恒河猴脑垂体远侧部细胞的电镜观察

应用透射电镜观察了恒河猴脑垂体远侧部含有的 6种细胞 ,即生长激素细胞、催乳激素细胞、促甲状腺激素细胞、促性腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞和滤泡 -星形细胞。生长激素细胞呈圆形或椭圆形 ,分泌颗粒直径 2 0 0～4 5 0 nm。催乳激素细胞呈卵圆形或不规则形 ,胞核为不规则形 ,分泌颗粒直径 2 5 0～ 80 0 nm。促甲状腺激素细胞呈卵圆形或不规则形 ,分泌颗粒直径 10 0～ 2 5 0 nm。促肾上腺皮质激素细胞呈圆形或卵圆形 ,分泌颗粒直径 2 5 0～ 4 5 0 nm。促性腺激素细胞呈圆形 ,其椭圆形的分泌颗粒长径为 2 5 0～ 80 0 nm。滤泡 -星形细胞呈卵圆形或不规则形 ,有突起伸入相邻细胞之间 ,无分泌颗粒。

生长因子和雌激素对大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素基因表达的影响

目的观察外源性生长因子和雌激素对离体正常大鼠垂体前叶细胞增殖活性及催乳素（ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）基因表达的影响，并探讨生长因子与雌激素作用的关系。方法应用无血清原代培养的大鼠垂体前叶细胞，分别采用荧光染色细胞ＤＮＡ的激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＬＳＣＭ）扫描、以及原位杂交方法，观察１７－β－雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）、表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ－ｔｏｒ，ＥＧＦ）及转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）对大鼠垂体前叶细胞增殖活性和催乳素（ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）基因表达的影响。结果生长因子或雌激素作用３６ｈ后，Ｅ２和ＥＧＦ单独作用组细胞ＤＮＡ含量和ＰＲＬｍＲＮＡ含量均较正常对照组明显升高（Ｐ＜０．００１）；两者共同作用上述效应更为显著，高于Ｅ２和ＥＧＦ单独作用组（Ｐ＜０．０１）。ＴＧＦβ１对细胞增殖与ＰＲＬ基因表达均有抑制作用（Ｐ＜０．００１）；而与Ｅ２共同作用时细胞内ＤＮＡ含量和ＰＲＬｍＲＮＡ水平显著高于ＴＧＦβ１单独作用组（Ｐ＜０．００１），但仍低于Ｅ２单独作?

β-内啡肽在雌激素负反馈调节中的作用机理

本文在大鼠的整体实验中,测定了下丘脑和中脑中央灰质的β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)和促黄体素释放激素(luteinizing hormone-releasing hormone,LHRH)含量,以研究在雌激素负反馈调节中β-EP和LHRH释放之间的关系。结果表明,体内雌激素水平升高而产生负反馈调节时,下丘脑和中脑中央灰质的β-EP含量明显升高,而下丘脑LHRH的释放受到明显的抑制;纳洛酮阻断β-EP的作用后,下丘脑LHRH释放增加。结果提示,下丘脑和中脑中央灰质β-EP可能同时参与了雌激素对下丘脑LHRH释放的负反馈调节作用。

ACH对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A及CAMP的影响

目的:探讨乙酰胆碱(ACH)对人胃腺癌细胞内蛋白激酶A(PKA)及环一磷酸腺苷(CAMP)水平的影响。方法:将ACH作用于体外培养的人胃腺癌细胞,利用酶免疫分析法测定癌细胞内PKA活性和CAMP的浓度。结果:10ΜMOL/L ACH使胃腺癌细胞内CAMP水平和PKA活性显著高于空白对照组,该作用可被阿托品(ATROPINE)阻断。结论:ACH对胃腺癌细胞的增殖分化具有一定的调控作用,这种作用是通过毒蕈碱受体实现的。

白介素8B型受体在大鼠脑垂体中的分布和表达

目的探讨白介素8B型受体interluekine8receptorBIL8RB在大鼠脑垂体中的分布和表达。方法用免疫组化法,观察该受体在垂体中的分布。提取组织和原代培养细胞的总RNA,用RTPCR检测该受体mRNA的表达。结果IL8RB+细胞主要分布于垂体前叶。测序结果证实,PCR产物为IL8RBmRNA。结论首次证实在大鼠脑垂体中有IL8B型受体的表达及其分布区。

银鲫和建鲤血液外源生长激素代谢动力学

采用草鱼生长激素夹心式酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），研究了重组鲤鱼生长激素（ｒｃＧＨ）在银鲫和建鲤血液中的代谢规律．银鲫每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ１μｇ后，血清ＧＨ水平迅速升高，２ｈ时达峰值，８ｄ后血清ＧＨ水平仍未恢复正常值．而每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．２μｇ后，银鲫血清ＧＨ却较为缓慢升高，６ｈ后才达峰值，８ｄ后血清ＧＨ水平已恢复正常值．银鲫每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．２，１，５μｇ后，仅０．２μｇ组在２ｄ后血清ＧＨ水平恢复正常值，其余两剂量组在８ｄ后仍未恢复正常值．建鲤每ｇ体质量腹腔注射ｒｃＧＨ０．５，１，５μｇ后，血清ＧＨ水平分别在第３，５。

体外骨对甲状旁腺激素相关蛋白-141的双相反应

目的:通过体外器官培养系统,探讨甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone-related protein,PTHrP)在新骨生成和骨组织破坏方面的效应。方法:将全长PTHrP(-36～+141)cDNA克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+),并用重组质粒pcDNA3.1-PTHrP转染LCC15-MB乳腺癌细胞,在体外器官培养系统里加不同浓度含PTHrP的条件培养上清液培养小鼠颅盖骨。通过组织学方法检测PTHrP141在新骨形成和骨组织破坏方面的效应。结果:转染的乳腺癌细胞产生的PTHrP在低剂量时诱导骨的形成,而高剂量时诱导骨的再吸。结论:PTHrP在新骨的形成和骨组织的破坏方面因其浓度的不同而具有不同效应。

白细胞介素-2mRNA在大鼠垂体前叶的表达

目的 研究白细胞介素 - 2 (IL- 2 ) m RNA在正常大鼠垂体前叶的表达 .方法 从正常大鼠垂体前叶组织和离体原代培养的细胞中提取总 RNA,采用二步法 RT- PCR技术 ,扩增出相应大小的 DNA片段 ,将此片段通过凝胶电泳回收纯化后与 p GEM- T easy载体连接 ,转染到大肠杆菌细胞内 ,并接种于 L B培养基中培养 10～ 14h,挑选出阳性克隆进行 DNA序列测定 .结果 测定的 DNA与 IL- 2基因片段相同 .因而 ,在正常大鼠垂体前叶组织和培养细胞中都有 IL - 2 m RNA的表达 .结论 首次证实了 IL - 2不仅存在于垂体肿瘤组织中 ,而且在正常垂体组织中也有表达 .

去卵巢致骨质疏松症大鼠腺垂体FS细胞中Cx43、S-100蛋白表达——激光扫描共聚焦显微镜观察

检测间隙连接蛋白 Cx43、神经组织蛋白 S- 10 0在去卵巢致骨质疏松症 (OVX- OP)大鼠腺垂体滤泡星形细胞 (FS细胞 )中的表达。实验采用 10月龄未孕产 SD雌性大鼠 40只 ,随机均分为卵巢切除组 (OVX组 ,n=2 0 )和假性手术对照组 (Sham组 ,n=2 0 )。于术后 6周末用双能 X线骨吸收测量法 (DEXA)测量大鼠全身及腰椎 4- 6 (L4- 6 )骨密度 (BMD)。取两组大鼠垂体 ,制成连续切片。应用 FITC标记的 Ig G探针 ,对腺垂体组织中 Cx43和 S- 10 0进行间接免疫荧光染色 ,并用激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM)定位和定量分析腺垂体 FS细胞中 Cx43、 S- 10 0的表达。结果发现 ,术后 6周末 OVX组大鼠全身及 L4- 6 BMD均明显低于 Sham组值 (P<0 .0 1,P<0 .0 1)。Cx43阳性荧光反应主要定位于相邻的 FS细胞的胞浆中和 /或胞膜上。OVX组 Cx43阳性表达荧光强度和表达阳性率均显著低于 Sham组 (P<0 .0 1)。S- 10 0蛋白表达定位于 FS细胞的胞浆中 ,两组间 S- 10 0阳性表达荧光强度和表达阳性率无显著差异 (P>0 .0 5 )。本研究提示 ,SD大鼠 OVX术后 6周出现骨质疏松变化 ;OVX大鼠腺垂体 FS细胞数量无明显变化、而 Cx43表达显著下降 ,后者的变化可能与大鼠 OVX-

MLT抑制E_2诱发的大鼠垂体PRL瘤的增生涉及雌激素受体的作用

目的:探讨褪黑素(melatonin,MLT)抑制17-β-雌二醇(17--βestradiol,E2)诱发垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤的增生及其机制的初始阶段,MLT对雌激素受体的作用。方法:在体实验采用每日定时给各组SD大鼠分别皮下注射不同浓度的MLT,建立MLT抑制E2诱发的垂体PRL瘤增生的动物模型。离体实验采用原代培养细胞原位杂交方法,探讨垂体PRL瘤细胞MLT受体的表达、MLT对雌激素受体(ER)表达的作用;应用电泳迁移率改变(EMSA)的方法,观察MLT对雌激素受体(ER)与雌激素反应元件(ERE)结合的效应。结果:每只大鼠每日定时皮下注射0.25或0.50 mg MLT能显著抑制E2诱发的垂体PRL瘤的增生(分别P<0.01、P<0.05);E2诱发的垂体PRL瘤细胞内有MLT受体MLT1a和MLT1b;给0.25 mg/day/rat MLT组的大鼠垂体PRL瘤细胞内ER的表达显著减少(P<0.01)、ER与ERE的结合量显著降低(P<0.01)。结论:一定剂量的MLT能显著抑制E2诱发的SD大鼠垂体PRL瘤的增生,其作用机制之一可能与MLT抑制ER的表达、及其部分阻断ER与ERE的结合有关。

甘丙肽（galanin）对大鼠垂体前叶催乳素和β－内啡肽释放的调节

本工作探讨甘丙肽是否参与垂体前叶催乳素和β－内啡肽释放的调节。实验分两部分：（１）在体实验，给清醒自由活动的大鼠第三脑室内微量注射甘丙肽（１μｇ或３μｇ／只），用放射免疫测定法检测血浆催乳素和β－内啡肽的浓度。结果如下：每只大鼠给１μｇ或３μｇ的甘丙肽后，都显著兴奋催乳素的静息分泌，３μｇ甘丙肽对催乳素分泌的兴奋效应显著大于１μｇ的作用。两种剂量的甘丙肽都不影响限制性应激引起的催乳素的释放；对β－内啡肽的静息分泌和应激引起的释放也无明显影响。（２）离体实验，在体外培养的垂体前叶细胞中，加入不同剂量的甘丙肽（０．０５，０．５和１．０μｇ），孵育１ｈ后，用上述方法测定培养液中催乳素和β－内啡肽的浓度。其结果是三种剂量的甘丙肽都显著兴奋β－内啡肽的分泌，兴奋效应随甘丙肽的剂量增加而增大，有显著的剂量效应；但三种剂量的甘丙肽对催乳素的分泌均无作用。以上结果表明，甘丙肽对垂体前叶催乳素和β－内啡肽释放的调节作用不同。中枢的甘丙肽可能通过一定的下丘脑机制兴奋垂体前叶催乳素的静息分泌，但不影响应激引起的催乳素的释放，也不影响β－内啡肽的静息分泌和应激引起的释放。外周的甘丙肽虽然对垂体前叶细胞的催乳素分泌无直接作用，但兴奋?

雌二醇对大鼠垂体前叶白细胞介素-8样免疫阳性物质的影响

目的 研究孕鼠和大鼠性周期不同阶段以及大鼠体内雌激素水平变化对垂体前叶 (Anterior pituitary,AP)内IL- 8样免疫阳性物质表达的影响 .方法 免疫组织化学 ABC法 .结果 IL- 8样免疫阳性物质在雌性大鼠性周期不同阶段有所差异 ,在动情期 ,垂体边缘 IL - 8样强染阳性细胞数明显增多 ;妊娠 2 0 d大鼠的垂体前叶中央部分阳性细胞染色强度明显增加 .双侧卵巢摘除大鼠和正常雌性大鼠皮下注射 2 5μg· (kg·d) - 1苯甲酸雌二醇 2 wk后 ,也能观察到相同结果 .结论 大鼠体内雌激素水平能影响垂体前叶内 IL- 8样免疫阳性物质的含量 .

血管活性肠肽和组异肽对催乳素基因转录调控作用的比较

实验用ＳＤ大鼠垂体前叶细胞原代培养及原位杂交方法，研究不同浓度的血管活性肠肽（Ｖａ－ｓｏａｃｔｉｖｅＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＶＩＰ）或组异肽（ＰｅｐｔｉｄｅＨｉｓｔｉｄｉｎｅＩｓｏｌｅｕｃｉｎｅ，ＰＨＩ）对催乳素（Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ，ＰＲＬ）基因转录水平的调节。结果表明，经不同浓度的ＶＩＰ或ＰＨＩ与垂体前叶细胞一起孵育２４ｈ后，胞内ＰＲＬｍＲＮＡ随ＶＩＰ及ＰＨＩ浓度的加大而升高（Ｐ＜０．０１）。１０￣（－８）、１０￣（－７）、１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ的ＶＩＰ分别使胞内ＰＲＬｍＲＮＡ升高为对照组的３．０、４．０、４．７倍；１０￣（－９）、１０￣（－８）、１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ的ＰＨＩ则分别使细胞内ＰＲＬｍＲＮＡ升高为对照组的２．５、３．８、５．５倍。进一步分析表明，虽然ＶＩＰ及ＰＨＩ均促进ＰＲＬ基因转录，但它们的作用强度不同。１０￣（－８）、１０￣（－７）ｍｌｏ／Ｌ的ＰＨＩ分别使细胞内ＰＲＬｍＲＮＡ的含量升高为相同浓度ＶＩＰ的１．５倍及１．６倍（Ｐ＜０．０５），提示ＰＨＩ促进ＰＲＬ基因转录的作用比ＶＩＰ强。

缺血预处理经抑制线粒体释放细胞色素C减轻大鼠海马神经元缺血再灌注损伤

目的:探讨线粒体细胞色素C的释放在缺血预处理(IPC)保护大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法:动物随机分为单纯缺血再灌组(IR组)、IPC加缺血再灌组(IPC+IR组)和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测该区神经元凋亡;免疫组化测定该区神经元细胞色素C的表达。结果:IPC+IR组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,细胞色素C的释放明显少于IR组(P均<0.001)。结论:IPC可经阻止线粒体释放细胞色素C抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。

离子液体1-己基-3-甲基咪唑溴化盐对番茄种子萌发及幼苗生长的影响

用不同质量浓度（0、3、6、9、12、15mg·L-1）的离子液体1-己基-3-甲基咪唑溴化盐（[C6mim]Br）水溶液对番茄金顶一号品种进行浸种和苗期水培,研究了种子萌发、幼苗形态以及幼苗叶片生理生化的变化.结果表明,当离子液体质量浓度9mg·L-1时,种子发芽率比对照降低差异显著;当离子液体质量浓度6mg·L-1时,根长和苗长比对照降低差异极显著.本研究所设的所有离子液体质量浓度均使番茄幼苗叶片中叶绿素含量比对照降低差异显著,尤其是当9mg·L-1时则差异极显著.幼苗叶片超氧化物歧化酶（SOD）在离子液体质量浓度为6~12mg·L-1和15mg·L-1时分别比对照降低达显著与极显著水平,当离子液体质量浓度12mg·L-1时,POD活力比对照降低差异极显著.处理组幼苗叶片中超氧阴离子（O2·-）产生速率和丙二醛（MDA）含量分别在离子液体质量浓度6mg·L-1和9mg·L-1时比对照增加,达极显著差异水平.在本试验条件下,离子液体1-己基-3-甲基咪唑溴化盐对番茄种子萌发和幼苗生长均具有明显的抑制效应.

电场刺激对离体温育垂体前叶促肾上腺皮质激素分泌的影响

本实验应用离体温育大鼠垂体前叶组织块结合电场刺激及放射免疫测定方法，观察了垂体前叶内的神经纤维兴奋对促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）分泌的影响以及其它因素的作用。结果表明，一定参数的电场刺激使温育的大鼠四分之一垂体前叶组织块ＡＣＴＨ分泌增加，能被河豚毒素（ＴＴＸ）和藜芦碱部分阻断，此效应也可被地塞米松显著抑制，而同一参数的电场刺激与促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）诱发的ＡＣＴＨ分泌没有相互作用。经典神经递质受体阻断剂阿托品、心得安、酚妥拉明对电场刺激诱发的ＡＣＴＨ分泌没有显著影响；ＧＡＥＡ＿Ａ受体拮抗剂荷包牡丹碱明显促进此效应。该作用不受Ｐ物质拮抗剂ｓｐａｎｔｉｄｅ的影响，而降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）受体拮抗剂ＣＧＲＰ片段８－３７能部分阻断这一作用。上述结果提示电场刺激所诱发的ＡＣＴＨ分泌可能部分由垂体前叶内ＣＧＲＰ能神经纤维介导。

褪黑激素对17-β-雌二醇诱致的大鼠垂体催乳素瘤细胞增殖的抑制作用

观察不同浓度的褪黑激素 (Melatonin ,MLT)对原代培养的大鼠垂体催乳素瘤细胞增殖的影响。用 80～10 0g体重的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠 ,皮下埋置雌二醇诱致垂体催乳素瘤 (prolactinoma)形成后 ,取出瘤体 ,经消化、过滤、离心 ,用SFFD培养基重悬细胞 ,得细胞悬液 ,浓度为 0 75× 10 6/mL ,转入 2 4孔培养板中并加入相应剂量的MLT使其终浓度 (mol/L)分别为 10 -5、10 -7、10 -9、10 -11和 10 -13 ,另设空白对照组 ,于 37℃、5 %CO2 条件下培养 1h ,再在每孔中加入 2 μCi [3H] TdR继续孵育 2 4h后测counts/min值。结果显示 ,在对照组和各剂量 (mol/L)MLT用药组 10 -5,10 -7,10 -9,10 -11和 10 -13 的 [3H]-TdR掺入率分别为 2 0 38 75± 186 84,142 1 75±6 4 49,12 38 2 5± 6 1 72 ,92 4 0 0± 6 4 44 ,10 33 2 5± 12 7 2 2和 110 3 2 5± 15 1 5 3counts/min。表明 10 -5～10 -13mol/L的MLT能有效抑制 [3H] TdR在原代培养的垂体催乳素瘤细胞中的掺入 ,P <0 0 0 1。其中 ,以 10 -9mol/L的MLT的抑制作用最强 ,达 5 4 6 8%。提示在培养条件下 ,10 -5～ 10 -13 mol/LMLT能有效地抑制E2 诱导的垂体催乳素瘤细胞的增殖。

Cu(2＋)对离体培养猪腺垂体细胞GH分泌的影响

目的:研究铜离子(Cu2+)对离体培养猪腺垂体细胞生长激素(GH)分泌的影响。方法:试验选取32-35日龄仔猪腺垂体细胞,于10%小牛血清的Dulbecco MEM培养液(DMEM)中离体培养48 h。之后用含不同浓度Cu2+(0 mg/L、0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L、1.6 mg/L)的无小牛血清DMEM培养液培养36 h,于12 h、24 h、36 h收集细胞培养液,用Linco公司的试剂盒及放射免疫法测定培养液中GH浓度。结果:铜离子离体培养腺垂体细胞24 h,0.025 mg/L、0.1 mg/L、0.4 mg/L组培养液中GH浓度均高于0 mg/L组,其中0.1 mg/L组与0 mg/L组差异显著(P<0.05)。结论:铜离子可促进离体培养猪腺垂体细胞分泌GH。

马脑垂体促生长激素细胞和血浆生长激素浓度的性别差异

目的 分析马脑垂体促生长激素细胞及血浆生长激素 (GH)水平上的性别差异及性成熟前摘除睾丸对促生长激素细胞的影响。方法 采用免疫组织化学和形态计测学方法 ,观察了成年公马、母马和摘除睾丸的去势马的脑垂体前叶促生长激素细胞的形态、大小、数量及其出现率 ,同时使用放射免疫分析法检测了血浆中的GH浓度。结果 公马促生长激素细胞数量显著多于母马 (分别为 9 85× 10 8个和 6 16× 10 8个 ,P <0 0 1) ,而且公马促生长激素细胞出现率也同样高于母马 (分别为 39 8%和 2 5 7%,P <0 0 1) ;公马和母马血浆的GH浓度分别为9 73ng ml和 2 87ng ml,两者差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;性成熟前摘除睾丸的去势马 ,其脑垂体前叶的促生长激素细胞数量和出现率显著低于公马 ,而与母马差异无显著性。结论 马脑垂体促生长激素细胞的数量及马血浆中GH浓度存在着明显的性别差异 ,即公马的脑垂体促生长激素细胞的数量和血浆中GH浓度都明显高于母马 ,而去势马则与母马的表现相似。