基于气相色谱-质谱联用技术检测阻塞性睡眠呼吸暂停儿童血浆代谢变化的研究

通过气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术研究阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea,OSA)儿童血浆代谢物的变化,以寻找儿童OSA的候选代谢标志物及诊断方法。选取在我院确诊为OSA的儿童5例及健康儿童7例,进行多导睡眠监测(polysomnography,PSG)检查,次日清晨抽取静脉血3 mL后利用GC-MS对差异代谢物进行鉴定分析,并富集相应的代谢通路。结果发现,与健康对照组相比,OSA患儿共筛选出105种潜在的差异代谢物,表达上调有65个,表达下调有40个;差异代谢物富集在29条代谢信号通路,其中12条具有显著差异,包括丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、柠檬酸盐循环、色氨酸代谢、组氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成等。OSA患儿血浆中氨基酸、脂肪酸和碳水化合物等代谢物含量的明显变化可能是OSA儿童发病的潜在机制。

麻黄碱通过调控TGF-β1/NF-κB信号通路抑制小鼠的气道炎症反应

为了研究麻黄碱通过调控转化生长因子β1/核因子κB (transforming growth factor-β1/nuclear factor-κB,TGF-β1/NF-κB)信号通路对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响,将BALB/c小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、麻黄碱低剂量组、麻黄碱高剂量组和地塞米松组,并利用卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)联合氢氧化铝腹腔注射法构建小鼠哮喘模型。药物处理14 d后,通过无创性肺功能检测法测量小鼠气道反应性,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE staining)观察小鼠肺组织病理情况,采用瑞氏-吉姆萨染色法分析小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中的炎症细胞比例,利用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清OVA特异性免疫球蛋白E (immunoglobulin E, Ig E)的表达水平及BALF中炎症因子的表达水平,利用免疫印迹法检测小鼠肺组织TGF-β1/NF-κB通路相关蛋白质的表达水平。结果显示,麻黄碱可以降低哮喘小鼠血清中OVA特异性Ig E及BALF中白细胞介素(interleukin, IL)-4、IL-5、IL-6、IL-13、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达水平,并显著抑制肺组织中TGF-β1/NF-κB通路相关蛋白质的表达,从而显著抑制由OVA诱导的小鼠气道高反应性,并改善哮喘小鼠的肺部炎症。

阿奇霉素在慢性气道疾病中对气道黏液高分泌作用的研究进展

气道黏液高分泌是多种慢性气道疾病的重要病理生理及临床表现,是影响疾病预后及转归的独立危险因素。阿奇霉素可有效预防或减少慢性气道疾病急性加重,抑制慢性气道疾病气道黏液高分泌状态,但具体机制尚未完全明确,可能与阿奇霉素抑制黏蛋白MUC5AC的合成和分泌、抑制细菌生物膜形成等作用有关。该文总结了阿奇霉素抑制气道黏液高分泌的可能作用机制及其在慢性气道疾病的应用现状,以期为阿奇霉素的后续研究及临床应用提供诊疗参考。

温度和营养对夜蛾黑卵蜂成蜂寿命和繁殖习性的影响

夜蛾黑卵蜂是草地贪夜蛾卵期的重要寄生蜂,在草地贪夜蛾的生物防治中发挥重要作用。明确温度和营养对夜蛾黑卵蜂成蜂寿命和繁殖习性的影响,对促进草地贪夜蛾的生物防治具有重要意义。本研究设置4、10和26℃3个温度条件及质量分数为10%、20%、40%蔗糖水,质量分数为10%、20%、40%蜂蜜水6个营养条件,研究不同处理条件下夜蛾黑卵蜂雌蜂的寿命、存活率、产卵行为、产卵量、子代羽化率和雌性比。结果表明,4℃为夜蛾黑卵蜂最佳冷藏温度,10℃次之;40%蔗糖水为最佳营养条件,20%蔗糖水次之。4和10℃下,冷藏1、3、5、10 d,同时饲喂20%或40%蔗糖水时,雌蜂的产卵时间与对照组相比大多差异不显著,但产卵量显著低于对照组;子代羽化率和雌性比随冷藏天数增加出现下降趋势。

白花灯笼乙醇提取物对哮喘相关症状的影响及作用机理

哮喘是以气道高反应性(AHR)、气道重塑和气道炎症为特征的炎症性疾病.白花灯笼(Clerodendrum fortunatum L.)是息喘丸成分之一.该文探究了白花灯笼乙醇提取物(EECF)对哮喘相关症状的缓解作用.利用肌张力换能器以及肺功能仪来探究EECF对AHR的影响.结果表明,EECF可以通过影响L-VDCCs、NSCCs、NCX等离子通道来降低胞内Ca^(2+)水平,缓解由高钾或ACh诱导的气管平滑肌痉挛,降低AHR.为进一步探究EECF对气道重塑和气道炎症的影响,建立哮喘小鼠模型,展开系列实验.实验结果表明,EECF可以改善哮喘引起的肺部肿胀,降低哮喘小鼠呼吸系统阻力值(R_(rs)),逆转Th1/Th2失衡,缓解气道重塑和气道炎症.该文初步阐明了EECF在哮喘治疗中的潜在作用及其可能的机制.研究结果提示EECF有望作为新药被应用于治疗哮喘.

真鲷耗氧率的初步研究

应用测定流水中溶氧量的方法 ,对真鲷耗氧率进行研究 .结果表明 :真鲷耗氧率随水温的升高而升高 ,鱼平均体重 1 2 0 .6～ 1 3 2 .4g,水温 1 9℃时 ,按鱼体重计 (下同 ) ,耗氧率为 2 .677μg/(g·min) ;2 9℃时 ,耗氧率达 5 .841 μg/(g·min) .真鲷的耗氧量随个体的增大而增大 ,耗氧率则随个体的增大而降低 .在水源 pH7.4、盐度 2 1、水温 1 9℃条件下 ,鱼平均体重 1 2 9.5 g ,耗氧率存在昼夜变化 ,1 7∶0 0耗氧率最高 ,为 (3 .877±0 .2 5 7) μg/(g·min) ,0 7∶0 0耗氧率最低 ,为 (1 .0 3 1 ± 0 .2 5 5 ) μg/(g·min) .真鲷白天的平均耗氧率为 2 .1 62 μg/(g·min) ,夜间的平均耗氧率为 2 .2 71 μg/(g·min) ,其代谢水平的昼夜变化不明显 .

盐度对方斑东风螺耗氧率和排氨率的影响

采用实验生态学方法研究盐度对方斑东风螺Babylonia areolata耗氧率和排氨率的影响。根据方斑东风螺个体大小设立A、B、C(壳高分别为6.86±0.24、4.75±0.37、3.15±0.12cm,软体部干重分别为11.064±0.361、4.245±0.690、2.015±0.122 g)3组,盐度设13、18、23、28、33等5个梯度,实验水温为27—28℃。结果表明:(1)盐度、个体大小对方斑东风螺的耗氧率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的耗氧率都随盐度的升高而增加;当盐度升至33时,耗氧率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重耗氧率(O)之间的关系符合幂函数方程O=aWb,其中a值的范围为1.365 5—3.072 2,平均值是2.236 8,b值的范围为-0.195 2—-0.093 6,平均值为-0.130 6。(2)盐度、个体大小以及二者的交互作用均对方斑东风螺的排氨率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的排氨率随着盐度的升高而增加;当盐度升至33时,排氨率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重排氨率(N)之间的关系也符合幂函数方程N=c Wd,其中c值的范围为261.769 4—360.427 9,平均值为320.643 4,d值的范围是-0.325 3—-0.189 0,平均值是-0.248 5。(3)单位体重耗氧率和排氨率与盐度(S)、软体部干重(W)的二元线性回归方程分别为:O=1.208-0.039W+0.039S(R=0.578,F=10.517,显著性概率=0.000)、N=-210.442-9.255W+2.965S(R=0.813,F=40.834,显著性概率=0.000)。

刺参呼吸树的超微结构观察与研究

用光镜、扫描电镜和透射电镜观察研究健康刺参(Apostichopus japonicus)呼吸树的形态结构,并观察研究濒死刺参呼吸树的异常,结果显示:刺参呼吸树由外向内依次为体腔上皮、肌层、血腔、内皮细胞和中央腔。体腔上皮细胞游离面有长而不规则的微绒毛,细胞上部吞饮小泡丰富,细胞中常见吞噬体。内皮细胞表面有各种形状的细胞突起,细胞顶浆分泌活跃,细胞内质膜小泡丰富。体腔上皮细胞和内皮细胞中丰富的吞饮小泡和质膜小泡提示这两种细胞具有吸收功能。体腔上皮和内皮下连续成层的基膜围成呼吸树中封闭的血腔。内皮层与内皮基膜构成呼吸树的呼吸膜,由泄殖腔进入呼吸树中央腔的海水和呼吸树血腔中的血液经此气-血屏障进行气体交换,完成呼吸作用。体腔上皮与上皮下基膜构成体腔液-血液屏障,刺参的体腔液与呼吸树血腔中的血液经此屏障进行物质交换。呼吸树还在渗透压调节和代谢产物排泄中起作用。在濒死刺参的呼吸树中,纤毛虫大量积聚在中央腔中并附着在内皮层上,导致呼吸作用不能正常进行,这可能是当养殖水体恶化时造成刺参患病并死亡的重要原因之一。

钾通道在大鼠支气管平滑肌张力调控中作用的研究

目的 :探讨延迟整流钾通道 (Kv) ,高电导钙激活钾通道 (BKCa)和ATP敏感钾通道 (KATP)在大鼠支气管平滑肌张力调控中的作用。方法 :以特异性钾通道阻断剂为工具 ,采用体外等长张力测定观察钾通道对静息和收缩状态下支气管张力的影响。结果 :①KV阻断剂 4 aminopyridine(4 AP)诱发大鼠支气管平滑肌产生浓度依赖性收缩反应 ,而BKCa阻断剂tetraethylammonium(TEA)和KATP阻断剂 glibenclamide(Glib)对其无影响。②去除上皮对 4 AP诱发大鼠支气管平滑肌收缩反应无影响 ,而钙通道阻断剂nifedipine对其有显著抑制效应。③在 0 .1mmol/L组胺或 50mmol/LKCl诱发支气管平滑肌收缩之前或之后 ,加入TEA(1 ,5mmol/L)或 0 .1mmol/L 4 AP均显著增强二者诱发的收缩反应 ;而Glib(1 0 μmol/L)对其无明显影响。 结论 :Kv参与大鼠支气管平滑肌静息张力的调控 ,而BKCa和KATP对其无影响。

黄颡鱼仔、稚、幼鱼耗氧率及氨氮排泄率的初步研究

本文测定了不同温度(20、24、28、32℃)下黄颡鱼仔、稚、幼鱼的耗氧率和氨氮排泄率。结果表明,黄颡鱼的耗氧率、氨氮排泄率随体质量增大而降低,随温度升高而增大;体质量、温度与耗氧率和氨氮排泄率的关系可用RO=0.0224T0.6428積0.1284W、RN=0.2654T0.4326積0.1417W表示。

纤维连接蛋白或精甘天冬氨酸肽促进兔支气管上皮细胞NO合成

为验证细胞外基质成分纤维连接蛋白 (fibronectin ,Fn)对气道上皮细胞具有调控作用 ,本文用硝酸还原酶法测定了原代培养的兔支气管上皮细胞 (bronchialepithelialcells,BEC)的一氧化氮 (nitricoxide ,NO)释放 ,并测定了细胞内一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthesase ,NOS)活性 ,观察纤维连接蛋白、精 甘 天冬氨酸肽 (Arg Gly Asppep tide ,RGD)处理的影响 ,设置臭氧攻击组为阳性对照。结果 :(1)臭氧攻击 2h后 ,NO释放增多 (P <0 0 1,n =7) ,Fn (15 μg/ml)也能增加NO释放 (P <0 0 1) ,并被钙调素抑制剂N (6 氨基己烷 ) 5 氯 1 萘酚 磺酰胺 (N (6 Amino hexyl) 5 chloro 1 naphthalene sulfonamide ,W7) (10 -5mol/L)所阻断 (P <0 0 1) ;(2 )Fn (5～ 2 0 μg/ml)及RGD (15～ 6 0μg/ml)均显示对NO释放量的剂量依赖性促进作用 (分别为r=0 85和r =0 89) ;(3)Fn (15 μg/ml)明显提高BEC的NOS活性 (P <0 0 1,n =7) ,此效应也能被W7阻断 (P <0 0 1)。Fn及RGD对NOS活性的上调有量 效关系 ,分别为r=0 93及r=0 90。结果提示 ,Fn及其特殊识别片段RGD肽与BEC整合素分子的结合 ,可上调细胞的NOS活性及NO释放 ,其效应发挥与钙调素途径有关。

血管活性肠肽对肺表面活性物质结合蛋白A表达的影响

目的 :研究血管活性肠肽 (VIP)对肺表面活性物质结合蛋白A(SP A)表达的影响以及VIP调控SP A表达的细胞内信号转导途径。方法 :运用免疫组织化学和RT PCR技术研究VIP对SP A表达的影响 ;并进一步运用受体拮抗、蛋白激酶抑制、反义寡核苷酸阻断等手段探讨VIP促进SP A表达的信号转导途径。结果 :①VIP(10 -8mol/L)促进肺泡Ⅱ型细胞 (ATⅡ )细胞中的SP A蛋白表达和提高肺组织SP AmRNA含量 :②VIP受体拮抗剂 (10 -6mol/L)可取消VIP(10 -8mol/L)促进SP A表达的效应 ;③蛋白激酶C抑制剂H7(10 -5mol/L)和c fos基因的反义寡核苷酸 (9× 10 -6mol/L)均可阻断VIP促进SP A表达的作用。结论 :VIP通过其受体促进SP A的表达 ,PKC及c fos蛋白在介导VIP促进SP A表达的细胞内信号转导过程中起重要作用。

条纹斑竹鲨耗氧率的研究

对条纹斑竹鲨耗氧率的昼夜变化进行了研究,并对其在不同水温、不同规格条件下的耗氧率和窒息点进行了测定.结果表明:1)条纹斑竹鲨的耗氧率昼夜变化并不明显,但具有明显的高峰和低谷,低谷值出现在02:00和09:00,其平均值为0.110 mg/(g·h),明显低于日平均耗氧率0.213 mg/(g·h);耗氧率高峰期出现在15:00和21:00,其平均值为0.462mg/(g·h),明显高于日平均耗氧率;2)平均体重为99.29 g的条纹斑竹鲨,耗氧量(Yc)和耗氧率(Ycr)随着温度(T)的升高,均呈上升态势,并与水温呈幂函数关系,其关系式分别为:Y:=0.542T1.076,Ycr=2.576 T1.335;3)在水温为22.5～24℃条件下,条纹斑竹鲨的耗氧量(Yc)随体重(W)的增大而增大,耗氧率(Ycr)则相反,随体重增加而减小,但与体重均呈幂函数关系,其关系式分别为:Yc=3.148W0.416,Ycr=3.192 W-0.587;4)在水温为22.5～24℃时,平均体重在50.00～466.50 g的条纹斑竹鲨,其窒息点范围为0.176～0.608 mg/L,而其窒息点与水温的关系并未显示出规律性.

血管活性肠肽、表皮生长因子上调支气管上皮细胞bcl-2基因表达

为探索肺内调节肽血管活性肠肽（ＶＩＰ） 和表皮生长因子（ＥＧＦ） 抗氧化保护的基因机制， 用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ） 及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 杂交等方法检测原代培养的兔支气管上皮细胞（ＢＥＣ） 内ｂｃｌ２ 和ｃｍｙｃ 基因的表达情况， 观察ＶＩＰ、ＥＧＦ及热应激对这两个基因表达的影响。结果显示：（１） 基础情况下ＢＥＣ内有ｂｃｌ２ 和ｃｍｙｃ 基因的低水平表达；（２） ＥＧＦ和ＶＩＰ均明显增强ｂｃｌ２ 和ｃｍｙｃ 的转录，ＥＧＦ的作用更强， 而热应激无明显效应；（３） ｂｃｌ２ 和ｃｍｙｃ 两者的转录有显著相关性。上述结果提示，ＶＩＰ和ＥＧＦ等肺内调节肽可通过上调ｂｃｌ２ 基因表达增强支气管上皮细胞的抗氧化能力；ｃｍｙｃ 基因的编码产物可能是ｂｃｌ２ 基因转录的上游调节因子。

瘦素与呼吸系统疾病发生发展的关系

瘦素(leptin)是一种由脂肪组织肥胖基因编码的多肽激素,通过与其特异性受体结合,在中枢神经系统和周围组织发挥生物学效应。它的主要功能为抑制食欲、调节能量代谢、促进脂肪分解及降低体重。近年来研究发现瘦素除上述作用外,还参与了慢性阻塞性肺疾病、肺癌、哮喘等呼吸系统疾病的发生发展过程。因此,阐释瘦素与上述疾病的关系和可能机制,对疾病的防治和预后具有重要意义。本文综述了瘦素及其受体的分布、瘦素在肺组织中的生理作用以及瘦素与呼吸系统疾病发生发展关系的研究进展。

表皮生长因子对大鼠肺表面活性物质合成的调控及机制

目的和方法 :采用无血清成年大鼠肺组织培养 ,用液体闪烁计数器测定3H 胆碱掺入磷脂酰胆碱量 ,消化定磷法测总磷脂 ,薄层层析及薄层扫描测磷脂各组分含量变化 ,观察生理浓度表皮生长因子对成年大鼠肺表面活性物质合成的调控。结果 :① 10 -9mol/LEGF作用 8h后 ,PC合成量显著增加 ,16h达高峰 ;②EGF可显著增加总磷脂、PS特征性成分PC、PG合成 (P <0 .0 1)。而细胞膜特征性组分PE、PSe、SM、PI均无显著影响 (P >0 .0 5 ) ;③PTK抑制剂Tyrphostin 47、PKC抑制剂H7均对EGF促PS合成有阻断效应。④EGF、TP47、H7对肺组织LDH释放量无显著影响。结论 :EGF参与生理状态下成年大鼠PS合成的调控 。

一氧化氮在动物低氧适应中的生理和分子机制

近年来,国内外学者在对高原民族和高原动物低氧适应相关基因的探索中揭示了藏族的低氧适应生理机制;高含量的一氧化氮(nitric oxide,NO)舒张血管并导致高速度的血流,高速度的血流弥补了高海拔低氧。可见一氧化氮在动物低氧适应中起着重要的作用。作者对低氧条件下一氧化氮的合成、传递、生物学效应及调控表达机制进行了综述。

BCG感染对小鼠肺组织中NLRP3炎性小体相关分子表达的影响

探究牛分枝杆菌减毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染C57BL雌性小鼠后,小鼠肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain-containing 3,NLRP3)炎性小体相关分子的表达水平.设置BCG感染组和对照组,BCG感染组小鼠经气管滴注BCG菌液,对照组小鼠经气管滴注PBS缓冲溶液.BCG感染28 d后处死小鼠并摘取肺组织.经HE染色法观察并鉴定小鼠肺组织的损伤程度,通过Western blot和qRT-PCR实验检测NLRP3炎性小体相关分子的表达水平.结果表明,BCG感染后,小鼠肺组织发生炎性细胞浸润,NLRP3,ASC,Caspase-1,Caspase-11蛋白及mRNA表达量上调,表现出极显著差异(P<0.01).表明BCG感染后,小鼠肺组织发生炎性病变,并上调NLRP3炎性小体相关分子的表达水平.

内皮素-1对肺表面活性物质分泌的调控

采用离体大鼠非灌流肺，观察生理浓度内皮素-1（ET-1）对肺表面活性物质（PS）分泌的影响。结果表明，10－12和10－10mol／L的ET-1可促进PS磷脂及其主要组分磷脂酰胆碱（PC）的基础分泌；在间歇性肺扩张刺激基础上，ET－1可进一步加强磷脂和PC的分泌。蛋白激酶C（PKC）抑制剂H7可阻断ET-1的促PS分泌效应。培养的肺组织暴露于ET-1（10－12和10－10mol／L）1和4h后，肺组织ET含量显著高于对照组。结果提示，生理水平的ET-1通过PKC的介导参与肺PS分泌的调控；ET-1可诱导肺组织产生ET。