人CD4^+CD25^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞诱导获得iTreg细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成iTreg细胞的效率,并对比各组iTreg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA ^+和CD25 ^-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导iTreg生成,3、6 d通过流式观察各组iTreg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4 +CD25^-CD45RA ^+T细胞诱导的iTreg组、CD4^+CD25 ^-T细胞诱导的iTreg组和空白对照组,通过观察iTreg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果: CD4^+CD25 -CD45RA +T细胞组和CD4 +CD25 -T细胞组普通条件下iTreg产率分别为(96.00±0.21)%和(60.23±0.50)%,炎性环境下为(81.97±1.29)%和(56.80±0.43)%,前者都显著高于后者( P <0.001)。各组iTreg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者( P <0.001),前者IFN-γ也低于后者( P <0.05)。体内实验表明iTreg均具有免疫调节能力,但CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组诱导的iTreg能力强于后者。结论: CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组和CD4^+CD25^-T细胞组都可以成功诱导iTreg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。