滤膜过滤法在大熊猫尿液采集及代谢组学中的应用

圈养动物尿液中含有丰富的代谢产物,是代谢组学分析中用以判定动物发情、妊娠、健康状态、应激水平及动物福利的重要生物检材。因采样困难及安全考虑,目前多选择动物离开或转移后采集遗留在圈舍地面的尿液样本,这种样本容易被污染而影响检测结果,因此探索一种低污染、方便且快捷的尿液采集和预处理方法非常必要。针对8只(3♀,5♂)圈养大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)的27份尿液样品,分别采用不做处理(对照组)、0.22μm滤膜过滤和添加叠氮钠3种预处理方法,然后通过微生物培养、核磁共振分析及代谢物推定,检验并评估了滤膜处理样品的效果。结果发现:经过滤膜处理的尿液样品培养后无细菌,3个处理组间代谢物的差异不显著;进一步的分析还发现,不同性别及年龄组大熊猫的尿液中分别发现7种和8种差异性代谢产物(p<0.05)。滤膜过滤法可作为大熊猫尿液标准化采样方法用于代谢组学分析,该结果不仅为大熊猫健康与发情状态监测和应激水平判断提供了重要支撑,也可以推广应用到其他圈养野生动物的尿液采集及代谢组学分析。

温度和规格对波纹巴非蛤耗氧率和排氨率的影响

以波纹巴非蛤(Paphia undulate)为实验材料,比较了温度和规格对其耗氧率和排氨率的影响。实验温度设为15、20、25和30℃,选择不同大小的A和B两种规格,其壳长分别为(4.35±0.19)cm和(3.53±0.15)cm。结果表明,温度对耗氧率和排氨率存在显著影响(P<0.05);规格对耗氧率存在显著影响(P<0.05),而对排氨率影响不显著(P>0.05)。在温度15～30℃,波纹巴非蛤的耗氧率随温度升高而增大。在15℃和20℃条件下,B组的耗氧率显著大于A组(P<0.05);在25℃和30℃条件下,B组的耗氧率大于A组,但差异不显著(P>0.05)。温度15～30℃,波纹巴非蛤的排氨率随温度升高而增大,但2组排氨率没有显著差异(P>0.05)。

川金丝猴尿液类固醇激素的保存时效性

尿液类固醇激素检测已经广泛运用于野生动物的生理机能、健康状况和繁殖状态的研究,由于分析条件以及样品采集时间限制,一般尿液样品需保存一段时间后才能在实验室分析,不同物种尿液类固醇在不同保存条件的保存时效有差异。本研究利用2只成年雄性和4只成年雌性的尿液样品共21份,确定川金丝猴尿液类固醇的保存时效和保存方法。结果表明:4℃时,雄性川金丝猴尿液睾酮、雌性尿液睾酮、孕酮的保存时效为7 d左右;雌性尿液雌二醇的保存时效在3 d以内。-20℃时,雄性川金丝猴尿液中睾酮的含量在60 d内保持稳定;雌性尿液中睾酮、孕酮和雌二醇的含量在60 d、45 d、60 d内保持稳定。-20℃保存川金丝猴尿液样品是一种有效、可靠的方法。

中华绒螯蟹在不同pH值环境下的氮排泄

研究不同pH值环境对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)氮排泄的影响。本研究采用直接浸浴法测定中华绒螯蟹在pH值4.5,6.0,7.5,9.0和10.5条件下的氮排泄。结果表明,在pH值9.0及其以下时,氨氮排泄无显著变化,当pH值升高到10.5时,氨氮排泄急剧下降,其排泄过程具有不连续性;亚硝酸氮、尿素氮和有机氮的排泄随pH值的升高而增加;硝酸氮的排泄同亚硝酸氮类似,但在pH值10.5时,呈下降状态;总氮的排泄随pH值升高而降低。在pH值4.5时,中华绒螯蟹的氨氮排泄量占总氮排泄量的91.0%,随着pH值上升,氨氮占总氮排泄的比例下降,而包括有机氮在内的其它形式的含氮化合物的排泄比例上升。因此,我们认为当环境pH值在9.0以下的范围波动时,不会对中华绒螯蟹的氨氮排泄带来不利影响,但过高的pH值可能会阻碍氮排泄。

栉孔扇贝三倍体与二倍体的排泄研究

从温度变化、个体大小和昼夜变化等 3个角度研究栉孔扇贝 (Chlamysfarrei)三倍体与二倍体的排泄率。结果表明 ,栉孔扇贝三倍体与二倍体的排泄率均随温度升高而增大 ;不同壳宽排泄率 (N)与温度 (t)的关系为 :N =7.2 0 33e0 .12 15t,R2 =0 .84 4 1(三倍体s组 ,壳宽约 3.2cm) ;N =8.8153e0 .10 3 1t,R2 =0 .9863(三倍体b组 ,壳宽约 4 .3cm ) ;N =6.4 2 66e0 .132 3t,R2 =0 .870 5(二倍体s组 ,壳宽约 3.0cm) ;N =7.80 55e0 .10 79t,R2 =0 .9139(二倍体b组 ,壳宽约 4 .4cm)。栉孔扇贝三倍体与二倍体的排泄率均随个体的增大而减小 ,并表现为昼高夜低 ,昼夜差异明显 (P <0 .0 5)。t检验结果 ,三倍体与二倍体栉孔扇贝的排泄率没有显著性差异 (P >0 .0 5)。

华鳈的繁殖生物学

根据野外调查和室内养殖的结果,华鳈一龄即达性成熟,绝对怀卵量在1040—5580粒之间,相对怀卵量为83.3—209.6;繁殖季节为4月下旬至7月中旬,繁殖高峰期在5月中下旬;繁殖群体主要由一、二龄组成,雌雄性比为1:1;精母细胞和卵母细胞都有分批成熟现象;卵分批产于流水中,为漂流性。最后对其繁殖习性进行了较为详细的分析。

全反式维甲酸抑制TGF-β_1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad2,3,4核转位

目的采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白(fibronectin),观察全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,atRA)对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响。方法用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad2的磷酸化,磷酸化Smad2、总Smad2/3和Smad4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响。结果atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达。atRA对TGF-β1引起的Smad2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad2、Smad2/3和Smad4核转位。结论atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad2、Smad2/3、Smad4的核转位所致。

海马齿生态浮床中泥蚶的生物沉积与呼吸排泄研究

为了研究夏季与秋季泥蚶(Tegillarca granosa)在海马齿(Sesuvium portulacastrum)生态浮床中生理生态活动,利用生物沉积物捕集器与密闭式代谢瓶,对海马齿生态浮床中不同规格泥蚶的生物沉积速率、耗氧率、排氨率和排磷率进行现场实验。结果表明,不同规格泥蚶生物沉积速率、耗氧率、排氨率和排磷率在夏、秋季有明显变化,相同规格泥蚶夏季均大于秋季,相同季节表现为:大个体组>中个体组>小个体组。夏季和秋季,泥蚶生物沉积速率变化范围分别为0.31~1.09 g/(ind·d)、0.09~0.65 g/(ind·d),耗氧率变化范围分别10.29~19.10 mg/(ind·d)、6.51~13.56 mg/(ind·d),排氨率变化范围分别为0.76~2.63 mg/(ind·d)、0.06~0.28 mg/(ind·d),排磷率变化范围分0.05~0.18 mg/(ind·d)、0.01~0.03 mg/(ind·d)。方差分析显示,季节、龄期及两者交互作用对泥蚶生物沉积速率、耗氧率、排氨率及排磷率均有显著影响。

补中益气汤对阿霉素诱导的大鼠肾病的作用

以阿霉素肾病大鼠模型为研究对象,采用了血液生化学和组织病理学方法,分析了补中益气汤对阿霉素肾病的作用和可能的机制.Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、激素组(n=10)和补中益气汤低剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和高剂量组(n=10).采用阿霉素二次尾静脉注射法(首次6mg/kg,二次3mg/kg)制作阿霉素肾病的大鼠模型.在阿霉素注射后7,21,42d将大鼠置于代谢笼中分别收集24h尿液,测定24h尿蛋白.末次给药后,眼眶取血检测肾功能指标,包括肌肝SCR(serum creatine)和尿素氮BUN(blood urea nitrogen);处死大鼠并观察肾组织病理改变.结果表明:补中益气汤可以显著减少尿蛋白的排泄并缓解肾皮质上皮细胞的病理学改变.这提示补中益气汤对阿霉素大鼠能够通过改善尿蛋白的排泄,缓解肾脏病理改变,从而起到对肾脏的保护作用.

大鼠脑穹窿下器官微量注射AngⅡ对肾近球小管Na^＋,K^＋-ATPase功能的影响

目的:探讨大鼠穹窿下器官(SFO)对外周肾小管钠泵的调节作用及机制。方法:在SFO分别微量注射血管紧张素II(AngII),其中氯沙坦(losartan)组先用AngII的1型受体(AT1)拮抗剂losartan预处理后再注射AngII;放免法检测血清中内源性洋地黄样物质(EDLS)的水平和血浆AngII水平;微分离大鼠肾脏单根近球小管,液闪法测定小管管周膜钠泵活性。结果:①SFO注射AngII后,血清中EDLS在15 min开始升高,约60 min达高峰;②肾近球小管钠泵活性在SFO注射AngII后30 min和60 min都显著下降;③用losartan预处理SFO后,再注射AngII,血清EDLS水平升高和小管钠泵活性下降的效应被显著削弱。结论:大鼠SFO注射AngII后,肾近球小管钠泵活性将下降,原因可能与SFO注射AngII后,激动SFO的AT1受体,直接或间接升高血清EDLS水平有关。

发色形成机理及白发病治疗药物研究进展

发色取决于毛发中的黑色素。发色形成过程包括3个相对独立的阶段:黑色素细胞的增殖分化、黑色素的胞内合成、黑色素的转运,3个阶段的调节机制不同。目前,促进毛发黑色素生成的物质主要有激素类、营养素类、抗氧化类以及其他作用机制类药物。本文综述了发色形成机理及抗白发病药物的研究进展,分析了发色形成机制尚未阐明的重要问题,并对抗白发病药物领域的研究方向和前景进行了展望,有助于本领域研究人员对当前发色形成机理和白发病的解决方案快速建立完整的认识。

树■排尿的昼夜节律及其在视交叉上核损毁后的变化

为探讨树视交叉上核是否参与泌尿昼夜节律的调控，对正常树及视交叉上核损毁后的树排尿的昼夜时间规律进行了观测分析。结果表明，正常树排尿呈现明显的昼夜节律———白天尿量为全天尿量的（８８５２±１５４０）％；视交叉上核损毁后，树排尿的昼夜节律明显改变———白天尿量仅为全天尿量的（６２８６±１８１８）％，同时树的尿量（特别是夜间的尿量）明显憎多。以上结果说明视交叉上核在树体内也参与了泌尿昼夜节律的调节。

ERK和P38MAPK在转化生长因子-β_1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)和P38丝裂原活化的蛋白激酶(P38MAPK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中所介导的作用。方法:用Westernblot检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及ERK和P38MAPK的磷酸化。用PD98059和SB203580分别来抑制ERK和P38MAPK的活性。结果:加入TGF-β1后,系膜细胞ERK、P38MAPK磷酸化水平逐渐增加,5小时达高峰。TGF-β1显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用PD98059预处理能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白合成,且具有浓度依赖性。SB203580预处理能降低TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,也具有浓度依赖性。结论:ERK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,而P38MAPK活化对其则可能起正性调控作用。

缓激肽促进大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达

目的:观察缓激肽(BK)对大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达的影响。方法:采用体外培养的大鼠肾系膜细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖情况;应用Westernblotting观察肾系膜细胞纤维连接蛋白的表达。结果:缓激肽促进肾系膜细胞增殖,且具有剂量依赖性。缓激肽和转化生长因子-β1皆显著增加系膜细胞纤维连接蛋白表达,并具有协同效应。结论:缓激肽可能直接促进体外培养的系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达,从而加重对肾小球的损伤。

盐度对方斑东风螺耗氧率和排氨率的影响

采用实验生态学方法研究盐度对方斑东风螺Babylonia areolata耗氧率和排氨率的影响。根据方斑东风螺个体大小设立A、B、C(壳高分别为6.86±0.24、4.75±0.37、3.15±0.12cm,软体部干重分别为11.064±0.361、4.245±0.690、2.015±0.122 g)3组,盐度设13、18、23、28、33等5个梯度,实验水温为27—28℃。结果表明:(1)盐度、个体大小对方斑东风螺的耗氧率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的耗氧率都随盐度的升高而增加;当盐度升至33时,耗氧率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重耗氧率(O)之间的关系符合幂函数方程O=aWb,其中a值的范围为1.365 5—3.072 2,平均值是2.236 8,b值的范围为-0.195 2—-0.093 6,平均值为-0.130 6。(2)盐度、个体大小以及二者的交互作用均对方斑东风螺的排氨率有显著的影响(p<0.01)。盐度在13—28之间时,3组方斑东风螺的排氨率随着盐度的升高而增加;当盐度升至33时,排氨率下降。方斑东风螺的软体部干重(W)与单位体重排氨率(N)之间的关系也符合幂函数方程N=c Wd,其中c值的范围为261.769 4—360.427 9,平均值为320.643 4,d值的范围是-0.325 3—-0.189 0,平均值是-0.248 5。(3)单位体重耗氧率和排氨率与盐度(S)、软体部干重(W)的二元线性回归方程分别为:O=1.208-0.039W+0.039S(R=0.578,F=10.517,显著性概率=0.000)、N=-210.442-9.255W+2.965S(R=0.813,F=40.834,显著性概率=0.000)。

c-Jun氨基末端激酶在转化生长因子-β_1诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在转化生长因子-1β(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)诱导肾系膜细胞合成纤维连接蛋白(fibronectin)中所介导的作用。方法用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白合成以及JNK的磷酸化。用SP600125来抑制JNK的活性。结果加入TGF-β1后,系膜细胞JNK磷酸化水平逐渐增加,5 h时达高峰,TGF-1β显著增加系膜细胞纤维连接蛋白的表达。用SP600125预处理系膜细胞能增加TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达,且具有剂量依赖性。结论JNK活化可能负性调控TGF-β1引起的纤维连接蛋白表达。

尾加压素Ⅱ对自发性高血压大鼠胸主动脉的收缩效应及其对血管平滑肌细胞内ERK_(1/2)磷酸化的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)对不同血压水平的自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉的收缩效应和U-Ⅱ对血管平滑肌细胞(VSMC)内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的影响,以进一步明确U-Ⅱ对SHR的血管效应及其可能机制。方法离体血管灌流实验测定U-Ⅱ对胸主动脉张力的影响,采用免疫荧光标记UT受体在VSMC的表达,并通过蛋白质印迹的方法观察U-Ⅱ对VSMC内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的作用。结果U-Ⅱ受体分布在VSMC上,累积浓度的U-Ⅱ对成年SHR去除内皮的胸主动脉环收缩效应明显强于WKY大鼠;在VSMC细胞内,U-Ⅱ可以浓度依赖性地激活VSMC内ERK1/2磷酸化,但对p38MAPK没有作用;ERK1/2阻断剂的应用不能阻断(肌凝蛋白轻链)MLC的磷酸化。结论U-Ⅱ对SHR离体血管表现出较强的收缩作用,可能通过ERK1/2及p38MAPK以外的其他通路参与了MLC的磷酸化以及VSMC的收缩效应。

皮肤角质层含水量的电学法测量

适当的角质层含水量是维持皮肤基本结构和功能活动的首要条件。利用皮肤角质层的电生理特性,间接测量角质层含水量的方法简便易行,已广泛运用于皮肤及化妆品领域的相关研究。本文对目前的研究进行总结,讨论不同仪器测量的异同,分析影响测量的因素,介绍角质层含水量测量的应用及与其他皮肤生理参数的关系。

雌二醇对大仓鼠胁腺抑制作用的研究

通过研究发现雌二醇对雌性大仓鼠 (Cricetulustriton)胁腺的大小和分泌活动存在明显的抑制作用。利用生理手术 ,形成 3组不同内分泌状况的鼠 :卵巢切除 (OF)、正常(IF)、和卵巢切除后又置入雌二醇硅胶管 (OEF)的雌性大仓鼠 ;经过放射免疫方法测定表明由OF、IF到OEF鼠血液雌二醇的浓度显著增高 (P <0 0 1 ) ,胁腺的重量、长度、宽度和厚度也显著减小 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ;利用气相色谱对胁腺分泌物的分析发现 ,从OF、IF到OEF鼠的胁腺分泌物的种类逐渐减少 ,有些成分尽管在 3组不同生理状况的鼠中都存在 ,但含量依次明显减少。以上结果表明雌二醇不仅能够抑制胁腺大小的增长 ,而且也抑制了胁腺的分泌活动 。

κ阿片受体激动剂U50,488H的利尿作用机制

目的观察κ阿片受体激动剂U50,488H对大鼠的利尿作用并探讨其作用机制。方法用生理学整体实验技术观察U50,488H对尿量的影响;分离大鼠肾动脉,用血管环方法测定肾血管张力的变化;应用放射免疫分析方法观察其对血浆中抗利尿激素(ADH)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和心房钠尿肽(ANP)的影响。结果静脉注射U50,488H可显著增加大鼠的尿量,并且使大鼠血浆ADH水平显著性下降;在离体水平,U50,488H可以剂量依赖性地舒张大鼠的肾动脉。以上效应均可被κ阿片受体选择性阻断剂(nor-BNI)所阻断。结论U50,488H通过激动κ阿片受体使大鼠的尿量增加,舒张肾动脉和降低ADH的分泌是其利尿的主要机制。