乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明,酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降,乙醇浓度40%可使酶活力完全丧失,说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用,IC50为13%.含较低浓度乙醇(30%)的失活过程是可逆的反应.测定乙醇对酶的失活作用机理,结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制,说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用.应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现乙醇对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,荧光发射峰逐渐发生红移.紫外吸收光谱在276 nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强.这些结果表明,酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化.

除草剂精禾草克对黄鳝细胞遗传毒性的研究

采用红细胞微核和核异常、染色体数目和结构畸变的方法 ,研究了除草剂精禾草克对黄鳝细胞的遗传毒性。结果表明 ,不同浓度的精禾草克作用 30小时 ,红细胞微核细胞率没有明显变化 ,核异常细胞率和总核异常细胞率均有所上升 ,部分组与对照组差异显著。染色体数目畸变率均有所上升 ,有的组甚至与对照组差异极显著 ,染色体结构畸变率也明显上升 ,各组与对照组差异显著或极显著。表明一定浓度范围内的精禾草克作用一定时间对黄鳝有明显的遗传学毒性。

六种食(药)用菌中—同源内源基因的发现和序列分析(英文)

在对15种常见食(药)用菌的基因组DNA进行RAPD分析时发现,其中有六种食用菌出现同样大小为692bp的一个条带,它们是金针菇Flammulina velutipes、秀珍菇 Pleurotus geesteyanus.Singer、小平菇Pleurotu comucopiae、杏鲍菇(Pleurotus eryngii)、茶树菇Agrocybe cylindraca maire、双孢蘑菇Agaricus bisporus。我们对六个692bp的条带分别电泳纯化回收,并成功的克隆测序分析了其中四个条带,证明四个条带为高度同源的序列,为其中四种菌的同源内源基因。经过GENBANK比较,没有发现类似基因序列。最后对其进行了初步的应用研究。

扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性

建立了一种简便、快速、准确的检测CYP2C9基因Arg144Cys位点和Ile359Leu位点多态性的新方法.该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性酶切位点,即扩增引进限制性酶切位点(amp lification-created restriction sites,ACRS),其中通过上游引物在扩增Arg144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaⅡ切点;通过下游引物在扩增Ile359Leu位点的片断中引入MvaⅠ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*3的PCR产物中分别含有1个和2个MvaⅠ切点.将来自Arg144Cys位点和Ile359Leu位点的PCR产物各取一份测序,表明错配碱基成功引入PCR产物中.将包含Arg144Cys位点的PCR产物用AvaⅡ消化,将包含Ile359Leu位点的PCR产物用MvaⅠ消化,然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染进行基因分型.由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点,能完全避免因限制性核酸内切酶失活或酶切不完全而导致的基因分型错误.

水杨酸的抑酶与抑菌作用

以水杨酸为效应物,研究其酶学效应和微生物效应.实验结果表明:水杨酸对马铃薯多酚氧化酶有明显的抑制作用,半抑制率(IC50)为2.05 mmol/L,抑制作用表现为非竞争性的可逆过程,其抑制常数为2.00 mmol/L.水杨酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌3种细菌和白色假丝酵母、黑曲霉两种真菌均有明显的抑制作用,其最小抑菌浓度(M IC)分别为0.75、0.5、0.5、0.25和0.75 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)分别为0.75、1.0、0.5、0.25和0.75 mg/mL.本研究为水杨酸在果蔬保鲜中的应用提供实验理论依据.

酪氨酸酶抑制剂的研究进展

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1,PPO),是一种含铜糖蛋白,广泛存在于自然界中.它是生物体合成黑色素的关键酶,而且与果蔬褐化、昆虫表皮鞣化、人的色素障碍性疾病及恶性黑色素肿瘤的发生与治疗有重要关系.目前,酪氨酸酶抑制剂已被用于果蔬保鲜、化妆品中的增白剂、生物农药的杀虫剂添加物.对酪氨酸酶抑制剂的研究已引起国内外的广泛重视,现已研究出许多具有新型结构的酪氨酸酶抑制剂.为了得到高效的酪氨酸酶抑制剂,对各种类型的化合物构效关系及抑制机理的研究是非常必要的.

草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析,从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶(ALP).提取倍数为6.74,比活为684 U/mg蛋白.酶液经PAGE呈现单一带,该酶催化对硝基苯磷酸二钠(pNPP)水解反应的最适pH值为10.41,最适温度为27℃,Km值为1.01 mmol/L,酶的热稳定性与pH稳定性研究表明:该酶在pH 6.6～11.5区间和在温度低于45℃下稳定.研究金属离子对酶活力影响的结果表明:一价金属离子Li+、Na+和K+对酶活力没有影响;二价金属离子Mg2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用;Zn2+对酶有抑制作用.

芦荟皮酪氨酸酶抑制剂有效成分的提取与分析

以芦荟的表皮、同化薄壁组织和维管束组织为材料,经组织捣碎匀浆、石油醚萃取、过滤、旋转蒸发浓缩,得到芦荟皮酪氨酸酶抑制剂的提取物.研究该提取物对蘑菇酪氨酸酶的效应,结果表明,芦荟皮质部提取物对蘑菇酪氨酸酶有较强的抑制作用,其IC50值为0.439 mg/mL,抑制机理为可逆混合型.对其中的有效成分芦荟大黄素进行含量测定,结果为0.4%,说明芦荟大黄素在芦荟皮中占有相当的比例.

叶下珠提取物对酪氨酸酶的抑制和抗氧化作用

叶下珠为传统民间草药,具有平肝清热、利水解毒之功效.以叶下珠为研究对象,经乙醇提取,溶剂极性递增分离法制备获得叶下珠植物成分,测定了叶下珠植物对酪氨酸酶的抑制作用,以及运用1,1-二苯基-2-苦苯肼(DPPH)自由基法检测其清除自由基的能力.结果表明:叶下珠乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对酪氨酸酶二酚酶有较强抑制作用,IC50值分别达到0.26和0.49mg/mL,动力学研究表明:叶下珠乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对酪氨酸酶抑制作用均是可逆的,其抑制类型为混合型抑制作用;叶下珠乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对DPPH自由基具有一定的清除作用,在较低的浓度下有较高的清除效果,IC50值分别为0.012和0.008mg/mL,说明叶下珠植物具有开发成天然酪氨酸酶抑制剂和抗氧化剂的潜力.

金属离子对马铃薯多酚氧化酶活力的影响

以马铃薯多酚氧化酶为对象,研究金属离子对该酶活性的影响.实验结果表明,Li+、K+、Ba2+和Mg2+对酶活力几乎没有影响,Ca2+和Na+对酶活力有微弱的抑制作用,Cu2+则表现出较强烈的抑制作用,其IC50为0.248 mmol/L.Al3+、Fe3+、Cd2+、Co2+、Mn2+和Zn2+则对马铃薯多酚氧化酶有不同程度的激活作用.本研究为探讨多酚氧化酶的催化活性和催化机理提供理论基础.

兴化湾海湾生态系统退化评价

依据"压力-状态-响应"(PSR)概念模型,构建了兴化湾海湾生态系统退化评价的指标体系,并采用综合指数法和模糊评价法对该海湾生态系统的退化程度进行了定量评价.结果表明:自2005年兴化湾海湾生态系统呈现出退化的趋势,到2008年生态系统处于"中度退化"状态;兴化湾海湾生态系统受到的环境胁迫作用较大,尤其从2005年以来生态系统面临的压力有所增大.导致兴化湾海湾生态系统退化的主要胁迫因子有富营养化、围填海、GDP增长对环境的压力、滨海电厂温排水以及海洋捕捞等;在持续较大的压力下海湾生态系统的状态表现出恶化趋势.

4-卤代苯甲酸对马铃薯多酚氧化酶的抑制效应

马铃薯在储存和加工过程中易褐变,本实验研究了3种4-卤代苯甲酸(4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸)对褐变中的关键酶——多酚氧化酶活性的抑制作用。实验表明,4-氟代苯甲酸、4-氯代苯甲酸、4-溴代苯甲酸对该酶均有明显的抑制作用,测得使该酶活力下降50%所需的抑制剂浓度(IC50)分别为0.635、0.370、0.300mmol/L。抑制动力学实验表明这三种4-卤代苯甲酸对该酶均表现为可逆的非竞争性抑制作用,其抑制常数分别为0.632、0.365、0.303mmol/L。随着卤族元素分子量的增大,对酶的空间位阻增强,导致抑制效率的显著增强。

酪氨酸酶抑制剂的应用研究进展

酪氨酸酶是一类络合铜离子的金属酶类,广泛存在于动植物、微生物及人体中,是生物体合成黑色素、果蔬褐变的关键酶.酪氨酸酶的异常表现可能会出现黑色素瘤等,黑色素异常生成造成的色素沉着是动物衰老及果蔬褐变的重要表现.综述了酪氨酸酶抑制剂在美容保健、色素型皮肤病的治疗、病虫害防治以及食品保鲜等方面的应用,如:通过直接抑制酪氨酸酶活性以及调控细胞中酪氨酸酶的表达量来有效调控黑色素的生成,从而达到美白及治疗色素紊乱症的作用;抑制果蔬褐变,延长货架期;抑制昆虫蜕皮时的鞣化,达到杀灭农业害虫的目的;提高微生物对于紫外线及其他辐射的敏感度,进一步达到抑菌的目的.

3,3'-二氯联苯胺的急性毒性和体内遗传毒性研究

目的:研究3,3'-二氯联苯胺(DCB)的急性毒性和体内遗传毒性。方法:采用大鼠、小鼠急性毒性试验,小鼠微核试验,小鼠精母细胞染色体畸变试验和小鼠精子畸形试验。结果:经大、小鼠急性毒性试验,得DCB对大鼠、小鼠的LD50分别为4.64、3.16mg/kg,按毒性分级属微毒级物质。在小鼠微核试验中,DCB在高剂量(800mg/kg)时,能诱发小鼠嗜多染红细胞微核率升高(P<0.01);在小鼠精母细胞染色体畸变试验和小鼠精子畸形试验中,DCB在高剂量(216mg/kg)时可分别诱发小鼠精母细胞染色体畸变率和小鼠精子畸形率升高(P<0.01,P<0.01)。结论:在本实验条件下,DCB对实验动物具有一定的遗传毒性作用。

广东地区人群CYP2C9基因启动子区-1189C/T位点的多态性

目的:检测中国广东地区人群CYP2C9基因启动子区-1189C/T位点的多态性并调查其等位基因及基因型频率。方法:提取152例广东药学院新生外周血基因组DNA,PCR扩增含CYP2C9基因-1189C/T位点的DNA片段,用MboⅡ酶切PCR产物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染判断基因型。结果:在检测的152例样本中,CYP2C9基因-1189C/T位点基因型:C/C 21例、C/T 82例、T/T 49例,其相应的频率分别为0.14、0.54、0.32,符合Hardy-Weinberg平衡;等位基因-1189C和-1189T的频率分别为0.41和0.59,与日本人群和西班牙人群相比,差异没有统计学意义。结论:本研究建立了一种基于PCR-RFLP的简单、快速、灵敏的检测CYP2C9基因-1189C/T位点多态性的方法;CYP2C9基因-1189C/T位点多态性在中国广东地区人群中极为常见,是一个较好的遗传标志。

L-半胱氨酸作为化妆品美白添加剂的作用机理

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是黑色素形成的关键酶,其抑制剂的研究是当前美白添加剂研究的热点.研究了L-半胱氨酸(L-Cys)对蘑菇酪氨酸酶和小鼠B16黑色素瘤细胞粗提的酪氨酸酶的抑制效应,实验结果表明,L-Cys对2种来源的酪氨酸酶有较强的抑制作用,其半效抑制浓度分别为1.75,15μmol/L.对小鼠B16黑色素瘤细胞粗提的酪氨酸酶的抑制主要表现为显著延长酶促反应的迟滞时间,同时显著降低酶的活力.进一步对L-Cys在细胞毒性方面进行了研究,结果表明,在200μmol/L浓度下,L-Cys对小鼠黑素瘤细胞B16的生长未显示出明显影响,对细胞状态、代谢MTT的能力、细胞增殖率等均无影响,无明显细胞毒性,是一种有潜力的增白剂,为L-Cys作为美白添加剂提供了依据.