乙型肝炎病毒表面抗原变异株对我国16家ELISA检测试剂的影响研究

目的构建包含不同变异位点的HBV表面抗原表达载体,体外表达评价HBVS区不同位点突变对于我国乙肝表面抗原ELISA检测的影响。方法以C基因型野生株HBV的表面抗原基因为模板,采用定点诱变方法引入不同位点的变异序列,分别构建包含S区的8个突变位点表达载体(118Met,122Asn,123Ala,129Asn,141Glu,145Arg,145Lys,154Thr),体外瞬时表达后用国内16家供应商提供的HBV表面抗原ELISA检测试剂盒(A-P)检测,并进行结果比较。结果经鉴定、测序比对,成功构建HBV表面抗原突变表达质粒共8株。分别转染293T细胞后,上清中均检测到HBsAg的表达,不同供应商提供的检测试剂的反应格局及检测灵敏度各不相同。结论 HBV表面抗原变异对国内ELISA检测存在显著影响,不同厂商对变异株检测有着不同的检测谱,适当选择不同的组合能有效提高检测覆盖谱。同时重组表达变异表面抗原是进行ELISA试剂评价的有效方式。

利用二代测序数据判定SNP基因型

通过将二代测序数据与连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR)对单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)基因分型的结果进行比对,确定二代测序数据判定SNP基因型的经验性阈值.利用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,multiplex PCR)对91个样本进行19个SNP位点的扩增,扩增的产物混匀纯化后在Ion torrent PGM仪器上进行二代测序.利用LDR技术对相应的SNP位点进行检测,将其分型结果作为二代测序数据判定SNP基因型的标准,确定了二代测序数据判定SNP基因型的阈值:测序深度≥6X,等位基因比率在15%~85%的位点为杂合子,在范围之外的为纯合子,该阈值准确度达到99.6%;针对等位基因频率分布在阈值边缘的数据,结合聚类分析可将正确率提升至100%.研究结果为利用二代测序数据判定SNP基因型提供了一个准确、快捷和经验性的阈值与方案.

非对称PCR-FP技术同步检测HSV-1/-2、CMV和EBV

目的应用非对称PCR-荧光偏振（FP）技术建立一种同步检测全血中4种主要疱疹病毒（单纯疱疹病毒1／2型，巨细胞病毒、EB病毒）的新方法。方法以人疱疹病毒属通用引物行非对称PCR，扩增从179例样本中抽提的DNA。PCR扩增产物与特异性单纯疱疹病毒1／2型（HSV-1／-2）、巨细胞病毒（CMV）和EB病毒（EBV）寡核苷酸探针混合物温育杂交，荧光偏振检测技术检测杂交液荧光偏振值，据荧光偏振值判断病毒感染类型，并以DNA序列测定结果为参照。结果与DNA序列测定的阳性检测符合率为100％，但DNA序列测定检测均未检出多重混合感染。非对称PCR-FP方法对HSV-1／-2检测的灵敏度达到1．0×10^3拷贝／ml．对EBV和CMV检测的灵敏度达到2．0×10^3拷贝／ml。结论本法对于4种主要疱疹病毒感染的筛查及预防、预后判断具重要价值。

M受体亚型放射配基结合－免疫沉淀分析方法的建立及考核

利用１％洋地黄皂甙溶解大鼠脑匀浆Ｍ受体，用非选择性配基３Ｈ－ＱＮＢ标记可溶性Ｍ受体，以自制的Ｍ１、Ｍ２亚型抗血清和固相二抗分别特异性地免疫沉淀相应的亚型，分析单一受体亚型。对方法进行了考核，包括受体的溶解效率、抗原抗体反应时间、抗血清稀释度、反应温度等对分析结果的影响。对大鼠脑Ｍ受体的试验表明，用两种亚型抗血清进行的免疫沉淀分析呈典型的单位点饱和曲线，抗体对配基与受体的结合反应无影响。

废旧金属土法冶炼区与非冶炼区儿童发中几种元素的对比分析

废旧金属土法冶炼区与非冶炼区儿童发中几种元素的对比分析陈首英席志梅范金山孙幸之（河北职工医学院保定０７１０００）农村地区废旧金属的土法冶炼，已成为农村环境污染的一主要来源。为查明污染对儿童的影响，１９９４年１０月，我们以保定农村某一废旧金属冶炼区小学...

产超广谱β-内酰胺酶菌的检测方法及耐药性的比较

【目的】比较 3种方法检测产超广谱β -内酰胺酶 (ESBLs)菌株的检出率 ,了解近期广东省人民医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株的感染率及其耐药情况。【方法】walkaway - 4 0机鉴定菌种 ,MIC初筛 ,双纸片协同试验 ,确证试验、药敏纸片扩散法。【结果】大肠埃希菌 72株和肺炎克雷伯菌 78株 ,确证试验检出率分别为 4 6 %和 33%。上述产ESBLs菌株对三代头孢菌素和氨曲南大多耐药 ,对氨苄西林 ,环丙沙星多呈耐药 ,亚胺培南 10 0 %敏感 ,对 5种复方制剂耐药率为 18 2 %～ 10 0 %。【结论】双纸片协同法和NCCLS确证试验均是检测ESBLs的好方法 ,各实验室应重视ESBLs菌株的检测和药敏试验。

生殖道感染白色假丝酵母菌药敏性研究及耐药基因ERG11突变情况分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性以及耐氟康唑白色假丝酵母菌ERG11基因突变的情况。方法收集2016年1月—2017年1月临床生殖道假丝酵母菌感染患者生殖道分泌物标本,培养并进行菌种鉴定,微量稀释法进行体外药敏性实验对氟康唑靶酶基因ERG11进行PCR扩增、测序,与已知序列进行对比分析。结果 815例样本中发现假丝酵母菌感染213例,感染率26.1%,其中白色假丝酵母菌感染139例占65.3%。通过药敏性实验从中分离耐药菌10株,通过ERG11基因分析共16个同义突变与9个错义突变。结论白假丝酵母菌是女性生殖道假丝酵母菌感染的主要致病菌,对ERG11基因测序发现了4株单位点及6株多位点的有义突变。

105例甲真菌病临床及致病菌分析

甲真菌病是南方地区常见的一种浅部真菌病（俗称＂灰指甲＂）,是由皮肤癣菌、念珠菌及其他丝状真菌侵犯甲板或甲下组织引起的一种慢性传染病性疾病。甲真菌病在人群中的发病率为3%～5%[1],占真菌病的20%～30%[2]。为了解南昌地区甲真菌病的临床特点和病原真菌构成,笔者对2010年9月至2011年8月本院真菌科收集的105例甲真菌病患者从临床及病原学方面做了综合性分析．现将分析结果报告如下。

临床医学血液细胞检验的质量控制

血细胞检验是指血液中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)及相关数据的技术检测分析,也称血常规检验。是临床医学检验中最常用、最重要的基本内容之一。血常规检验不但为各种血液病的诊断及治疗提供了重要依据,也对其它系统疾病的诊断和鉴别提供了许多重要信息。因此,血常规检测的准确与否至关重要。为了取得准确、可靠的检验结果,防止临床诊疗中出现误诊及漏诊,实验室检验要充分考虑影响血常规检验中的各种影响因素,并严格加以控制。

液相免疫技术的建立及其有关反应特征的探讨

目的研究固相化抗体与流动溶液中可溶性抗原结合的特点,探讨采用液相免疫捕获法自生物体内采集某些特殊样本的可行性。方法将抗体包被的ELISA反应板孔条改为样品捕获池,建立模拟生物标本(如血液)流动采集系统。以人血清IgM的ELISA检测为实验模型,观察固相抗体对流动状态下可溶性抗原捕获的特征,并与静止及适当振荡条件下抗原抗体的结合特征进行比较。结论固相化抗体对流动标本中可溶性抗原的捕获特征与静置法及震荡法基本相当,综合能力强于或显著强于后两者。

凝血酶激活的纤溶抑制物与深静脉血栓形成

凝血酶激活的纤溶抑制物（Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor，TAFI）是近年来发现的一种新的凝血和纤溶调控因子。TAFI的基础研究是对传统凝血及纤溶调控机制的补充，活化的TAFI（TAFI—a）能够使纤溶酶失去与纤维蛋白的作用位点而发挥纤溶抑制作用，促进血栓形成。对TAFI的深入研究有可能拓宽血栓性疾病治疗的新途径。本文结合有关文献就TAFI及其与深静脉血栓形成的相关性作一综述。

血液黏度检测质量控制及临床应用

血液是由血细胞和血浆组成的悬浮液,血浆是牛顿流体,而血液是非牛顿流体。血液黏度的大小直接影响着血液循环中流阻的大小,势必影响机体组织血液灌注量的多少,因此血液黏度对于机体的生理和病理变化均有重要意义。依我科室血液黏度仪的操作程序和经验,现提出血液粘度检测质量控制的几点建议。1血液黏度仪的选择血液黏度仪应选用有较宽切变率范围的仪器,旋转式黏度仪可以给出确定的切变率。