膜联蛋白A7在Hca-F细胞和Hca-P细胞主要为47 kD亚型表达,而51 kD亚型只少量表达于细胞浆。47 kD亚型在Hca-F细胞的细胞浆、细胞膜、细胞器膜以及细胞骨架中的表达均明显高于Hca-P细胞,分别为(73%±7%)v(s49%±19%)、(36%±8%)v(s24%±9%)和(53%±7%)v(s40%±12%)(均P<0.05)。结论膜联蛋白A7的47 kDa亚型在细胞浆、细胞膜、细胞器膜和细胞骨架的定位表达,可能与肝癌细胞增殖侵袭能力密切相关。

维生素E琥珀酸酯诱导MCF-7乳腺癌细胞的凋亡

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体阳性,ER(+)]以VES刺激1 2,2 4 h和4 8 h,VES浓度为5μg/mL,1 0μg/mL和2 0μg/mL,用MTT法测定VES对细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas的表达;W estern蛋白印迹法检测VES作用后Fas蛋白水平的变化。结果VES对MCF-7乳腺癌细胞具有显著的抑制作用,并表现为时间和剂量依赖关系。MCF-7乳腺癌细胞的自然凋亡率为1.2%;5μg/mL,1 0μg/mL和2 0μg/mL的VES作用4 8 h后凋亡率分别升高至1 1.2%,1 6.4%和4 1.2%。VES作用后乳腺癌细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达升高。结论VES对ER(+)乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用,并诱导细胞凋亡,其机制与细胞表面Fas表达上调有关。

正常大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期中的变化

目的观察出生后大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期（7～30d）中的变化特点。方法10只正常健康Wistar大鼠，8只为新生大鼠，2只为成年大鼠。新生大鼠随机分为4组，每组2只，正常饲养，分别于出生后0、15、20、25d摘取眼球进行视网膜电镜观察。2只成年大鼠亦进行视网膜电镜观察。结果出生后0d大鼠，视网膜感光细胞超微结构幼稚且细胞层次不清，关键期内感光细胞的细胞器逐步丰富发育成熟，层次渐显清晰。结论大鼠视网膜感光细胞在视觉发育关键期内逐渐发育、成熟。

骨髓血管内皮祖细胞的分离培养及分化鉴定

目的研究分离、培养小鼠骨髓血管内皮祖细胞的方法并对其进行诱导分化鉴定,为临床进行缺血性疾病的替代治疗奠定细胞学基础。方法用灌注法分离小鼠骨髓血管内皮祖细胞,用血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子诱导其分化,形态学观察细胞的生长过程,并利用抗CD34抗体鉴定血管内皮祖细胞,利用抗vWF抗体、抗eNOS抗体鉴定血管内皮细胞。结果小鼠骨髓血管内皮祖细胞可在体外培养条件下贴壁生长,可诱导分化为表达特异性组织蛋白的内皮细胞。结论在小鼠骨髓内可分离出骨髓源性血管内皮祖细胞,呈贴壁增殖状态,并有分化能力。

鸡胚颅盖骨成骨细胞样细胞培养液的生化分析

计数１０＾６鸡胚颅盖骨成骨细胞样细胞于培养瓶内培养，共１０瓶。每周测培养液中透明质酸，羟脯氨酸的含量和碱性磷酸酶的活力。结果；培养液的透明质酸含量从第２周的１３９．５２ｎｇｆ／ｍｌ上升至第９周的２７１１．９２ｎｇ／ｍｌ、表面细胞培养时，透明质酸释放量培养时间的延长而增加。

枇杷多糖的提取纯化及理化性质初步研究

本文建立了枇杷多糖的提取纯化方法,并对提取的枇杷多糖进行了理化性质分析。枇杷多糖经40%乙醇分级得到的组分Lens5,用Sephadex G-150凝胶柱层析得到单一峰,Lens5的酸性水解液经纸层析和薄层层析分析,其单糖组成为葡萄糖和木糖,用Sephadex G-150凝胶柱层析法测得其相对分子量为43000道尔顿。

离心法与细胞显微操作法对内皮细胞-白细胞黏附特性的初步研究

将哮喘病理血清与在体外培养的大鼠肺内皮细胞共同孵育，分别用离心法和显微操纵技术对细胞黏附进行体外研究。离心结果显示，病理血清刺激下的内皮细胞比正常情况更易与白细胞发生黏附。离心力高到一定程度可以解离部分黏附。从进一步的细胞显微操纵实验看病理血清刺激内皮细胞的功能状态。

肾缺血再灌流损伤过程中肾小管上皮细胞色素氧化酶活性变化及TAD防治作用的研究

本实验选用大鼠一侧肾切除，对侧肾缺血６０ｍｉｎ动物模型，用组织化学方法观察再灌流１５ｍｉｎ，２４ｈ髓质外带肾小管上皮细胞色素氧化酶活性的变化及还原型谷胱甘肽（ＴＡＤ）对它们的影响。结果发现６０ｍｉｎ肾缺血后再灌流可致细胞色素氧化酶活性呈进行性降低。给ＴＡＤ能一定程度地保护细胞色素氧化酶活性。提示氧自由基可能损害细胞色素氧化酶活性，细胞色素氧化酶活性降低在肾缺血再灌流损伤中可能起重要作用。

发育期小鼠肾小体细胞凋亡的研究

目的 研究小鼠肾小体发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点。 方法 应用光镜、电镜技术和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL法 )分别对不同胚龄和生后日龄小鼠肾小体内细胞凋亡进行观察。 结果 胚龄 14d肾小体发生时就出现细胞凋亡 ,胚龄 18d左右达到高峰 ,随后缓慢下降。肾小体内凋亡细胞以内皮细胞和足细胞多见。凋亡细胞的两种结局 :1 被邻近的细胞所吞噬 ;2 落入肾小体的毛细血管腔或肾小囊中。 结论 小鼠肾小体的整个发育过程均存在细胞凋亡现象 ,肾小体内细胞凋亡与肾小体发育的完善有关。

细胞素网络功能的研究进展

细胞素(Cytokine)是由体细胞产生的系列高活性、多功能诱生蛋白。细胞素的种类可能很多,目前已知的重要细胞素概括于图1。

兔软骨细胞的分离培养及其生物学特征的检测

目的探讨兔关节软骨细胞分离培养方法和生物学特征。方法采用酶消化法分离获取软骨细胞,通过倒置显微镜下观察、绘制生长曲线、组织化学染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法了解其生物学特性。结果分离获取细胞活性率可达98%以上,原代细胞和第1代细胞以三角形或多角形为主,生长融合时呈卵圆形,甲苯胺蓝染色呈阳性。第3代以后细胞出现反分化现象。结论本方法是一种方便且有效的培养法。

枇杷多糖对草金鱼免疫特性的影响

研究枇杷多糖对草金鱼Carassius auratus免疫功能的影响,为水产动物病害的防治及充分利用枇杷资源提供依据。以草金鱼为试材,通过注射的方式免疫草金鱼,研究枇杷多糖对草金鱼超氧化物歧化酶、溶菌酶、酚氧化酶、白细胞吞噬率的影响,结果表明:注射枇杷多糖质量浓度为1.0mg·mL^(-1),免疫21h时草金鱼血液SOD、溶菌酶活性均达到最大,分别为37.8U和128U;注射枇杷多糖质量浓度1.5mg·mL^(-1),免疫28h时,草金鱼血清酚氧化酶活力和白细胞吞噬率均达最大,分别为4.1U、55.68%,说明枇杷多糖可以提高草金鱼的免疫功能。

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21^(ras)表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗，通过免疫细胞化学，双参数流式细胞仪等方法，探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱，胞膜阳性率明显降低，分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大，提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多；经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后，Ｇ１期细胞表达的差异减小，说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。

某牵引车共振问题测试及研究

阐述了工作模态测试理论和方法,并针对某牵引车出现的典型共振问题,运用LMS Test模态测试系统测试该车匀速时的工作模态数据,然后成功地分析出该车共振时的模态振型、模态频率及激励源位置-前轮。测量车轮径向跳动量值,发现两个前轮都超过国标限值150%以上,提出改正措施-更换符合要求的前轮,再重复一轮工作模态测试,共振现象消失。因此,该研究成功地运用工作模态测试理论及方法解决了一例整车共振问题,具有一定工程应用价值。

雌激素削弱同型半胱氨酸诱导的N2a细胞Tau和NgR共表达

目的探讨雌激素对神经细胞的保护作用。方法实验采用免疫荧光技术检测高同型半胱氨酸(Hcy)诱导N2a细胞后Tau蛋白和NgR蛋白表达的变化。实验分成四组:对照组;Hcy诱导0.5小时组;Hcy诱导5小时组;用外源性17β-雌二醇预处理2小时后再用Hcy诱导5小时组。结果与对照组(15.85±1.56和9.93±0.86)相比,同型半胱氨酸诱导5h组Tau蛋白和NgR蛋白的共表达(39.91±10.05和31.98±5.45)明显增加(P<0.01);雌激素预处理组与对照组相比N2a细胞Tau蛋白和NgR的表达(15.32±2.62和9.76±1.79)无差异(P>0.05)。结论雌激素能够下调NgR和Tau蛋白的表达,对N2a细胞神经元具有保护作用。雌激素可能主要通过抑制糖原合成酶激酶-3并与雌激素受体、-βcatenin作用减少Tau蛋白的过度磷酸化,从而减轻了神经细胞的损伤,引起NgR表达下调。